Leprosy

1- Long-term follow up of multibacillary leprosy patients with high bi treated with WHO/MDT regimen for a fixed duration of two years

Isaac Neeraj Shaw; Mani Mozhi Natrajan; Geetha Sunder Rao; Kumar Jesudasan; Melville Christian; Masilamani Kavitha

Forty-six, newly detected, previously untreated multibacillary (MB) patients with a bacterial index (BI) of >3+ who had received WHO/MDT for 2 years were followed up for a total duration of 424 person-years and a mean duration of 9.26 ± 2.98 years per patient. The BIs of the patients continued to fall, and all of the patients, except one, reached skin-smear negativity. WHO/MDT was well accepted and well tolerated. Relapse, which was defined as an increase in the BI of 1+ or more with or without clinical evidence of activity, was observed in only one patient, giving a relapse rate of 2.2% or 0.23 per 100 person-years in patients with a BI of >3+ after long-term follow up. This patient was started on a second course of WHO/MDT to which he responded favorably. WHO/ MDT for a fixed duration of 2 years for MB patients as recommended by the WHO is vindicated.

Quarante six patients multibacillaire (MB) nouvellement détectés et non traités auparavant, avec un index bactérioscopique (IB) supérieur ou égal à 3+ et qui ont reçu une PCT/OMS pendant 2 années furent suivies pendant une durée totale de 424 personnes-années et une durée moyenne de 9,26 ± 2,98 années par patient. L'IB des patients continua à décroître et tous les patients, à l'exception d'un seul, atteignirent un statut négatif à l'examen du suc dermique. La PCT/OMS fut bien acceptée et bien tolérée. La rechute, quî fut définie comme une augmentation de l'IB de 1+ ou plus avec ou sans évidence clinique d'activité de la maladîe, ne fut observée que chez un patient, ce qui correspond à un taux de rechute de 2,2%, soit 0,23 pour 100 personnes-années chez les patients avec un IB de >3+ après suivi à long terme. Ce patient reçut un second traitement PCT/OMS avec une réponse favorable. Ces résultats défendent l'intérét et l'usage de la PCT/OMS à durée fixe de 2 ans pour les patients MB.

Se hizo cl seguimiento, por un total de 424 persona-años y una duración media de 9.26 ± 2.98 anos por paciente, de 46 pacientes con lepra multibacilar recién detectada, que recibieron la poliquimioterapia recomendada por la Organización Mundial de la Salud (PQT/OMS) durante 2 años. Los indices bacteriológicos (IB) de los pacientes continuaron decayendo y todos los pacientes, excepto uno, llegaron a ser negativos en los exámenes de linfa cutánea. La PQT/OMS fue bien aceptada y bien tolerada. La recaída, definida como un aumento en el IB de 1+ o más, con o sin evidencias de actividad clínica, se observó en un solo paciente, dando una tasa de recaída de 2.2% o de 0.23 por 100 persona-años en pacientes con un IB de >3+, después de un tiempo largo de seguimiento. Este paciente fue sometido a un segundo ciclo de tratamiento con PQT/OMS, al cual respondió favorablemente. Los resultados corroboran la eficacia del tratamiento de los pacientes con lepra MB con la PQT recomendada por Ia OMS durante un tempo fijo de 2 años.

2- Frequency and extent of thickening of the nucleated epidermis in leprosy lesions

Thomas H. Rea

Using 28 specimens of clinically normal skin from lepromatous leprosy subjects as a standard for comparison, the mean thickness of the nucleated epidermis was found to be significantly increased in untreated lesions from 16 borderline tuberculoid, 21 erythema nodosum leprosum (ENL), and 14 reversal reaction patients, but was unchanged in borderline lepromatous and lepromatous patients. Using specimens from 36 untreated lepromatous and borderline lepromatous lesions as the standard for comparison with the lesions of reversal reactions or ENL which these patients eventually developed, there was a significant thickening of the nucleated epidermis in both reactional states. In both comparison groups, there was a greater mean increase and a larger frequency of thickening in the ENL lesions than in those with reversal reactions. In the borderline tuberculoid and reversal reaction lesions the increase can be understood as secondary to the presence of gamma interferon or interleukin-2. The increase in thickness in the ENL lesions is more difficult to explain, but it is not inconsistent with a role for these same two cytokines.

A partir de 28 échantillons de peau cliniquement normale provenant de sujets souffrant de lèpre lépro-mateuse comme référence de comparaison, l'épaisseur moyenne de l'épiderme avec noyaux cellulaires (nucléé) fut déterminée être significativement augmentée parmi les lésions non-traitées de 16 patients tuberculides borderlines, 21 patients souffrant d'érythème noueux lépreux (ENL) et 14 patients présentant des réaction inverses, alors qu'elle restait inchangée parmi les lésions non traitées des patients lépromateux borderlines et les patients lépromateux. En utilisant les prélèvements de 36 lésions lépromateuses et lépromateuses borderlines non-traitées comme référence de comparaison avec celles des réactions inverses ou d'ENL que ces patients ont ensuite développés, il fut trouvé un épaississement significatif de l'épiderme nucléé dans les deux états réactionnels. Au sein des 2 groupes de comparaisons, l'augmentation moyenne d'épaisseur de l'épiderme nucléé et la fréquence de l'épaississement furent plus importante parmi les lésions d'ENL que parmi les lésions de réactions inverses. Cette augmentation d'épaisseur de l'épiderme peut être interprétée comme urge réponse à la présence d'interféron gamma et d'interleukine 2 parmi les lésions tuberculoïdes borderlines et celles des réactions inverses. L'augmentation d'épaisseur au sein des lésions d'ENL est plus difficile à expliquer, mais il n'est pas improbable que ces 2 mêmes cytokines jouent un rôle au sein des lésions d'ENL.

Usando 28 especimenes de piel clinicamente normal de pacientes con lepra lepromatosa como estándar de comparación, se encontró que el grosor promedio de la epidermis nucleada estuvo significativamente aumentado en las lesiones no tratadas de 16 pacientes con lepra tuberculoide subpolar (BT), 21 pacientes con eritema nodoso leproso (ENL) y 14 pacientes con reacciones reversas, pero se mantuvo sin cambio en los pacientes con lepra lepromatosa subpolar (BL) y lepra lepromatosa (LL). Por otro lado, comparando 36 especimenes de lesiones de lepra lepromatosa y lepra lepromatosa subpolar con las lesiones de reacciones reversas o ENL que estos pacientes desarrollaron, se observó un engrosamiento significativo de la epidermis nucleada en ambos estados reaccionales. En los dos grupos comparados hubo un mayor incremento promedio y una mayor frecuencia de engrosamiento en las lesiones ENL que en las de reacción reversa. En las lesiones BT y de reacción reversa el incremento puede entenderse como secundario a la presencia de interferón gamma o de interleucina-2. El aumento en el grosor en las lesiones ENL es más dificil de explicar, pero también podría estar relacionado con estas mismas citocinas.

3- Lucio's phenomenon: clinical and therapeutic aspects

Cacilda da Silva Souza; Ana Maria Ferreira Roselino; Florencio Figueiredo; Norma Tiraboschi Foss

We report four cases of necrotizing reactions of the Lucio's phenomenon type, an entity rarely observed in Brazil despite the high prevalence of leprosy. Clinical, histopathological and therapeutic aspects are described and compared to those reported in the literature for cases classified as diffuse, non-nodular lepromatous leprosy with Lucio's phenomenon.

Nous rapportons quatre cas de réactions nécrosantes associées au phénomène de Lucio, une entité rarement rencontrée au Brésil en dépit d'une haute prévalence de lèpre. Les aspects cliniques, histo-pathologiques et thérapeutiques sont décrits et comparés à ceux rapportés dans la littérature de cas classés comme lèpre lépromateuse diffuse non nodulaire avec phénomène de Lucio.

Reportamos 4 casos de lepra con reacciones necrotizante tipo fenómeno de Lucio, una entidad raramente observada en Brasil no obstante la elevada prevalencia de la enfermedad. Se describen los aspectos clínicos, histopatológicos y terapéuticos de estos casos y se comparon con los reportados en la literatura sobre lepra lepromatosa difusa y fenómeno de Lucio.

4- Immuno-histopathology in the diagnosis of early leprosy

Xiao-Man Weng; Shu-Yuan Chen; Shun-Peng Ran; Chang-Huai Zhang; Huan-Ying Li

The present study of 45 early leprosy cases in an endemic area in China indicates: a) Sensitivity of acid-fast bacilli (AFB) detection can be significantly improved by examining approximately 30 serial sections. AFB and/or phenolic glycolipid-I (PGL-I) were mostly detected in the infiltrates in the subepidermal zone, intraneurium, perineurium and around blood vessels. b) PGL-I antigen was positive in 10 clinically suspected, single lesion leprosy cases and AFB positive in 7 patients, AFB and/or PGL-I in nerve in 6 patients. c) Nonspecific chronic inflammation in indeterminate leprosy presented as selective perineural and/or intraneural infiltration with lymphocytes predominating. In the infiltrating mass, fragments of neural tissue were demonstrated with anti-S-100 protein staining. d) Except for 3 cases with unknown numbers of lesions, the present positive immuno-histopathological findings are in direct correlation with the number of lesions at first diagnosis, namely: 41.6% (10/24) for single lesion, 66.6% (6/9) for 2 lesions, and 88.8% (8/9) for patients with >3 lesions. e) Typical epithelioid or macrophage granuloma formations were not seen in early leprosy with a single lesion. In testing the immunological inclination of these patients with CD68 or tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) a positive test is likely to be of prognostic value since TNF-α is involved in granuloma formation and nerve damage.

Cette étude portant sur 45 cas débutants de lèpre dans une région endémique de Chine indique que : (a) La sensibilité de détection des bacilles acido-alcoolo-résistants (AAR) peut être améliorée de façon signifcative par l'examen d'environ 30 coupes sériées. Les bacilles AAR et/ou le glycolipide phénolique I (PGL-I) furent détectés principalement dans les infiltratas de la zone sous-épidermique, intra-neuraux, péri-neuraux et autour des vaisseaux sanguins. (b) L'antigène PGL-I fut détecté chez 10 cas cliniquement suspects de lèpre à lésion unique, des bacilles AAR chez 7 cas et des bacilles AAR et/ou PGL-I dans les nerfs de 6 patients. (c) L'inflammation chronique non spécifique typique de la lèpre indéterminée était caractérisée dans cette étude par un infiltrat à prédominance lymphocytaire présent sélectivement en situation péri neurale ou intra neurale. Dans les masses inliltrées de localisation équivoque, des fragments de tissu nerveux furent démontrés par immuno-marquage à la protéine S-100. (d) A l'exception de 3 cas non considérés parce qu'ayant un nombre indéterminé de lésions, les résultats immuno-histopathologiques présentés ici sont directement corrélés au nombre de lésions lors de l'établissement du diagnostic, à savoir : 41,6% (10/24) pour une lésion unique, 66,6% (6/9) pour 2 lésions et 88,8% (6/9) pour les patients de 3 lésions et plus. (e) La formation de granulomes épithélioïdes ou macrophagiques typiques ne fut pas observée dans les cas de lèpre débutante présentant une lésion unique. L'inclination immunologique de ces patients, testée à l'aide de marqueurs tels CD-68 et le facteur de nécrose tumoral alpha (TNF-α), pourraient avoir une valeur pronostique si positifs puisque TNF-α est impliqué dans la formation des granulomes et les lésions nerveuses.

Se realizó el estúdio de 45 casos de lepra temprana en una region de China con lepra endémica. Las conclusiones del estudio fueron: a) La detección de bacilos ácido resistentes (BAAR) puede mejorarse significativamente si se examinan aproximadamente 30 secciones seriadas; los BAAR y/o el glicolípido fenólico-I (PGL-I) se detectaron principalmente en el infiltrado de las zonas sub-epidérmica, del intraneurio, del perineurio, y alrededor de los vasos sanguíneos. b) El PGL-I fue positivo en 10 casos con sospecha clínica de la enfermedad y 7 de los casos fueron positivos para BAAR; en los nervios de 6 pacientes se encontraron BAAR y/o PGL-I. c) La inflamación crónica no específica en la lepra indeterminada se presentó como un infltrado perineural o intraneural selectivo con predomínio de linfocitos. En el infiltrado se encontraron fragmentos de tejido neural utilizando un anticuerpo contra la proteína S-100. d) Excepto por 3 casos con números desconocidos de lesiones, los presentes hallazgos inmunohistopatológicos correlacionaron de manera directa con el número de lesiones en el primer diagnóstico, especificamente: 41.6% (10/24) para lesiones únicas, 66.6% (6/9) para 2 lesiones, y 88.8% (8/9) para pacientes con >3 lesiones. e) En los casos de lepra temprana con una sola lesion no se observaron granulomas epitelioides o macrofágicos típicos. Si se probara el estado inmunológico de estos pacientes con CD68 o factor de necrosis tumoral alfa (TNFα), es probable que una prueba positiva pudiera ser de valor pronóstico, ya que el TNFα participa en la formación de granulomas y en el dano a nervios.

5- Antileprosy protective vaccination of sooty mangabey monkeys with BCG or BCG plus heat-killed Mycobacterium leprae: immunologic observations

Bobby J. Gormus; Gary B. Baskin; Keyu Xu; Marion S. Ratterree; Louis N. Martin; Pamela A. Mack; Rudolf P. Böhm, Jr.; Wayne M. Meyers; Gerald P. Walsh

Groups of sooty mangabey monkeys (SMM) were vaccinated and boosted with Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin (BCG), or BCG + low-dose (LD) or high-dose (HD) heat-killed M. leprae (HKML), or were unvaccinated. Prior to and following vaccination-boosting and subsequent M. leprae (ML) challenge, these and unvaccinated, unchallenged control monkeys were immunologically observed longitudinally for approximately 3 years. SMM [multibacillary (MB) leprosy-prone as a species] were not protected clinically by BCG or BCG + HKML, although the disease progress was slowed by vaccination with BCG alone. The longitudinal immune response profiles to BCG or BCG + HKML in SMM showed that: 1) vaccination with BCG or BCG + HKML initially stimulated significant in vitro blood mononuclear cell blastogenic responses to ML antigens, which returned to baseline post-boosting and post-live ML challenge; 2) BCG + LD HKML-vaccinated groups gave the largest blastogenic response (SI = 23) followed by the BCG + HD HKML group (SI = 14.5) and by the BCG-only vaccinated group (SI = 3.6); 3) significantly diminished numbers of blood CD4+ (helper) and CD4+CD29+ (helper-inducer) T-cell subsets were observed longitudinally in all ML-challenged groups compared to controls regardless of whether they had been vaccinated or not; 4) CD8+ (suppressor) T-cell numbers remained longitudinally constant, on average, in all ML-challenged groups (vaccinated or not) compared to controls; 5) there was a significant decrease in the CD4+:CD8+ ratio over time in all ML-challenged groups (vaccinated or not); 6) vaccination with BCG or BCG + LD or HD HKML resulted in significantly increased numbers of CD4+CD45RA+ (suppressor-inducer) T cells longitudinally compared to the unvaccinated, ML-challenged control group; and 7) over time, vaccination with BCG + HKML followed by live ML-challenge produced higher IGM:IgG antiphenolic glycolipid-I (PGL-I) serum antibody response ratios than BCG- only vaccinated, ML-challenged monkeys or unvaccinated, ML-challenged SMM, consistent with prior observations that IgG anti-PGL-I responses correlate with resistance to and protection from clinical leprosy and IgM anti-PGL-I responses correlate with increased susceptibility.

groupes de singes Mangabey cendrés (SMM) furent primo-vaccinés et reçurent une injection de rappel de Mycobacterium bovis bacille de Calmette et Guérin (BCG), ou bien BCG + M. leprae inactivée à la chaleur (MLIC) à basse ou haute dose (BD et HD, respectivement), ou bien ne furent pas vaccinés. Avant, pendant et après la primo-vaccination, l'injection de rappel et l'épreuve virulente avec des M. leprae (ML), ces singes et des singes témoins non vaccînés et non-infectés furent suivis immunologiquement et longitudinalement pendant approximativement 3 années. Les SMM [très susceptibles à la lèpre multibacillaire (MB) comme caractéristique d'espèce] ne furent pas protégés cliniquement par le BCG et le BCG + MLIC, bien que l'évolution de la maladie fut retardée par la vaccination avec le BCG seul. Les profils longitudinaux de réponse immunitaire au BCG et au BCG + MLIC chez les SMM ont montré que : 1) la vaccination avec le BCG ou le BCG +MLIC a initialement provoqué une blastogenèse significative in vitro aux antigènes de ML, qui est ensuite retournée à un niveau basal après la vaccination de rappel et l'épreuve virulente par des ML vivantes; 2) le groupe vaccinés associant BCG + BD MLIC a montré la blastogenèse la plus importante (index de stimulation SI = 23) suivis par le groupe BCG + HD MLIC (SI = 14,5) puis par le groupe vacciné uniquement par le BCG (SI = 3,6); 3) une diminution significative du nombre des sous populations lymphocytaires T CD4+ (helper) et CD4+CD29+ (helper-inducteurs) fut observées longitudinalement chez tous les groupes inoculés par ML comparés aux témoins, qu'ils aient été vaccinés ou non; 4) Les nombres de lymphocytes T CD8+ restèrent constants au cours du temps, en moyenne, chez tous les groupes inoculés avec ML (vaccinés ou non) comparé aux témoins; 5) il y eut une diminution significative du ratio CD4+:CD8+ au cours du temps chez tous les groupes inoculés (vaccinés ou non); 6) la vaccination par le BCG ou BCG + BD MLIC a entraîné une augmentation significative du nombre de cellules T CD4+CD45RA+ (suppresseur-inducteur) longitudinalement comparé au groupe témoin non vacciné et inoculé par ML; et 7) au cours du temps, la vaccination avec le BCG + MLIC suivie par l'inoculation de ML vivantes a provoqué une réponse sérique en anticorps caractérisée par un ratio IgM : IgG anti-glycolipide phénolique de type I (PGL-I) plus élevée que les SMM vaccinés seulement par le BCG et inoculés par ML et les SMM non vaccinés et inoculés par ML, en accord avec les observations précédentes indiquant que les réponses à prédominance d'IgG anti-PGL-I sont corrélées avec résistance et protection contre la lèpre clinique tandis que les réponses à prédominance d'IgM anti-PGL-I sont corrélées à une susceptibilité accrue.

Varios grupos de monos mangabey pardos (MMP) se vacunaron y reestimularon con Mycobacterium bovis BCG, o con BCG mas una dósis baja (DB) o alta (DA) de M. leprae inactivado por calor (MLIC). o se mantuvieron sin vacunar. Todos los grupos de animales se estudiaron inmunológicamente antes y después de vacunarse, de reestimularse, y de infectarse con M. leprae viable. El seguimiento de los animales se hizo durante 3 años. Los MMP (altamente susceptibles de desarrollar lepra multibacilar, MB) no fueron protegidos clinicamente ni por BCG ni por BCG+MLIC, aunque el progreso de la enfermedad lue lento en los animales vacunados sólo con BCG. Los perfiles inmunológicos longitudinales en los grupos vacunados indicaron que: 1 ) la vacunación con BCG o BCG+MLIC inicialmente estimuló una significante proliferación in vitro de las células mononucleares de sangre periférica en respuesta a los antígenos de ML la cual luego regresó a los valores basales (post-reestímulo y post-infección eon ML); 2) el grupo vacunado con BCG+DB MLIC dio la mayor respuesta blastogénica (SI = 23), seguido por el grupo vacunado con BCG+DA MLIC (SI = 14.5) y luego por el grupo vacunado sólo con BCG (SI = 3.6); 3) en todos los grupos infectados con ML se observaron números significativamente reducidos de células sanguíneas T CD4+ (cooperadoras) y T CD4+CD29+ (inductoras), independientemente de si los animales fueron vacunados o no; 4) las células CD8+ (supresoras) permanecieron en números relativamente constantes en todos los grupos infectados con ML (vacunados o no), en comparación con los controles; (5) hubo una disminución significaiva en la relación CD4+:CD8+ en todos los animales infectados con ML (vacunados o no); 6) La vacunación con BCG o BCG+DB MLIC provocó un incremento significante en el número de células T CD4+CD45RA (supresoras-inductòras) en comparación con el grupo control infectado con ML pero no vacunado; y 7) la vacunación con BCG+MLIC seguida por la infección con ML vivo, indujo una mayor producción de anticuerpos IgG anti PGL-I que la vacunación sólo con BCG (e infección con ML) o que la infección con MLM sin vacunación previa. Esto es consistente con una observación anterior de que la respuesta IgG anti-PGL-I correlaciona con resistencia y protección contra la lepra clínica y que Ia respuesta IgM anti-PGL-I correlaciona con mayor susceptibilidad.

6- Regulation of nitric oxide induced by mycobacterial lipoarabinomannan in murine macrophages: effects of interferon-β and Taurine-chloramine

Eunkyue Park; William R. Levis; Michael R. Quinn; Seung Yong Park; Georgia B. Schuller-Levis

We examined the effects of interferon beta (IFN-β) on the production of liporabinomannan (LAM)-induced nitric oxide (NO) in peritoneal macrophages from low- responder and high-responder (C3H/HeJ and C3H/OuJ) mice. NO was produced in a dose response when induced by lipo- polysaccharide (LPS) or LAM plus interferon gamma (IFN-γ) or IFN-β in both high- and low-responder mice. In contrast to IFN-γ, both high- and low-responder mice failed to induce nitrite production when IFN-β was added, except at a high concentration of IFN-β. Tau-Cl (0.5 mM) inhibited NO production about 50% in the high-responder strain when cells were activated with LPS or LAM in combination with either IFN-β or IFN-γ, and almost abolished NO production at 1.0 mM. In the low-responder strain, Tau-Cl (0.5 mM) significantly inhibited NO production when cells were activated with IFN-γ or IFN-β in addition to LPS or LAM, but did not completely inhibit NO production at 1.0 mM. Tau-Cl appears to play a potent role in regulating inflammatory reaction-induced bacterial or mycobacterial organisms. These data indicate a pivotal role for IFN-γ and IFN-β for the production of LPS and LAM initiated NO in peritoneal macrophages from low-responder (C3H/HeJ) mice.

Nous avons examiné l'effet de l'interféron bêta (IFN-β) sur la production de monoxyde d'azote (NO) induite par ie lipoarabinomannane (LAM) de macrophages péritonéaux de souris de souches faiblement et hautement productrices (souches C3H/HeJ et C3H/OuJ respectivement). NO fut produit de manière dose dépendante lorsque les macrophages furent stimulés par du lipopolysaccharide (LPS), ou bien du LAM associé à de l'IFN-γ ou de IFN-β, á la fois chez les souris hautement et faiblement productrices. Cependant, contrastant avec l'IFN-γ, tant les souris hautement que faiblement productrices ont été incapables d'induire la production de NO lorsque l'IFN-β seule à été ajouté dans le milieu de culture, sauf à forte concentration. Tau-Cl (0,5 mM) a inhibé la production de NO d'environ 50% chez la souche hautement productrice lorsque les cellules furent stimulées par le LPS ou le LAM combiné à l'IFN-γ ou á l'IFN-β, et l'a presque entièrement annulé à 1,0 mM. Parmi les souris faiblement productrices, Tau-Cl (0,5 mM) a inhibé de façon statistiquement significative la production de NO lorsque les cellules furent activées soit par l'IFN-γ, soit par l'IFN-β ajouté au LPS ou au LAM, mais ne l'a pas complètement inhibé à 1,0 mM. Tau-Cl semble jouer un rôle important dans l'homéostasie de la réaction inflammatoire induite par les bactéries et les mycobactéries. Ces données montrent les rôles très importants de IFN-γ et de l'IFN-β pour la production de NO induite par LPS et LAM, par les macrophages péritonéaux de souris faiblement productrices (C3H/HeJ).

En este estudio investigamos el efecto del interferón beta (IFNβ-) sobre la producción de óxido nítrico (NO) inducido con lipoarabinomanana (LAM) en los macrófagos peritoneales de ratones respondedores bajos (C3H/HeJ) y altos (C3H/OuJ). El NO se produjo con un patrón de dosis-respuesta cuando se indujo con lipopolisacárido (LPS) o LAM más interferón gamma (IFN-γ) o con IFN-β, tanto en los ratones respondedores altos como en los bajos. En contraste con lo ocurrido con el IFN-γ, ni los ratones respondedores altos ni los bajos fueron capaces de producir nitrito cuando se adicionó IFN-β, excepto a una alta concentración del mismo. La adición de Tau-Cl (0.5 mM) inhibió la producción de NO casi al nivel del 50% en la cepa respondedora alta cuando las células se activaron con LPS o LAM en combination con IFN-β o IFN-γ, y casi eliminó la producción de NO a la concentration 1 mM. En la cepa respondedora baja, Tau-Cl (0.5 mM) inhibió significativamente la producción de NO cuando las células fueron activadas con IFN-γ o IFN-β además de LPS o LAM pero no inhibió por completo la producción de NO a la concentración 1.0 mM. Tau-Cl parece jugar un papel importante en la regulación de la respuesta inllamatoria inducida por microorganismos bacterianos o micobacterianos. Estos datos indican un papel primordial del IFN-γ y el IFN-β en la producción de NO inducida con LPS y LAM en los macrófagos peritoneales de los ratones respondedores bajos (C3H/HeJ).

7- A Mycobacterium leprae isolate resistant to dapsone, Rifampin, Ofloxacin and Sparfloxacin

Masanori Matsuoka; Yoshiko Kashiwabara; Masako Namisato

Mycobacterium leprae were isolated from a Japanese patient, and susceptibility to antileprosy drugs was examined by the mouse foot pad method. The isolate was susceptible to clofazimine and clarithromycin, and resistant to dapsone, rifampin, ofloxacin and sparfloxacin. Mutations were identified in the genes associated with resistance to these drugs. The risk of the emergence of leprosy with multidrug resistance is emphasized.

Mycobacterium leprae fut isolé d'un patient japonais et la susceptibilité aux médicaments anti-lépreux furent évaluée en utilisant la méthode de la plante des pattes de souris. L'isolat était susceptible à la clofazimine et la clarithromycine, et résistante à la dapsone, la rifampicine, l'orofloxacine et la sparffoxacine. Des mutations furent identifiées parmi les gènes associés aux résistances à ces antibiotiques. Le risque de l'apparition de lèpres polychimio-résistantes est souligné.

Se aisló Mycobacterium leprae, de un paciente japonés. La susceptibilidad del aislado a las drogas antileprosas se estudió utilizando el modelo de la almohadilla plantar del ratón. El aislado fue susceptible a elofazimina y claritromicina, y resistente a dapsona, ri- fampina, olloxaeina y esparfloxacina. Se identificaron mutaciones en los genes asociados con la resistencia a estas drogas. Se subraya el riesgo de la emergencia de cepas multi-drogoresistentes.

8- Use of ML dipstick as a tool to classify leprosy patients

Samira Buhrer-Sekula; Euzenir N. Sarno; Linda Oskam; Sari Koop; Iris Wichers; Jose A. C. Nery; Leila M. Vieira; Haroldo J. de Matos; William R. Faber; Paul R. Klatser

Leprosy control services face the problem of leprosy patients being misclassified by the lack of or the poor quality of skin-smear examination services. Misclassification increases the risk of relapse due to insufficient treatment if a multibacillary (MB) patient is classified as paucibacillary (PB), thereby also prolonging the time that the patient is infectious. The World Health Organization (WHO) recommends at present an alternative classification based on the number of skin lesions. Its reliability, however, has been questioned. Our investigation sought to determine the usefulness of the ML Dipstick, a simple field assay to detect IgM antibodies to phenolic glycolipid-I of Mycobacterium leprae, for the classification of leprosy patients in addition to lesion count. In this study, 264 leprosy patients were investigated. Of 130 patients with a positive bacterial index (BI), 19 (14.6%) had less than 6 lesions and would have been classified as PB. Out of 134 patients with a negative BI, 26 (19.4%) had 6 or more lesions and would have been classified as MB patients if the lesion counting system would apply. Thus, the classification based on the number of lesions only was found to be 85% sensitive and 81% specific (using the BI as the gold standard) at detecting MB cases among the studied population. Sensitivity would have increased if patients would have been classified according to a combination of the number of lesions and the dipstick result. In that case patients are classified as MB when they are either dipstick positive (N = 16), have more than 6 lesions (N = 43), or both (N = 94). Patients negative for both dipstick and number of lesions would have been classified as PB (N = 111). The classification based on the number of lesions alone left 19 BI-positive cases classified as PB, while the combination method of the ML Dipstick and number of lesions left only 8 BI-positive cases classified as PB (5 borderline, 2 borderline lepromatous and 1 tuberculoid), thus preventing undertreatment. The combination method of the ML Dipstick and lesion counting was found to be 94% sensitive and 77% specific, which is an improvement of 9% (chi-squared test, p = 0.025) in sensitivity compared to lesion counting only. The results of this study indicate that testing all patients initially classified by lesion counting as PB (48% in our study population) with the dipstick can significantly contribute to improved classification of leprosy patients for treatment purposes.

Les services de contrôle de la lèpre sont confrontés au problème de la mauvaise classification des patients lépreux par le manque ou la qualité moyenne des services faisant les examens de suc dermique. La classification dans use catégorie incorrecte augmente le risque de rechute causée par un traitement insuffisant d'un patient multibacillaire (MB) classifié comme paucibacillaire (PB), ce qui augmente également le temps pendant lequel un patient est infectieux. L'Organisation Mondiale de la Santé (OMS) recommande à présent une autre classification basée sur le nombre des lésions cutanées. Son efficacité a cependant été mise en doute. Le but de notre étude était de déterminer l'utilité de la bandelette ML, un test simple de terrain visant à détecter les IgM dirigés contre les glycolipides phénoliques de type I de Mycobacterium leprae, pour aider à la classification des patients lépreux en complément du nombre des lésions. Cette étude porte sur 264 patients lépreux. Parmi 130 patients ayant un index bactérioscopique (IB) positif, 19 (14.6%) présentaient moins de 6 lésions et auraient été faussement considérés comme des patients PB. Parmi 134 patients ayant un IB négatif, 26 (19,4%) présentaient 6 lésions ou plus et ils auraient été classifiés comme des patients MB si le système du dénombrement des lésions est appliqué. Ainsi, on trouve une sensibilité de 85% et une spécificité de 81 % de la méthode de classification basée uniquement sur le nombre de lésions, en utilisant l'IB comme méthode de référence, pour détecter Les patients multibacillaires dans la population étudiée. La sensibilité serait augmentée si les patients étaient classés à l'aide d'une combinaison du nombre de lésions et des résultats apportés par l'utilisation de la bandelette. Dans ce cas les patients sont classés MB s'ils présentent une bandelette positive (N = 16), ont plus de 6 lésions (N = 43) ou les deux (N = 94). Les patients négatifs à la fois pour la bandelette et le nombre de lésions, seraient classés comme PB (N = 111). La classification basée uniquement sur le nombre de lésions a laissé pour compte 19 cas ayant un IB positif classé comme PB, tandis que la méthode combinant la bandelette ML et le nombre de lésions n'a laissé pour compte que 8 cas ayant un IB positif classé comme PB (5 borderlines. 2 lépromateux borderlines et un tuberculoïde), limitant ainsi l'étendue des traitements insuffisants. La méthode combinant la bandelette ML et le décompte des lésions est 94% sensible et 77% spécifique, ce qui est line amélioration de 9% (p = 0.025 au test chi-square) de la sensibilité par rapport au seul décompte des lésions. Le résultat de cette étude indique une amélioration significative de la classification des patients hanséniens à visée thérapeutique si on teste tous les patients initialement classés comme PB par le seul décompte des lésions (48% de la population étudiée ici) avec la bandelette ML.

Los servicios de control de la lepra se encuentran con el problema de los pacientes mal clasificados debido a la carência o a la pobre calidad de las unidades de lectura de los extendidos de linfa cutánea. La clasificación errónea aumenta el riesgo de recaída porque un paciente multibacilar (MB) podría ser tratado como paucibacilar (PB), prolongando así el tiempo en el que el paciente es infeccioso. La Organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda actualmente una clasificación alternativa basada en el número de lesiones en la piel, cuya confiabilidad ha sido cuestionada. Nuestra investigación estuvo orientada a determinar la utilidad de la prueba con la tira para PGL-I (un ensayo de campo simple para detectar anticuerpos IgM contra el glicolípido fenólico de Mycobacterium leprae) y el conteo de lesiones, en la clasificación de los pacientes. En el estudio se incluyeron 264 pacientes con lepra. De 130 pacientes con un indice bacteriano positivo (IB), 19 (14.6%) tuvieron menos de 6 lesiones y fueron clasificados como PB. De los 134 pacientes con un IB negativo. 26 (19.4%) tuvieron 6 o más lesiones y fueron clasfcados como MB según el sistema de cuenta de lesiones. La clasificación basada en el número de lesiones tuvo sólo una sensibilidad del 85% y una especificidad del 81% (usando el IB como estándar de oro) como sistema de detección de casos MB entre la población estudiada. La sensibilidad se habria incrementado si los pacientes se hubieran clasificado combinando los resultados de la cuenta de lesiones y de la tira para anticuerpos IgM. En ese caso, los pacientes serian clasificados como MB cuando son positivos por la tira (N = 16), cuando tienen más de 6 lesiones (N = 43), o cuando ocurren ambas cosas (N = 94). Los pacientes negativos en ambas pruebas habrían sido clasificados como PB (N = 111). La clasificación basada solamente en el número de lesiones dejó 19 casos con un IB positivo, clasficados como PB, mientras que la combinación de los métodos dejó sólo 8 casos IB positivos clasificados como PB (5 intermedios, BB; 2 lepromatosos subpolares y un tuberculoide, TT) previniendo así el tratamiento insuficiente del grupo de pacientes. La combinación de los métodos (cuenta de lesiones y la lira para anticuerpos anti-PGL-I) tuvo una sensibilidad del 94% y una especificidad del 77%, lo que representa una mejoría del 9% en sensibilidad (prueba de chicuadrada, p = 0.025), en comparación con la cuenta de lesiones sola. Los resultados de este estudio indican que se puede mejorar significativamente la clasificación de los pacientes (y su tratamiento), si todos los pacientes clasificados como PB por la cuenta de lesiones (48% en nuestra población de estúdio) se prueban también con la tira anti-PGL-I.

9- Estimating hidden prevalence in hansen's disease through diagnosis delay and grade of disability at time of diagnosis

Jair Ferreira; Sotero S. Mengue; Mario B. Wagner; Bruce B. Duncan

The objective of the present study was to propose a new method for the calculation of estimated hidden prevalence (EHP) in Hansen's disease (HD). We analyzed the records of 4142 HD patients diagnosed in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, between 1970 and 1991. Out of these 4142 cases, 3291 patients had their grade of disability (GD) evaluated at the time of diagnosis and provided information about the time elapsed between the appearance of the symptoms and the moment when HD was identified by a physician (diagnosis delay, DD). Mean DD for the sample (in years) was 1.51 for disability grade 0, 2.14 for grade 1,4.46 for grade 2, and 9.64 for grade 2. EHP was calculated taking into account only two strata of GD using the formula HP = [(NC-GD 0/1) × 2.0 + (CN-GD 2/3) × 5.0]/(CGE × PCP), where: NC-GD 0/1 = mean annual number of newly detected grades 0 or 1 cases; CN-GD 2/3 = mean annual number of newly detected grades 2 or 3 cases; CGE = proportion of newly detected cases with GD evaluated; PCP = proportion of the population covered by the state HD control program; 2.0 and 5.0 correspond to an approximation of the mean time in years of DD in each respective stratum of GD. Applying this model, we found an EHP of 529 cases which translates to an excess of 0.58 cases/10,000 population. We also conducted a multivariate analysis using a logistic regression model. This analysis revealed that, in addition to DD, other variables such as clinical form, age group, sex and mode of detection were independent risk factors for the presence of disabilities. We also found two significant effect modification factors: DD versus clinical form and DD versus age group. Taking these findings into consideration, a more complex model was used to calculate the EHP with 16 strata (defined by clinical form of the disease, age group, and GD f rom 0 to 3). An EHP of 502 cases (excess of 0.55/10,000) was obtained with this more complex model. This result differs only 5% f rom that of the simplified model. Therefore, we conclude that the simplified model is indicated to estimate hidden prevalence of HD in the field.

L'objectif de l'étude était de proposer une nouvelle méthode de calcul pour l'estimation de la prévalence cachée (EPC) dans la maladie de Hansen (MH). Nous avons analysé les dossiers de 4142 patients souffrant de MH diagostiqués dans l'état du Rio Grande do Sul, Brésil, entre 1970 et 1991. Parmi ces 4142 cas, 3291 patients eurent leur degré de handicap (DH) évalué au moment du diagnostic et donnèrent des informations sur le temps passé entre l'apparition des symptômes et le moment oû la MH fut identifiée par un médecin (délai de diagnostic, DD). Le DD moyen pour l'échantillon (en années) était de 1,51 pour le degré 0 de handicap, 2,14 pour le degré 1,4,46 pour le degré 2 et 9,64 pour le degré 3 de DH. L'EPC fut calculée en prenant en compte deux strates de DH et en utilisant la formule suivante: PC = [(NC-DH 0/1) × 2,0 + (CN-DH 2/3) × 5,0]/(CGE × PCP), où: NC-DH 0/1 représente le nombre moyen annuel de cas nouvellement détectés de degré de handicap 0 ou 1 ; CN-DH 2/3 = le nombre moyen annuel de nouveaux cas de DH de grade 2 ou 3; CGE = proportion de nouveaux cas détectés avec évaluation du DH; PCP est la proportion de la population couverte par de programme de contrôle public de MH; les chiffres 2,0 et 5,0 correspondent à une approximation du temps moyen en années de DD dans chaque strate de DH. En appliquant ce modèle, nous avons trouvé une EPC de 529 cas, ce qui correspond à un excès de 0,58 cas pour 10 000 habitants. Nous avons également procédé à une analyse à plusieurs variables en utilisant un modèle de régression logistique. Cette analyse a révélé que, en plus du DD, d'autres variables comme la forme clinique, le groupe d'âge, le sexe et le mode de détection étaient des facteurs indépendants de risque pour la présence d'un handicap. Nous avons aussi trouvé deux facteurs modificateurs d'effets: le DD versus la forme clinique et le DD versus le groupe d'âge. Ayant pris ces données en considération, un modèle plus complexe fut utilisé pour calculer l'EPC avec 16 strates (définies par les différentes formes cliniques de la maladie, les groupes d'âges, et les DH de 0 à 3). Une EPC de 502 cas (excès de 0,55/10 000) fut obtenue avec ce modèle plus complexe. Ce résultat ne diffère que de 5% par rapport à celui du modèle simplifié. Nous concluons donc que le modèle simplifié est celui qui est le plus indiqué pour estimer la prévalence cachée de la MH sur le terrain.

El objetivo del presente estúdio fue el proponer un nuevo método para el cálculo de la prevalencia oculta estimada (POE) en la enfermedad de Hansen (EH). Analizamos los expedientes de 4142 pacientes diagnosticados en el estado de Rio Grande do Sul, Brasil, entre 1970 y 1991. En 3291 pacientes se estableció el grado de discapacidad (GD) al momento del diagnóstico y los pacientes proporcionaron información sobre el tiempo de retardo en el diagnóstico, RD (tiempo transcurrido entre la aparición de sintomas y el diagnóstico de EH). El RD promedio en la muestra (en años) fue de 1.51 para el grado de discapacidad 0, 2.14 para el grado 1, 4.46 para el grado 2, y 9.64 para el grado 3. La POE se calculó tomando en cuenta sólo 2 estratos de GD usando la fórmula HP = [(NC-GD 0/1) × 2.0 + (CN-GD 2/3) × 5.0]/(CGE × PCP), donde NC-GD 0/1 = número promedio anual de casos nuevos con GD 0-1; CN-GD 2/3 = número promedio anual de casos nuevos con GD 2-3; CGE = proporción de casos nuevos detectados con evaluación de su GD; PCP = proporción de la población cubierta por el programa estatal de control de la EH; 2.0 y 5.0 corresponden a una aproximación del tiempo promedio en años de RD para cada estrato respectivo de GD. Aplicando este modelo, encontramos una POE de 529 casos, correspondientes a un exceso de 0.58 casos por una población de 10,000. También realizamos un análisis multivariado usando un modelo de regresión logística. Este análisis revelo que además del RD, otras variables, como la forma clínica, el grupo de edad, el sexo y el modo de detección, fueron factores de riesgo independientes relacionado con el desarrollo de discapacidades. También encontramos dos factores significantes modificadores de efectos. Tomando en consideración estos hallazgos, utilizamos un modelo más complejo para calcular la POE en 16 estratos (definidos por la forma clínica de la enfermedad, grupo de edad. y GD de 0 a 3). Con este modelo mâs complejo se obtuvo una POE de 502 casos (exceso de 0.55/10,000). Este resultado diliere únicamente en 5% del obtenido con el modelo simplificado. Por lo tanto, concluímos que el modelo simplificado es adecuado para calcular la prevalencia oculta de la EH en estudios de campo.