Vol. 62 N° 1 - Jan/Feb/Mar - 1994

ORIGINAL ARTICLE

1- An epidemiological study of leprosy infection by serology and polymerase chain reaction

Stella M. van Beers; Shinzo Izumi; Baedah Madjid; Yumi Maeda; Rosmini Day; Paul R. Klatser


A population-based study has been carried out in two adjacent villages in a highly leprosy-endemic area of South Sulawesi, Indonesia. The prevalence of clinical leprosy was 10.0 per 1000 inhabitants. A total of 1015 serum samples and 1228 nasal swab specimens were collected. IgM antibodies in blood to phenolic glycolipid-I (PGL-I) of Mycobacterium leprae were demonstrated by the gelatin particle agglutination test (MLPA) and by indirect ELISA (IgM-PGL). IgG antibodies to PGL-I (IgG-PGL) and lipoarabinomannan-B (IgG-LAM) were measured by indirect ELISA. The presence of M. leprae in nasal swab specimens was established by a polymerase chain reaction (PCR).
The seropositivity rates in the population were 32% for MLPA, 30.8% for IgM-PGL, 6.7% for IgG-PGL, and 11.6% for IgG-LAM. Seropositivity rates for MLPA and IgM-PGL were highest in the younger age groups. There was no difference in seropositivity in any of the tests between household contacts of leprosy patients and noncontacts. The seropositivity rates in the MLPA and IgM-PGL were not randomly distributed among all households. The presence of M. leprae by PCR was demonstrated in 7.8% of the nasal swab specimens. No correlation was found between the results of the PCR and serology. This study indicates that M. leprae is widespread in the population, and that in endemic areas many individuals carry M. leprae in their nasal cavities without having obvious symptoms of leprosy.
Une étude a été réalisée dans la population de deux villages adjacents dans une région à haute endémicité lépreuse de Sud-Sulawesi en Indonésie. La prévalence de la lèpre clinique était de 10,0 pour 1000 habitants. Un total de 1015 échantillons de serum et 1228 prélèvements en provenance des fosses nasales a été collecté. La présence dans le sang d'anticorps IgM visà-vis du glycolipide phénolique I (PGL-I) de Mycobacterium leprae a été démontrée par le test d'agglutination de particules de gélatine (MPLA) et par ELISA indirect (IgM-PGL). Les anticorps IgG (IgG-PGL) et le lipoarabinomannan-B (IgG-LAM) ont été mesurés par ELISA indirect. La présence de M. leprae dans les prélèvements en provenance des fosses nasales a été établie par une réaction de polymerase en chaîne (PCR).
Les taux de séropositivité observés dans la population étaient de 32% pour MPLA, 30, 8% pour IgM-PGL, 6, 7% pour IgG-PGL, et 1 1, 6% pour IgG-LAM. Les taux de séropositivité pour MPLA et IgM-PGL étaient les plus élevés dans les groupes d'âge jeunes. Il n'y avait pas de différence de séropositivité pour aucun des tests entre les contacts domiciliaires de patients lépreux et les noncontacts. Les taux de séropositivité pour le MPLA et l'IgM-PGL n'étaient pas distribués de manière aléatoire parmi l'ensemble des habitations. La présence de M. leprae à la PCR a été mise en évidence dans 7, 8% des prélèvements provenant des fosses nasales. On n'a pas trouvé de correlation entre les résultats de la PCR et la sérologie. Cette étude indique que M. leprae est largement répandu dans la population, et que dans les régions endémiques, de nombreuses personnes sont porteuses de M. leprae dans leurs cavités nasales sans avoir de symptômes évidents de lèpre.
Se efectuó un estudio poblacional en dos comunidades vecinas de un área de Sulawesi del Sur (Indonesia) con alta endemia de lepra, en donde la prevalência de lepra clínica fue de 10 por 1000 habitantes. Se colectaron un total de 1015 muestras de suero y 1228 especímenes de exudado nasal. Se buscaron anticuerpos IgM contra el glicolípido fenólico I (PGL-I) de Mycobacterium leprae usando la técnica de aglutinación de partículas de gelatina (MLPA) y un ELISA indirecto (IgM-PGL). Los anticuerpos IgG anti PGL-I (IgG-PGL) y anti-lipoarabinomanana (IgG-LAM) se midieron usando un ELISA indirecto. La presencia de M. leprae en los especímenes de exudado nasal se estableció mediante una reacción en cadena de la polimcrasa (PCR).
Los grados de seropositividad en la población fueron del 32% para MLPA, del 30.8% para IgM-PGL, del 6.7% para IgG-PGL, y del 11.6% para IgM-LAM. Los índices de seropositividad en las pruebas MLPAe IgM-PGL no estuvieron distribuidos aleatoriamente entre todos los contactos familiares. La presencia de M. leprae por PCR se demostró en el 7.8% de los especímenes de exudado nasal. No se encontró correlación entre los resultados por PCR y la scrología. Este estudio indica que M. leprae está ampliamente distribuido en la población y que en las áreas endémicas muchos individuos alojan al M. leprae en sus cavidades nasales sin tener los síntomas obvios de la lepra.

2- Incidence rates of leprosy in Karonga District, Northern Malawi: patterns by age, sex, BCG status and classification

Jorg M. Ponnighaus; Simon S. Malema; Simon Kileta; Paul E. M. Fine; Jonathan A. C. Sterne; Lyn Bliss; Rosamund J. Wilson


This paper describes incidence rates by age, sex, prior BCG status and classification in Karonga District, northern Malawi. New cases (489) were identified among 83,500 individuals followed for an average of 5 years (1.12 cases per 1000 person years). Only 29 (6%) of the incident cases were multibacillary. Incidence rates generally were higher among females than males, and increased steadily with age. Although the highest incidence rates of disease were recorded among young adults without BCG scars (males 15- 19; females 20-24), these peaks were less dramatic than those reported among young adults in The Philippines and Norway. In the absence of historical data and data on infection status, it is not possible to assess to what extent these peaks may reflect either greater exposure or greater susceptibility to disease among adolescents or young adults.
The incidence rates of leprosy among individuals with a prior recorded BCG scar were approximately half those of individuals lacking a scar, at all ages. Since BCG had been introduced into this population only during the 1970s, this provides strong evidence for the effectiveness of BCG when given to adults. It was estimated that past vaccination of approximately 40% of the district population had reduced the overall incidence rate of leprosy by 18%, and that this impact would increase with aging of the vaccinated cohorts.
A retrospective examination of the detailed records of initial examinations revealed that 62 (13%) of the incidence cases were recorded as having skin hypopigmentation or blemishes, at the site of subsequent confirmed leprosy lesions, several months or years before they were suspected of having leprosy. The nonspecificity of these lesions, some of which were probably attributable to Mycobacterium leprae infection, highlights the difficulty of diagnosing leprosy in its earliest forms.
Cet article décrit les taux d'incidence par âge, sexe, statut antérieur vis-à-vis du BCG et la classification, dans le District de Karonga, dans le nord du Malawi. Des nouveaux cas (489) ont été identifiés parmi 83.500 personnes suivies pendant une moyenne de 5 ans ( 1, 12 cas pour 1000 personnes-années). Seulement 29 (6%) des cas incidents étaient multibacillaircs). Les taux d'incidence étaient généralement plus élevés chez les femmes que chez les hommes, et augmentaient régulièrement avec l'âge. Bien que les taux d'incidence les plus élevés de la maladie étaient enregistrés parmi des adultes jeunes sans cicatrice de BCG (hommes de 15 à 19 ans; femmes de 20 à 24 ans), ces pics étaient moins spectaculaires que ceux rapportés chez les jeunes adultes aux Philippines et en Norvège. En l'absence de données historiques et de données relatives au statut vis-à-vis de l'infection, il n'est pas possible d'évaluer dans quelle mesure ces pics peuvent refléter soit une plus grande exposition, soit une plus grande suseptibilité à la maladie parmi les adolescents ou les jeunes adultes.
Les taux d'incidence de la lèpre parmi des personnes présentant auparavant une cicatrice de BCG étaient approximativement la moitié de ceux des individus qui n'avaient pas cette cicatrice, et ceci à tous les âges. Comme le BCG a été introduit dans cette population seulement durant les années 1970, ceci procure un puissant argument en faveur de l'efficacité du BCG quand il est administré à des adultes. Il a été estimé que la vaccination antérieure d'approximativement 40% de la population du District a réduit le taux global d'incidence de 18%, et cet impact devrait augmenter avec le vieillissement des cohortes vaccinées.
Un examen rétrospectif des enregistrements détaillés des examens initiaux a révélé que 62 (13%) des cas incidents avaient été notés comme ayant une hypopigmentation ou des défauts cutanés à l'endroit où, par la suite, des lésions lépreuses ont été confirmées, et ceci plusieurs mois ou années avant qu'ils n'aient été suspectés de lèpre. La non-spécificité des ces lésions, parmi lesquelles certaines étaient probablement dues à l'infection par Mycobacterium leprae met en lumière la difficulté de diagnostiquer la lèpre dans ses formes les plus précoces.
Este articulo describe la incidencia de lepra por edad y sexo, los antecedentes de la vacunación con BCG, y la clasificación de la enfermedad en el Distrito de Karonga en Malawi del Norte. En un periodo de 5 años se identificaron 489 casos nuevos entre 83,500 individuos (1.12 casos por 1000 personas/años). Sólo 29 (6%) de los casos incidentes fueron multibacilares. La incidencia fue generalmente mayor entre las mujeres que entre los hombres y aumentó en forma sostenida con la edad. Aunque las mayores frecuencias de incidencia de la enfermedad oceurrieron entre los adultos jóvenes sin cicatrices de BCG (hombres 15-19, mujeres 20-24), estas cifras fueron menos dramáticas que las reportadas para los adultos jóvenes de Noruega o Las Filipinas. En ausencia de los datos sobre antecedentes y sobre el estado de la infección no es posible establecer si estas frecuencias de infección reflejan un mayor grado de exposición o una mayor susceptibilidad a la enfermedad entre los adolescentes o los adultos jóvenes de Malawi. El grado de incidencia de la lepra entre los individuos con una cicatriz previa de BCG fue de aproximadamente la mitad de la incidencia observada en los individuos sin cicatriz a todas las edades. Puesto que la vacunación con BCG fue introducida en esta población durante los años 1970s, los resultados podrían ser una fuerte evidencia de la efectividad del BCG aplicado en adultos. Se calculó que la pasada vacunación de aproximadamente el 40% de la población de este Distrito ha reducido la incidencia global de la lepra en un 18%, y que este impacto podría incrementarse con el incremento en edad de la pobación vacunada. El examen retrospectivo de los estudios iniciales reveló que 62 de los casos incidentes (13%) fueron originalmente registrados como casos con hipopigmentación o con moretones de la piel en el sitio donde varios meses o años después aparecieron las lesiones de la lepra. La inespecificidad de tales lesiones, algunas de las cuales fueron probablemente atribuíbles al M. leprae , subrayan la dificultad del diagnóstico de la lepra en sus formas más tempranas.

3- Severe pan-sensory neuropathy in leprosy

Shubhada S. Pandya; Waman S. Bhatki


The sensory loss which occurs in leprosy is essentially cutaneous, resulting f rom centripetally ascending infection, the host cellular response and fibrosis, f rom dermal to certain mixed nerves. The hallmark is pain/ temperature and touch/pressure loss. Muscle denervation is a byproduct of mixed nerve involvement. Leprous sensory and motor neuropathy presents a stereotyped picture, with preservation of position sense, noninvolvemcnt of the large girdle muscles, and retained deep tendon reflexes. We report clinical and investigative details of 7 patients (3 males, 4 females) with mild-tomoderate polyneuritic leprosy who manifested severe proprioceptive loss in the upper limbs; the lower limbs were similarly affected in 4 of them. Tendon reflexes were absent in the ataxic limbs. No other cause was found for the ataxia. Electrophysiological studies confirmed damage to large cutaneous and muscle afferents, and a normal EMG pattern in hip and shoulder muscles. Of great interest was the histology of a lumbar sensory ganglion biopsied in a severely disabled patient. There was extensive neuron loss and degeneration and reactive proliferation of capsular cells ("nodules of Nageotte"), an inflammatory focus of lymphocytes, and no bacilli. This suggests to us that the proprioceptive loss in these patients could well be the result of an unusual "leprous ganglionitis." Further clarification of the mechanism ofganglion degeneration and the frequency of inflammation could come f rom immunohistology of tissues f rom African green monkeys with experimental polyneuritic leprosy.
La perte sensorielle qui apparaît dans la lèpre est essentiellement cutanée, résultant d'une infection ascendante centripète, de la réponse cellulaire de l'hôte, et de la libróse, des nerfs du derme à certains nerfs mixtes. La signature en est une perte de sensibilité à la douleur/température et au toucher/pression. La dénervation musculaire est une conséquence annexe de l'atteinte nerveuse mixte. La neuropathie sensorielle et motrice de la lèpre présente une image stéréotypée, avec préservation du sens de la position, la non atteinte des gros faisceaux musculaires, et la conservation des réllexes tendineux profonds. Nous rapportons les détails cliniques et d'investigations de 7 patients (3 hommes, 4 femmes) présentant une lèpre polyneuritique modérée à légère qui ont manifesté une perte proprioceptive légère dans les membres supérieurs; les membres infëreiures étaient affectés de manière similaire chez 4 d'entre eux. Les réllexes tendineux étaient absents dans les membres ataxiques. Aucune autre cause n'a été trouvée pour l'ataxie. Les examens électrophysiologiques ont confirmé des lésions aux gros afférents cutanés et musculaires, et un EMG normal dans les muscles de la hanche et de l'épaule. L'histologie d'un ganglion sensoriel lombaire biopsie chez un patient sévèrement handicapé était d'un grand intérêt. Il y avait une perte et une dégénérescence neuronique étendue et une prolifération réactionnelle de cellulescapsulaires ("nodules de Nageotte"), un foyer inflammatoire à lymphocytes, et pas de bacilles. Ceci nous suggère que la perle proprioceptive chez ces patients pourrait bien être le résultat d'une "ganglionnite léppreuse." Une meilleure compréhension du mécanisme de dégénérescence ganglionnaire et de la fréquence de l'inflammation pourrait venir de l'immunohistologie de tissus provenant de singes verts d'Afrique présentant une lèpre polyneuritique expérimentale.
La pérdida sensorial que ocurre en la lepra es esencialmente cutanea y resulta de la infección centrípeda ascendente, de la respuesta celular del huésped, y de la fibrosis que comienza en los nervios dérmicos y termina por afectar a ciertos nervios mixtos..La característica distintiva del daño es la pérdida de dolor/ temperatura y de tacto/presión. La denervation muscular es una consecuencia de la afección de los nervios mixtos. La neuropatía sensorial y motora de la lepra presenta un cuadro estereotipado, con preservación del sentido de posición, sin afección de los grandes músculos lumbares y con retención de los reflejos de los tendones profundos. Aquí reportamos los detalles clínicos e investigativos de 7 pacientes (3 hombres, 4 mujeres) con lepra polincurítica quienes desarrollaron severa pérdida propiorecepliva en los miembros superiores; los miembros inferiores fueron similarmente afectados en 4 de ellos. Los reflejos tendinosos estuvieron ausentes en los miembros atáxicos. No se encontró ninguna otra causa de la ataxia. Los estudios electrolisiológicos confirmaron el daño de los aferentes cutáneos y musculares, y un patrón electromiográlico normal en los músculos de cadera y hombros. La histología de la biopsia de un ganglion sensorial lumbar de un paciente con afección severa fue de gran interés porque se observó una extensa pérdida neurona, degeneración y proliferación reactiva de las células capsulares ("nodulos de Nageotte"), un foco inflamatorio de linfocitos, y ausencia de bacilos. Esto sugirió que la pérdida propioreceptiva en estos pacientes bien pudo ser el resultado de una rara "ganglionitis leprosa." El estudio ¡nmunohistológico de los tejidos de los monos verdes africanos con lepra polincurítica experimental podría aclarar el mecanismo de la degeneración gan- glionar y la frecuencia de inflamación.

4- Lymphangiographie evaluation of patients with clinical lepromatous leprosy on clofazimine

Shanthakumar Thomas Oommen; Madhav Vinayak Natu; Manmohan Krishan Mahajan; Randhir Singh Kadyan


Pedal edema as a possible adverse effect of clofazimine therapy in leprosy was first reported in 1990. Raasch, et al. reported their lymphangiography findings on ten patients who had clinical lepromatous leprosy in 1969. None of these patients had been on clofazimine therapy. Our study, therefore, was designed to assess the changes that might be seen in the lymphatic system of patients treated with clofazimine for the management of leprosy. Our findings are compared with those of Raasch and his colleagues.
Un oedème en pédale comme effet secondaire possible du traitement à la clofazimine dans la lèpre a été rapporté pour la première fois en 1990. Raasch et al. ont rapporté leurs observations lymphangiographiques sur 10 patients qui avaient une lèpre lépromateuse clinique en 1969. Aucun de ces patients n'avait été sous traitement à la clofazimine. Notre étude, dès lors, a été conçue pour évaluer les modifications qu'on pourrait observer dans le système lymphatique de patients traités à la clofazimine pour la lèpre. Nos observations sont comparées à celles de Raasch et de ses collègues.
El edema del pie como un posible efecto adverso del tratamiento de la lepra con clofazimine fue reportado por primera vez en 1990. Raasch, et al., publicaron en 1969 sus hallazgos linfangiográlicos en 10 pacientes que tenían lepra lepromatosa clínica. Ninguno de éstos habia sido tratado antes con clofazimina. El presente estudio se diseñó con objeto de establecer los cambios que podrían observarse en el sistema linfático de los pacientes con lepra tratados con clofazimina. Nuestros hallazgos se comparan con aquellos de Raasch y sus colaboradores.

5- Further study of the effectiveness of single doses of clarithromycin and minocycline against Mycobacterium leprae in mice

Jun-hao Xiong; Baohong Ji; Evelyn G. Perani; Corrine Petinon; Jacques-H. Grosset


The anti- Mycobacterium leprae activities of single doses of rifampin (RMP), clarithromycin (CLARI), or minocycline (MINO) alone, and various combinations of CLARI + MINO were determined in immunocompetent mice by the kinetic method. A single dose of RMP 10 mg/kg, CLARI 100 mg/kg or 200 mg/kg, MINO 25 mg/kg or 50 mg/ kg alone, or various combinations of CLARI + MINO were active. RMP was more active than the other treatments; the activity of CLARI 100 mg/kg was greater than that of 50 mg/kg, but did not differ significantly f rom that of 200 mg/kg; MINO 50 mg/kg was more active than 25 mg/kg; and none of the combinations of CLARI + MINO was more active than any of the stronger components administered alone. Therefore, both CLARI and MINO may be applied, either alone or in combination, as components of monthly administered, fully supervised, multidrug regimens for the treatment of multibacillary leprosy. Taking into account the effectiveness of the drugs and the comparative pharmacokinetic data, we propose that the optimal dosage in human trials is CLARI 1000 mg per month or MINO 200 mg per month.
L'activité anti- Mycobacterium leprae de doses unique de rifampicine (RMP), clarithromycine (CLARI), ou minocycline (MINO) administrées isolément, et diverses combinaisons de CLARI + MINO a été déterminée par la méthode cinétique chez des souris immunocompétentes. Une dose unique de RMP 10 mg/ kg, de CLARI 100 mg/kg ou 200 mg/kg, de MINO 25 mg/kg ou 50 mg/kg administrées seules, ou diverses combinaisons de CLARI + MINO étaient actives. La RMP était plus active que les autres traitements; l'activité de CLARI 100 mg/kg était plus grande que celle de 50 mg/kg, mais ne différait pas significativement de celle de 200 mg/kg; la MINO à 50 mg/kg était plus active que celle à 25 mg/kg; et aucune des combinaisons de CLARI + MINO n'était plus active qu'aucun des composants les plus puissants administrés seuls. Dés lors, la CLARI et la MINO peuvent être utilisées, seules ou en combinaison, comme composants de régimes polychimiothérapeutiques entièrement supervisés administrés mensuellement pour le traitement de la lèpre multibacillaire. Prenant en compte l'efficacité des médicaments et les données comparatives de pharmacocinétique, nous proposons comme dosage optimal pour les essais chez l'homme 1000 mg par mois de CLARI ou 200 mg par mois de MINO.
Utilizando cl método cinético y ratones inmunocompetentes, se determinó la actividad anti- Mycobacterium leprae de dosis únicas de rifampina (RMP), de claritromicina (CLARI), o de minociclina (MINO), administradas solas o en varias combinaciones de CLARI + MINO. Una sola dosis de RMP ( 10 mg/kg), de CLARI (100 ó 200 mg/kg), o de MINO (25 ó 50 mg/kg), y varias combinaciones de CLARI + MINO fueron activas contra cl M. leprae pero la RMP fue la más activa. La actividad de CLARI fue mayor a la dosis de 100 mg/kg que a la de 50 mg/kg pero no difirió significativamente de aquella de 200 mg/kg; MINO a 50 mg/ kg fue más activa que a 25 mg/kg. Ninguna de las combinaciones de CLARI + MINO fue más activa que los fármacos más potentes administrados solos. Por lo tanto la CLARI como la MINO podrían emplearse, solas o combinadas, como componentes de la poliquimioterapia administrada mensualmente para el tratamiento de la lepra multibacilar. Tomando en cuenta la efectividad de las drogas y los datos farmacocinéticos comparativos, proponemos que la dosis óptima en los ensayos con humanos podría ser de 100 mg/mes de CLARI o de 200 mg/mes de MINO.

6- Therapeutic efficacy of benzoxazinorifamycin, KRM-1648, in combination with other antimicrobials against Mycobacterium leprae infection induced in nude mice

Hajime Saito; Haruaki Tomioka; Katsumasa Sato; Satoshi Dekio


In this study, the in vitro and in vivo anti- Mycobacterium leprae activity of the newly developed benzoxa/inorifamycin, KRM1648, in combination with clofazimine (CFZ) or dapsonc (DDS) was evaluated. in vitro anti- M. leprae activities of KRM-1648, CFZ, and DDS along with their combinations were measured by the BACTEC 460 TB System. KRM-1648 (0.01 µ g/ml), CFZ (0.5 µ g/ml), and DDS (2.0 µ g/ml) exhibited a significant anti- M. leprae activity, reducing growth index (GI) values by 78%, 30%, and 35% by day 18, respectively. Combinations of KRM-1648 with cither CFZ or DDS, or both caused only a slight increase in the efficacy. BALB/c nude mice infected subcutancously with 1 X 106 of M. leprae Thai-53 strain and test drugs were given to mice by gavage once daily six times per week for up to 50 days, f rom day 31 to day 80. Animals were observed for the growth of organisms in the hindfoot pad during the 12 months following infection. KRM-1648 given at the dose of 0.001 mg/mouse exhibited potent antileprosy activity. KRM-1648 exhibited a significant combined effect with cither CFZ or DDS, or both against M. leprae infection, except that there was no significant difference in efficacy between KRM-1648 + CFZ and CFZ alone. Furthermore, the efficacy was most increased in the three-drug regimen KRM-1648 + CFZ + DDS.
Dans cette étude, on a évalué l'activité anti- Mycobacterium lepraein vitro et in w'vodu nouveau composé qu'est la benzoxazinorifamycine, le KRM-1648, en combinaison avec la clofaziminc (CFZ) ou la dapsone (DDS). Les activités in vitro du KRM-1648, du CFZ et de la DDS, ainsi que de leurs combinaisons ont été mesurées par le système BACTEC 460 TB. Le KRM 1648 (0,01 µ g/ml), le CFZ (0, 5 µ g/ml) et la dapsonc (2,0 µ g/ml) ont montré une activité anti- M. leprae significative, réduisant les valeurs de l'indice de croissance (IC) de respectivement 78%, 30% et 35% au dixhuitième jour. Les combinaisons du KRM-1648 avec le CFZ, la DDS ou les deux n'ont entraîné qu'une légère augmentation de l'efficacité. Des souris nues BALB/c ont été infectées par voie sous-cutanée avec 1 x 106 M. leprae de la souche Thai-53, et les substances testées leur ont été données par gavage une fois par jour et six jours par semaine jusqu'à 50 jours, du jour 31 au jour 80. On a observé pour la croissance des organismes dans le coussinet des pattes postérieures des animaux durant les 12 mois qui ont suivi l'infection. Le KRM1648 à la dose de 0,001 mg souris a montré une puissante activité anti-lépreuse. Le KRM-1648 a montré un effet combiné significatif avec le CFZ, la DDS, ou les deux, vis-à-vis de l'infection à M. leprae , si ce n'est qu'il n'y avait pas de différence significative d'efficacité entre le KRM-1648 + CFZ et le CFZ seul. De plus, l'efficacité était maximale pour le régime comprenant les trois substances KRM-1648 + CFZ + DDS.
En este estudio se evaluó in vivo e in vitro , la actividad anti- Mycobacterium leprae de la droga benzoxazinorifamicina (KRM-1648) administrada sola, o combinada con clofazimina (CFZ) o con dapsona (DDS). La actividad de esta droga y sus combinaciones se midió por el sistema BACTEC 460 TB. Hacia el día 18, la KRM-1648 (0.01 µ g/ml), la CFZ (0.5 µ g/ml) y la DDS (2.0 µ g/ml), exhibieron una significante actividad anti-M. leprae al reducir su índice de crecimiento en un 78%, un 30%, y un 35%, respectivamente. La combinación de KRM-1648 con CFZ, con DDS, o con ambas drogas, condujo sólo a un ligero incremento de su eficacia. Para los estudios in vivo , se inyectaron ratones BALB/c desnudos con 1 x 106 M. leprae de la cepa Thai-53 por la vía subcutánea y 31 días después se trataron con las drogas administradas junto con la dicta, una vez al día, 6 veces por semana, hasta completar 50 días. Los animales se examinaron para establecer la multiplicación de los bacilos en las almohadillas plantares durante los 12 meses siguientes a la infección. La droga KRM-1648 administrada a la dosis de 0.001 mg por ratón exhibió una potente actividad antileprosa. Combinada con CFZ, con DDS, o con ambas, la droga exhibió un significante efecto antilcproso combinado, excepto que no hubo ninguna diferencia significativa entre la eficacia de la mezcla KRM 1648 + CFZ y la eficacia de la CFZ sola. La eficiencia antilcprosa se incrementó en forma máxima cuando se administraron las 3 drogas juntas.

7- IgG response to purified 65- and 70-kDa mycobacterial heat shock proteins and to antigen 85 in leprosy

Pascal Launois; M'Bayame N'Diaye Niang; Annie Drowart; Jean-Paul Van Vooren; Jean-Louis Sarthou; Thibault Lalu; Jacques Millan; Kris Huygen


IgG antibody response to mycobacterial heat-shock proteins (hsp) (the 70-kDa antigen f rom Mycobacterium tuberculosis and M. bovis BCG; the 65-kDa antigen f rom M. leprae and M. bovis BCG) and to the fibronectin-binding antigen 85 f rom M. bovis BCG was analyzed in a dot-blot assay in plasma f rom leprosy patients and their contacts. Most plasma-whatever the status of the subjects-reacted to the hsp 70; 8 of 9 (89%) of paucibacillary patients recognized the 65 mycobacterial hsp but only 2 of 9 (22%) recognized the antigen 85. In contrast, 12 of 12 (100%) of multibacillary patients reacted with the antigen 85 and only 4 of 12 (33%) reacted to the hsp 65 f rom M. leprae . On the one hand, 7 of 25 (28%) of the lepromin-positive contacts and 2 of 9 (22%) of the lepromin-negative contacts recognized the antigen 85. On the other hand, 11 of 25 (44%) of the lepromin-positive contacts but only 1 of 9 (11%) of the lepromin-negative contacts reacted to the hsp65 f rom M. leprae . Finally, very few (10%) of the lepromin-positive controls showed a positive reaction to the M. leprae 65-kDa antigen, the BCG 65-kDa antigen, and the 85-kDa antigen of BCG. Thus, differences in binding to the hsp65 f rom M. leprae and to antigen 85 could be helpful in distinguishing different forms of the disease.
Les réponses d'anticorps IgG aux "heat-shock" protéines mycobactériennes (hsp) l'antigène de 70-kDa de Mycobacterium tuberculosis et du BCG de M. bovis ; l'antigène de 65-kDa de M. leprae et du BCG de M. bovis ) et à l'antigène 85 liant la fibronectine provenant du BCG de M. bovis a été analysée par "dot-blot" sur du plasma de patients lépreux et leurs contacts. La plus grande partie du plasma-quel que soit le statut des sujets-réagissait au hsp 70; huit des neuf patients paucibacillaires (89%) ont reconnu le hsp mycobacterien 65, mais seulement duex des neuf (22%) ont reconnu l'antigène 85. Par contraste, 12 des 12 patients multibacillaires (100%) ont réagi avec l'antigène 85 et seulement 4 sur 12 (33%) ont réagi au hsp 65 provenant de M. leprae . D'une part, 7 des 25 (28%) des contacts positifs à la lépromine et 2 des 9 (22%) des contacts négatifs à la lépromine ont reconnu l'antigène 85. D'autre part, 11 des 25 (44%) des contacts positifs à la lépromine, mais seulement 1 des 9 (11%) des contacts négatifs à la lépromine ont réagi au hsp 65 provenant de Al. leprae. Finalement, très peu (10%) des témoins positifs à la lépromine ont montré une réaction positive à l'antigène de 65 kDa de At. leprae, à l'antigène de 65 kD du BCG, et à l'antigène de 85 kD du BCG. Les différences dans la liaison au hsp 65 de M. leprae et à l'antigène 85 pourraient aider à faire la distinction entre différentes formes de la maladie.
Se analizó la respuesta en anticuerpos IgG contra las proteínas de choque térmico de 70 kD de Mycobacterium tuberculosis y M. bovis , BCG, contra la proteína de 65 kD de M. leprae y M. bovis BCG, y contra el antigeno 85 enlazante de la fibronectina, en cl plasma de pacientes con lepra y de sus contactos. La mayoría de lo plasmas-independientemente del estado de los pacientes-reaccionaron con la proteína de 65 kD pero sólo 2 de 9 (22%) reconocieron al antígeno de 85 kD. En contraste, 12 de 12 (100%) de los pacientes multibacilares reaccionaron con el antígeno 85 y sólo 4 de 12 (33%) reaccionaron con la proteína de 65 kD del M. leprae . Siete de 25 (28%) contactos lepromino-positivos y 2 de 9 (22%) lepromino-negativos reconocieron al antígeno 85. Por otro lado, 11 de 25 (44%) contactos lepromino-positivos y sólo 1 de 9 (11%) contactos lepromino-negativos reaccionaron con la proteína de 65 kD del M. leprae . Finalmente, muy pocos de los controles lepromino-positivos (10%) mostraron una reacción positiva con el antígeno de 65 kD de M. leprae , con el antígeno de 65 kD del BCG, y con el antígeno de 85 kD del BCG. Así, las diferencias en el reconocimiento de la proteína de 65 kD del M. leprae y del antígeno 85, podrían ser de utilidad para distinguir las diferentes formas de la enfermedad.

8- Denatured muscle grafts for nerve repair in an experimental model of nerve damage in leprosy. 1. A functional and morphometric study

Gail E. de Blaquiere; Jill Curtis; Jerome H. Pereira; John L. Turk


The effectiveness of denatured autologous muscle grafts for nerve repair in an experimental model of leprosy was assessed. Nerve damage resembling that caused by Mycobacterium leprae in humans was induced by the injection of cobalt-irradiated M. leprae into the tibial nerve of guinea pigs. At the time of maximum functional loss, caused by the formation of a granuloma within the nerve, the area of damage was excised and a denatured autologous muscle graft was used to repair the nerve. Assessment of nerve regeneration through the graft was made using clinical, electrophysiological and microscopic morphometric analysis at intervals up to 20 weeks. The results were compared with regeneration after grafting of a normal nerve. Clinically, some motor and sensory recovery occurred in all of the graft recipients in the normal nerve by 8 weeks, and by 11 weeks in the recipients of grafts in the granulomatous nerve. Full sensory recovery occurred in all but one animal by 20 weeks. Motor function recovered to near normal levels at 14 weeks after repair of the normal nerve but, at 20 weeks, there was variation in motor recovery after repair of the granulomatous nerve. Electrophysiology showed increased conduction velocity of the nerve fibers at each timepoint. The conduction velocity at 8 weeks after grafting of the normal nerve was similar to that at 12 weeks after grafting of the granulomatous nerve. Morphometry showed an increasing number of myelinated fibers repopulating the distal nerve up to 20 weeks. Myelin fiber numbers, at this time, were one third of normal after repair of the granulomatous nerve and two thirds after repair of the normal nerve. This study demonstrates that denaturcd autologous muscle grafls enable tlie regeneration and functional rccovery of nerves dcspitc their bcing damaged by mycobacteria-induced granulomas, but the damage causes some delay.
On a evalué refficacité de greffes dénaturécs de muscles autologues pour la réparation nerveuse dans un modele experimental de la lepre. Des lésions nerveuses ressemblant à celles causées par le Mycobacterium leprae chez l'homme ont été produites par l'injection de M. leprae irradiés au cobalt dans le nerf tibial de cobayes. Au moment de la perte maximale de fonction, causée par la formation d'un granulome à l'intérieur du nerf, la zone endommagée a été excisée et un greffon dénaturé de muscle antologue a été utilisé pour réparer le nerf. Une évaluation de la régénération nerveuse à travers le greffon a été faite sur base d'analyses morphométriques cliniques, électrophysiologiques et microscopiques à intervalles, jusqu'à la vingtième semaine. Les résultats ont été comparés avec la régénération après la greffe sur un nerf normal. Cliniquement, une certaine récupération motrice et sensorielle est survenue chez tous les receveurs de greffe dans le nerf normal à la huitième semaine, et à la onzième semaine chez les receveurs de greffe dans le nerf granulomateux. Une récupération sensorielle complète survint chez tous les animaux à l'exception d'un seul à la vingtième semaine. La fonction motrice était revenue à des niveaux pratiquement normaux 14 semaines après réparation du nerf normal, mais à 20 semaines, il y avait des variations dans la récupération motrice après intervention sur nerf granulomatcux. L'électrophysiologie a montré une augmentation de la vitesse de conduction des fibres nerveuses à chaque moment. La vitesse de conduction 8 semaines après la greffe du nerf normal était semblable à celle observée 12 semaines après la greffe sur le nerf granulomatcux. La morphométrie a montré une augmentation des libres myélinisées recolonisant le nerf distal jusqu'à la vingtième semaine. A ce moment, le nombre des fibres de myéline était le tiers de la normale après réparation du nerf granulomatcux, et deux-tiers après réparation du nerf normal. Cette étude démontre que les greffons dénaturés de muscle autologue peuvent produire la régénération et la récupération fonctionnelle des nerfs malgré qu'ils aient été endommagés par des granulomes provoqués par des mycobactérics, mais le dommage cause un certain retard.
Usando un modelo experimental de la lepra se estableció la efectividad de los injertos autólogos de músculo desnaturalizado para promover la reparación de nervios. La inyección de Mycobacterium leprae irradiado con cobalto en el nervio tibial del cobayo, condujo al desarrollo de una lesión nerviosa similar a la causada por M. leprae en el humano. En el tiempo de máxima pérdida funcional (causada por la formación de un granuloma dentro del nervio) se extirpó el área dañada y se substituyó por un implante autólogo de músculo desnaturalizado con objeto de reparar el nervio. El grado de regeneración nerviosa se estableció por criterios clínicos, electrolísiológicos y morfométrico-microscópicos realizados a intervalos hasta cubrir 20 semanas. Los resultados se compararon con la regeneración observada cuando el injerto de músculo desnaturalizado se hizo en un nervio normal. Mientras que todos los recipientes del injerto en el nervio normal mostraron un cierto grado de recuperación motora y sensorial hacia la octava semana, los injertados en el nervio granulomatoso mostraron un grado comparable de recuperación sólo hasta la onecava semana. Hacia las 20 semanas todos los animales, menos uno, mostraron completa recuperación sensitiva. La función motora se recuperó a niveles casi normales 14 semanas después de la reparación del nervio normal, en cambio, los animales en los que se hizo la reparación del nervio granulomatoso mostraron variaciones en la recuperación motora aun a las 20 semanas. La electrofisiología mostró una incrementada velocidad de conducción délas fibras nerviosas en cada tiempo estudiado. La velocidad de conducción a las 8 semanas en el nervio normal injertado fue similar a la velocidad de conducción a las 12 semanas del injerto en el nervio granulomatoso. La morfometria mostró que el número de libras mielinizadas en el nervio distal aumentó progresivamente hasta las 20 semanas. Los números de libras de miclina, en este tiempo, fueron un tercio de lo normal después de la reparación del nervio granulomatoso y de dos tercios después de la reparación del nervio normal. Este estudio demuestra que los injertos de músculo autólogo desnaturalizados permiten la regeneración y la recuperación funcional de los nervios, no obstante que estos hayan sido dañados por los granulomas inducidos por las micobaclerias, aunque el daño es causa de cierto retraso en la recuperación.

9- Denatured muscle grafts for nerver repair in an experimental model of nerve damage in leprosy. 2. Recovery of peripheral peptide-containing nerves assessed by quantitative immunohistochemical study

Luis Santamaria; Giorgio Terenghi; Jill Curtis; Gail E. de Blaquiθre; Jerome H. Pereira; John L. Turk; Julia M. Polak


A marked depiction of neuropeptide-immunoreactive nerves, a consequence of the nerve damage which is commonly found in leprosy, has been reported in peripheral tissues of leprosy patients and of a leprosy animal model. The aim of this study was to investigate peripheral reinnervation following a denatured autologous muscle graft in an animal model of leprosy nerve damage. Possible reinnervation of the foot-pad skin was studied by immunohistochemistry using antisera to the neuronal marker protein gene product 9.5 (PGP), the neuropeptides calcitonin gene-related peptide (CGRP), substance P (SP), vasoactive intestinal peptide (VIP), and the C-flanking peptide of neuropeptide Y (CPON). The extent of the reinnervation process was assessed by image analysis quantification at different time points. At 8 weeks after muscle grafting, there were small numbers of immunoreactive nerves (p < 0.05). At 12, 16, and 20 weeks postoperatively there was a gradual increase in all immunostaining. At 20 weeks, no significant difference was found for PGP-, CGRP-, and SP-immunoreactive nerves in the epidermal and subepidermal layers compared to control (contralateral) tissue. In experimental tissue the recovery of immunoreactive nerves around sweat glands took longer (up to 12 weeks) than in other skin compartments, but after that time the recovery was rapid and at 20 weeks no difference was measured for VlP-immunoreactive nerves in comparison with controls. Around blood vessels, the recovery of CGRP- and CPON-immunoreactive fibers was slow, and at 20 weeks a difference with control samples (p < 0.01) was noted. In the same area, there was no significant difference for PGP immunoreactivity between controls and tissues at 20 weeks. In contrast, the immunoreactive nerve bundles in the dermis showed a faster recovery than nerves in other skin areas, with amounts similar to controls at 20 weeks. The significant recovery of immunorcactive nerves, in particular of those containing sensory neuropeptide, is consistent with the described functional recovery.
Une perte marquée de nerfs immunoréactifs aux neuropeptides, une conséquence des lésions nerveuses fréquemment retrouvée dans la lèpre, a été rapportée dans les tissus périphériques de patients lépreux et d'un modèle animal de la lèpre. Le but de cette étude était d'étudier la réinnervation périphérique après une greffe dénaturée d'un muscle autologue sur un modèle animal ayant une lésion nerveuse de lèpre. La réinnervation du coussinet plantaire a été étudiée par immunochimie en utilisant des antisera vis-à-vis du produit génique protéique 9.5 du marqueur neuronal (PGP), du peptide génique de la calcitonine des neuropeptides (CGRP), de la substance P (SP), du peptide intestinal vasoactif (VIP), et du peptide C du neuropeptide Y (CPON). L'étendue du processus de réinnervation a été évaluée par quantification analytique d'images à différents moments. Huit semaines après la greffe de muscle, il y avait un petit nombre de nerfs immunoréactifs (p < 0.05). Aux douzième, seizième et vingtième semaine après l'opération, il y avait une augmentation progressive de toutes les réactions immunologiques. Après 20 semaines, aucune différence significative n'a été observée pour les nerfs réagissant au PGP, CGRP et SP dans les couches épidermiques et sous-épidermiques par rapport au tissu de controle (contralateral). Dans le tissu de l'expérimentation, la récupération des nerfs immunoréactifs prit plus longtemps autour des glandes sudoríparos (jusqu'à 12 semaines) que dans les autres régions de la peau, mais après ce moment, la récupération a été rapide, et après 20 semaines, on n'a mesuré aucune différence entre les nerfs immunoréactifs au VIP et les controles. Autour des vaisseaux sanguins, la récupération des fibres immunoréactives au CGRP et CPON était lente, et après 20 semaines, on a noté une différence avec les échantillons de controle (p < 0.01 ). Dans la môme zone, il n'y avait pas de différence significative après 20 semaines pour l'immunorcactivité au PGP entre les controles et les tissus. Par contraste, les paquets de nerfs immunoréactifs dans le derme montraient une récupération plus rapide que les nerfs dans les autres régions de la peau, avec une intensité similaire aux controles après 20 semaines. La récupération significative des nerfs immunoréactifs, en particulier ceux contenant du neuropeptide sensoriel, est cohérente avec la récupération fonctionnelle décrite.
Se ha reportado una marcada depleción de nervios inmunorcactivos a neuropeptidos (una consecuencia del daño nervioso comunmente encontrado en la lepra) tanto en los tejidos periféricos de los pacientes con lepra como en un modelo animal de la enfermedad. El objetivo de este estudio fue el investigar la reinervación periférica subsecuente a un injerto autólogo de músculo desnaturalizado en un modelo animal en el que la lepra indujo un daño nervioso. La reinervación de la piel de la almohadilla plantar se estudió por inmunohistoquímica usando antisucros contra las siguientes substancias: el marcador neuronal PGP 9.5 (PGP), los neuropépetidos relacionados con la calcitonina (CGRP), la substancia P (SP), el péptido vasoactivo intestinal (VIP), y el péptido C que flanquea al neuropéptido Y (CPON). El grado del proceso de reinervación se estableció "cuantificando" las imágenes a diferentes intervalos de tiempo. Ocho semanas después del injerto hubieron números muy pequeños de nervios inmunoreactivos (p < 0.05). A las 12, 16, y 20 semanas se notó el incremento gruadual en todas las inmunotinciones. A las 20 semanas no se encontraron diferencias significativas con el tejido control contralateral en cuanto a la reactividad para PGP, CGRP, y SP de los nervios de las capas epidérmica y subepidérmica. En el tejido experimental, la recuperación de los nervios inmunorcactivos alrededor de las glándulas sudoríparas tomó más tiempo (hasta 12 semanas) que en los otros compartimentos de la piel pero después de esc tiempo la recuperación fue rápida y a las 20 semanas no se encontraron diferencias con los controles en cuanto a los nervios VIP-inmunoreactivos. Alrededor de los vasos sanguíneos, la recuperación de las fibras CGRPy CPON-inmunoreactivas fue lenta, y a las 20 semanas se notó una diferencia con las muestras control (p < 0.01). En la misma área, a las 20 semanas no hubo una diferencia significativa de la inmunoreactividad a PGP entre los controles y los tejidos experimentales. En contraste, los haces de nervios inmunoreactivos en la dermis mostraron una recuperación más rápida que los nervios en otras áreas de la piel con números similares a los de los controles a las 20 semanas. La significante recuperación de los nervios inmunoreactivos, en particular de aquellos que contienen neuropeptidos sensoriales, es consistente con la recuperación funcional descrita previamente.

10- Water soluble complexes of C14 and C16 fatty acids and alcohols in media for cultivation of leprosy-derived psychrophilic mycobacteria

Laszlo Kato; J. Szejtli; L. Szente


Host-grown Mycobacterium leprae cell suspensions oxidized water-soluble complexes of palmitic acid, myristic acid, cetyl alcohol, and myristyl alcohol prepared with randomly methylated-β-cyclodextrin as host molecules. Gas chromatography analysis showed that the water-soluble complexes retained their chemical structure following sterilization in the autoclave. Bioavailability of the two long-chain fatty acids and the corresponding long-chain alcohols was confirmed by Warburg manometric techniques with host-grown M. leprae cell suspensions. Inoculated with host-grown M. leprae cells in chemically well-defined, simple liquid and agar media, acid-fast bacilli were cultivable in primary cultures and subcultures at 10ºC with (NH4)2S04 as the N source and water-soluble palmitic acid, myristic acid, cetyl alcohol or myristyl alcohol as the C and potent energy sources.
M. phlei oxidized the complexed palmitic acid and myristic acid but not cetyl alcohol or myristyl alcohol. On agar media with any of these four carbon sources and (NH4)2S04 but not ammonium thioglycolate as the N source, M. phlei grew abundantly at 36ºC. In liquid media only myristyl alcohol supported growth of M. phlei without any growth with palmitic acid, cetyl alcohol or myristic acid.
The leprosy-derived, cold-loving cultures ("M. psychrophilum") were not fully tested for classification and identification. The cells are strongly acid-fast facultative psychrophiles, adapted in subcultures to mesophilic growth. They grow in chemically well-defined media with 14 and 16 C long-chain fatty acids or alcohols as the C and energy sources. None of the cultures grow on Lowenstein or 7H9 media. Heat-killed suspensions of the 4th and 6th subcultures provoke Mitsuda-type late skin reactions in tuberculoid, borderline and borderline-tuberculoid but not in lepromatous leprosy volunteers. When grown with (NH4)2S04 as the N source (but not with the reducing agent ammonium thioglycolate) the subcultures multiplied abundantly in the foot pads of mice.
It became evident that leprosy-derived, facultative psychrophilic mycobacteria really exist. Mycobacteria of this cluster do not distinguish between 14 or 16 C long chains with COOH or CH2OH as terminal bindings. Cells are quite aerophilic and grow preferentially on agar slant surfaces. This is probably due to the abundant 02 requirement of each palmitic-acid molecule to produce 129 ATP molecules. The reducing agent, ammonium thioglycolate, was toxic in culture media for M. phlei. "M. psychrophiluin" lost infectivity with ammonium thioglycolatc as the N source in the media.
Des suspensions cellulaires de Mycobacterium leprae mises en croissance chez un hôte ont oxydé des complexes solubles dans Peau d'acide palmitique, d'acide myristique, d'alcool cétylique et d'alcool myristylique préparé avec comme molécule-hôte du β-cyclodextrin méthylé aléatoirement. Une analyse par chromatographic gazeuse a montré que les complexes hydrosolubles conservaient leur structure chimique après stérilisation dans l'auloclave. La biodisponibilité des deux acides gras à longue chaîne et des alcools à longue chaîne correspondants a été confirmée par des techniques manométriques de Warburg avec des suspensions cellulaires cellulaires de M. leprae mises en croissance chez un hôte. Inoculés avec des cellules de M. leprae mises en croissance chez un hôte dans des milieux chimiquement bien définis de liquide simple et d'agar, des bacilles acido-résistants étaient cultivables dans des cultures primaires et des sous-cultures à 10ºC avec du (NH4)2S04 comme source d'azote et de l'acide palmitique, de l'acide myristique, de l'alcool cétylique ou myristylique hydrosolubles comme source de carbone et d'énergie.
M. phlei oxyda les complexes d'acide palmitique et d'acide myristique, mais non l'alcool cétylique ni l'alcool myristylique. Sur milieu d'agar, avec une quelconque de ces quatre sources de carbone et du (NH4)2S04 mais pas du thioglycolate d'ammonium comme sourec d'azote, M. phlei s'est multiplié abondamment à 36ºC. En mileu liquide, seul l'alcool myristylique stimulait la croissance de M. phlei, alors qu'il n'y avit aucune croissance avec l'acide palmitique, l'alcool cétylique ou l'acide myristique. Les cultures dérivées de la lèpre et aimant le froid ("M. psychophrylum") n'ont pas été entièrement analysées pour la classification et l'identification. Les cellules sont fortement acido-résistantes et psychrophilcs de manière facultative, adaptées à la croissance mésophile dans des sous-cultures. Elle croissent dans des milciux chimiquement bien définis avec des acides gras ou des alcools à longue chaîne de 14 ou 16 atomes de carbone comme sources de carbone et d'énergie. Aucune de ces cultures ne poussait sur milieu de Lowenstein ou 7H9. Des suspensions tuées par la chaleur des quatrièmes et sixièmes sous-culturcs provoquent des réactions cutanées tardives de type Mitsuda chez des patients volontaires présentant une lèpre tuberculoide, borderline et borderline tuberculoide, mais non chez ceux présentant une lèpre lépromatcuse. Quand elles étaient mises en culture avec du (NH4)2S04 comme source d'azote (mais pas avec l'agent réducteur thioglycolate d'ammonium), les sous-cultures se multipliaient abondamment dans les coussinets plantaires des souris.
II est devenu evident que des myobactéries dérivées de la lèpre, psychrophilcs facultatives, existent réellement. Les mycobactérics de ce type ne font pas la distinction entre des longues chaînes à 14 ou 16 atomes de carbone terminées par un complexe COOH ou CH2OH. Les cellules sont relativement aérobiques et se multiplient préférentiellement sur des surfaces d'agar inclinées. Ceci est probablement dû au besoin abondant d'oxygène de chaque molécule d'acide palmitique pour produire des molécules d'ATP. L'agent réducteur, le thioglycolate d'ammonium, était toxique pour M. phlei dans le milieu de culture. "M. psychrophilum''' perdait son infectivité avec du thioglycolate d'ammonium comme source d'azote dans le milieu de culture.
Las suspensiones del Mycobacterium leprae cultivado in vivo oxidaron los complejos hidrosolubles del ácido palmítico, del ácido mirislico, del alcohol cetilico, y del alcohol mirislico preparados con beta-ciclodextrinas mediadas al azar como moléculas acarreadoras. Los análisis por cromatografía de gases mostraron que los complejos hidrosolubles retuvieron su estructura química después de su esterilización en el autoclave. La bioacecsibilidad de los 2 ácidos grasos de cadena larga y sus correspondientes alcoholes fue confirmada por la técnica manométríca de Warburg utilizando suspensiones de M. leprae cultivado in vivo. Se peparó un medio químicamente definido (liquidoo con agar) el cual contenía sulfato de amonio como fuente de nitrógeno y los derivados hidrosolubles del ácido palmítico o del alcohol mirístico como fuente de carbono y de energía. Estos medios se inocularon con M. leprae propagado in vivo y se incubaron a 10ºC. M. phlei oxidó los complejos de ácido palmítico y de ácido mirístico pero no los complejos de alcohol cetílico o mirístico. Además de que creció abundantemente a 37ºC en los medios con agar con cualquiera de las 4 fuentes de carbono y sulfato de amonio, pero no cuando se ultilizó tioglicolato de amonio como fuente de nitrógeno. En medio líquido, sólo el alcohol mirístico permitió el crecimiento del M. phlei y no hubo ningún crecimiento con ácido palmítico, con alcohol cetílicoo con ácido mirístico.
Los cultivos psicrofílicos de "M. psychroplulum" aislados de casos de lepra no fueron estudiados de manera suficiente como para establecer su clasificación c identificación inequívocas. Aunque estas bacterias ácido resistentes son psicrófilos facultativos, son adaptables por subcultivo a su crecimiento mesofílico. Crecen en medios químicamente definidos con ácidos grasos o alcoholes de 14 y 16 carbonos como fuente de carbono y energía. Ninguno de los cultivos crece en medio de Lowcnstcin o 7H9. Las suspensiones inacti vadas por calor del 4º y 6º subculti vos provocan reacciones tardías de tipo Mitsuda en pacientes con lepra tubereuloide y tuberculoide subpolar pero no en pacientes con lepra lepromatosa. Cuando se cultivan con sulfato de amonio como fuente de nitrógeno (pero no con tioglicolato de amonio) los subcultivos recuperados se multiplican abundantemente en las almohadillas plantares del ratón. Se demostró la existencia real de las micobacterias psicrofílicas facultativas derivadas de la lepra. Las micobacterias de este grupo no distinguen entre las cadenas largas de 14 ó 16 carbones con extremos COOH o CH2OH terminales. Las células son muy acrofilicas y crecen preferentemente sobre superficies inclinadas de agar. Esto se debe probablemente al abundante requerimiento de oxígeno de cada molécula de ácido palmítico para producir 129 moléculas de ATP. El agente reductor tioglicolato de amonio fue tóxico en los medios de cultivo para cl M. phlei. "M. psychrophilum"pendió su infectividad cuando se usó tioglicolato de amonio como fuente de nitrógeno en el medio.

11- Electron microscopic observations of the relationship between peripheral nerve tissue proper and an endoneurial capillary in a dermal lesion of a relapsed lepromatous patient

Tsunehiko Hirata; Nobuo Harada


The origin of relapse in clinically cured leprosy patients and the dissemination of Mycobacterium leprae in such patients are hitherto little understood phenomena. A detailed electron microscopical examination of a small dermal nerve in a lepromatous lesion of a presently relapsed patient was carried out. Our observations showed the presence of M. leprae in Schwann cells, perineurial cells, vacuolar spaces located in axoplasm and elsewhere. The course of a capillary, entering the endoneurium f rom the epincurium via the perineurium, suggested the possibility of hematogenous spread of M. leprae which had been tucked away in the dermal peripheral nerve. At the time of relapse, bacilli may multiply in the nerve, may enter the bloodstream, and thus disseminate f rom the nerve into other nerves and other tissues via hematogenous spread.
L'origine de la rechute chez des patients lépreux cliniquement guéris et la dissémination de Mycobacterium leprae chez de tels patients sont jusqu'à présent des phénomènes mal compris. On a réalisé un examen détaillé au microscope électronique d'un petit nerf dermique dans une lésion lepromatcuse d'un patient présentant une rechute. Nos observations ont montré la présence de M. leprae dans des cellules de Schwann, des cellules peri-neurales, des espaces vacuolaires localisés dans l'axoplasmc et ailleurs. Le parcours d'un capillaire, entrant dans l'endonèvre à partire de l'épinèvre via le périnèvre suggéra la possibilité d'une dissémination hématogène de M. leprae qui ont été rejetés dans le nerf dermique périphérique. Au moment de la rechute, des bacilles peuvent se multiplier dans le nerf, peuvent pénétrer dans le flux sanguin, et donc se propager à partir du nerf dans d'autres nerfs et d'autres tissus via une dissémination hématogène.
El orígen de las recaídas en los pacientes con lepra clinicamente curada, y Ia diseminación de M. leprae en tales pacientes, son fenómenos actualmente poco entendidos. El examen detallado por microscopia electrónica de un pequeno nervio dérmico en una lesión lepromatosa de un paciente con lepra recurrente, mostro la presencia de M. leprae en las células de Schwann, en las células perineuriales, en los espacios vacuolares localizados en el axoplasma, y en otros sítios. El curso de un capilar penetrando dei epineurio al endoneurio, via el perincurio, sugirió la posibilidad de la dispersion hematógena del M. leprae previamente enclaustrado en los nervios periféricos. Hacia el tiempo de la recaída, los bacilos se pueden multiplicar en el nervio, pueden entrara la corriente sanguinea y asi pueden diseminarse a otros nervios y a otros tejidos, via su dispersion hematôgena.

12- Effect of Mycobacterium leprae in peripheral nerve trunk on the evolution of skin lesions

Marian J. Ridley; Michael F. R. Waters; Dennis S. Ridley


Comparative histological studies were made of a) 41 peripheral nerve lesions and the skin in the area of supply, and b) 12 peripheral nerve lesions and concurrent but unrelated skin lesions. In the first study, small, relatively early, histologically classifiable skin lesions were found in all cases, even though there were no clinical lesions. In every case the lesion was centered on a dermal nerve. In some cases disruption of the perineurium was associated with emergence of the lesion into the dermis and a small silent local reaction. It was concluded that there was a descending spread of the disease down the neural pathway to the dermis, although it was not necessarily associated with transport of bacilli.
Although the first study showed a discrepancy in the classification between skin and nerve lesions in nearly 50% of the cases (as previously reported), the second study showed no discrepancies. It is suggested that discrepancies are relatively uncommon, and that those in the first study are exceptional. The probable explanation is that microreactions in the nerve trunks had caused a shift in classification, which was not yet reflected in the immature skin lesions. In the second study, the mature skin lesions had reached immunological equilibrium. Discrepancies in classification between skin and nerve lesions, as between concurrent skin lesions, are the result of reaction. Attention is drawn to the probable role of subliminal reactions in the evolution of infections.
Des études histologiques comparatives ont été réalisées de a) 41 lésions nerveuses périphériques ainsi que de la peau dans la région innervée, et b) 12 lésions nerveuse périphériques et des lésions cutanées simultanées mais sans rapport avec celles-ci. Dans la première étude, des petites lésions, relativement précoces et classifiables histologiquemcnt, ont été trouvées dans tous les cas, même s'il n'y avait pas de lésion clinique. Dans chaque cas, la lésion était centrée sur un nerf dermique. Dans certains cas, une interruption du périnèvre était associée à l'apparition de la lésion dans le derme, et à une petite réaction locale silencieuse. On en a conclu à une dissémination descendante de la maladie le long du trajet nerveux vers le derme, bien que cette dissémination n'était pas nécessairement associée au transport de bacilles.
Bien que la première étude ait montré une discordance dans la classification entre les lésions nerveuses et cutanées dans près de 50% des cas (comme rapporté précédemment), la seconde étude n'a pa montré de discordances. L'hypothèse est émise que les discordances sont relativement peu fréquentes, et que celles de la première étude sont exceptionnelles. L'explication probable est que des micro-réactions survenues dans les troncs nerveux avaient causé un changement dans la classification, et ceci n'était pas encore reflété dans les lésions cutanées immatures. Dans la seconde étude, les lésions cutanées matures avaient atteint un équilibre immunologiquc. Des discordances de classification entre des lésions cutanées et nerveuses, comme entre des lésions cutanées simultanées, sont le résultant d'une réaction. L'attention est attirée sur le rôle probable de réactions subliminales dans l'évolution des infections.
Se hicieron estudios histológicos comparativos de 41 lesiones de nervios periféricos y la piel de las áreas inervadas, y de 12 lesiones de nervios periféricos y la piel de lesiones dérmicas concurrentes pero no relacionadas. En todos los casos analizados en el primer estudio se encontraron lesiones dérmicas pequeñas, relativamente tempranas e histológicamente clasificables aún cuando no hubieron lesiones clínicas. En cada caso la lesión estuvo centrada en un nervio dérmico. En algunos casos la ruptura del perincurio estuvo asociada con la emergencia de la lesión hacia la dermis y con una pequeña reacción local silenciosa. Se concluyó que hubo una dispersión descendente de la enfermedad de la via neural a la dermis, aunque no necesariamente estuvo asociada con el transporte de bacilos.
Aunque el primer estudio mostró discrepancias en la clasificación de las lesiones de la piel y de los nervios, en casi el 50% de los casos (como se reportó previamente), en el segundo estudio no hubieron discrepancias. Se sugiere que las discrepancias son relativamente raras y que aquellas del primer estudio son excepcionales. Probablemente las micro-reacciones en los troneos nerviosos, sin reflejo aún en las lesiones inmaduras de la piel, fueron la causa del cambio en la clasificación. En el segundo estudio, las lesiones maduras de la piel ya habían alcanzado su equilibrio inmunológico. Las discrepancias en la clasificación entre las lesiones de la piel y de los nervios, así como las discrepancias entre las lesiones concurrentes de la piel, son probablemente el resultado de reacciones. Se hace incapié sobre el probable papel de las reacciones subliminales en la evolución de las lesiones de la lepra.

EDITORIALS-CONGRESS-STATE-OF-THE-ART LECTURES

CLINICAL NOTES

CORRESPONDENCE

17- Dr. Mukherjee, et al. respond to Dr. Deo

Ashok Mukherjee; Amar K. Sharma; Radhey S. Misra; H. K. Kar; Rama Mukherjee; Gurusaran P. Talwar


18- Leprosy and HIV infection

Ana Marcia de Almeida; Ana Maria Ferreira Roselino; Norma Tiraboschi Foss


19- A latex agglutination test for rapid serodiagnosis of leprosy in the field

Thomas Oettinger; Ase B. Andersen; Ayenew Nurlign; Peter Skinhoj; Sten Verland


21- Minimal bactericidal concentration of clarithromycin against M. leprae

Robert H. Gelber; Lydia P. Murray; Patricia Siu; Mabel Tsang


OBITUARY

BOOK REVIEWS

NEWS AND NOTES

CURRENT LITERATURE

ACKNOWLEDGMENT

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