Vol. 61 N° 2 - Apr/May/Jun - 1993
ORIGINAL ARTICLE
1- BCG vaccination protects against leprosy in Venezuela: a case-control study
Jacinto Convit; Peter G. Smith; Manuel Zuniga; Celsa Sampson; Marion Ulrich; Jose A. Plata; Juan Silva; Jose Molina; Antonio Salgado
A total of 64,570 household and other close contacts of about 2000 leprosy cases were screened for eligibility for entry into a trial of a new leprosy vaccine. The screening procedure included a clinical examination for leprosy and for the presence of BCG and lepromin scars. Ninety-five new cases of leprosy were identified, and the prevalence of BCG and lepromin scars among them was compared with similar data f rom matched controls selected f rom among those with no evidence of leprosy. The difference in the prevalence of BCG scars in the two groups was used to estimate the protection against leprosy conferred by BCG vaccination. One or more BCG scars was associated with a protective efficacy of 56% (95% confidence limits 27% to 74%). There was a trend of increasing protection with four or more BCG scars, but this was not statistically significant. There was no evidence that the efficacy of BCG varied with age or according to whether or not the contact lived in the same household as a case. The protective effect was significantly higher among males, and was significantly greater for multibacillary than for paucibacillary leprosy.
On a examine un total de 64.570 contacts domiciliaires et autres proches contacts d'environ 2000 malades de la lèpre pour leur éligibilite à 1'incorporation dans un essai d'un nouveau vaccin anti-lépreux. La procedure comprenait un examen clinique pour la recherche de lèpre et la presence de cicatrices de BCG et de lépromine. Nonante-cinq nouveaux cas de lèpre ont été identifiés, et la prevalence des cicatrices de BCG et de lépromine parmie eux a été comparée avec les observations chez, des témoins appariés sélectionnés parmi les contacts ne présentant aucun signe de lèpre. La différence de la prevalence des cicatrices de BCG dans les deux groupes a été utilisée pour estimer la protection vis-à-vis de la lèpre conférée par la vaccination au BCG. Une ou plusieurs cicatrices de BCG était associée à une efficacité protectrice de 56% (limites de confiance à 95% : de 27% à 74%). Il y avait une tendance à l'augcmentation de la protection avec quatre cicatrices de BCG ou plus, mais celle-ci n'était pas statistiquement significative. Il n'y avait pas de signe que l'efficacité du BCG variait avec l'âge ou avec le fait que oui ou non le contact vivait dans la même maison qu'un malade. L'effet protectur était significativement plus élevé parmi les hommes, et était significativement plus grand pour la lèpre multibacillaire que pour la lèpre paucibacillaire.
Se examinaron 64,570 contados (convivientes y no con vi vientes) de aproximadamente 2000 pacientes con lepra, con el fin de cstablecer su cligibilidad para participar en un proyecto sobre una nueva vacuna antileprosa. El procedimientode tamisaje incluyó una evaluación clínica, buscando signos y sintomas de lepra, así como el registro de cicatrices producidas por el BCG o por la lepromina. Se identificaron 95 casos nuevos de lepra y la prevalência de cicatrices por BCG o lepromina entre ellos, se comparo con la prevalência de cicatrices observada en controles apareados seleccionados de los indivíduos que no tuvieron evidencias de la enfermedad. La diferencia en la prevalência de cicatrices por BCG entre los dos grupos se utilizo para calcular la protección contra la lepra conferida por la vacunación con BCG. Una o más cicatrices por BCG estuvieron asociadas con una eficácia protectora dei 56% (95% de confianza entre los limites deh 27% al 74%). La protección tendió a aumentar con cuatro o más cicatrices por BCG, pero este aumento no fuc de significancia estadística. No hubieron evidencias de que la eficácia dei BCG variara con la cdad o de que pudicra estar en función dei grado de convivência, esto es, de que el contacto viviera o no en la misma casa que el paciente. El efecto protector fue significativamente mayor entre los hombres, y también significativamente mayor para la lepra multibacilar que para la paucibacilar.
2- Cross-sectional assessment of ELISA reactivity in leprosy patients, contacts, and normal population using the semisynthetic antigen natural disaccharide octyl bovine serum albumin (ND-O-BSA) in Cebu, the Philippines
Roland V. Cellona; Gerald P. Walsh; Tranquilino T. Fajardo Jr.; Rodolfo M. Abalos; Eduardo C. dela Cruz; Laarni Guido-Villahermosa; Maria Victoria Fellcio-Balagon; Gerrit J. Steenbergen; James T. Douglas
An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using natural disaccharide octyl bovine serum albumin (ND-O-BSA) as antigen was used in testing leprosy patients, contacts and a normal population in Cebu, The Philippines, f rom 1985 to 1989. A total of 1413 persons were studied. The results suggested that ELISA reactivity and the bacterial index (BI) correlate in a general way. In multibacillary (MB) leprosy, positivity ranges f rom 54.2% to 92.3% among patients with a BI of < 2+ to > 4 + on the Ridley scale, with an overall average of 84.5%. Paucibacillary (PB) leprosy patients have a low degree of reactivity, with only 15.0% ELISA positive. The test is more efficient in detecting MB than PB leprosy. The contacts of MB leprosy showed 6.5% positivity; contacts of PB leprosy, 7.0% positivity. The normal population showed 1.7% positive ELISA or 17 per thousand population, which is very much less than that of the household contacts. However, because the normal population is a much larger population than the household contact population in a community, more new leprosy cases would emanate f rom it. Leprosy workers are concerned about the transmission of the disease to household contacts. However, for the reason stated above, we should be more concerned with the silent spread of the disease to the normal population in the community. Further studies are required along this line: One to determine whether there is a correlation between prevalence rates the rates of ELISA positivity in the normal population, the other is to find out if the rate of ELISA positivity in the normal population of a community can be used to monitor the efficiency of a leprosy control program.
Un test immuno-enzymatique indirect (ELISA) prenant un disaccharide naturel octyl de l'albumine scrique bovine (ND-O-BSA) comme antigène a été utilisé chez des malades de la lèpre, des contacts et une population normale à Cebu, aux Philippines, de 1985 à 1989. Un total de 1413 personnes a été étudié. Les résultats suggéraient de manière générale une correlation entre la réactivité de l'ELISA et l'index bactérien (IB). Dans la lèpre multibacillaire (MB), la positivité s'étendait de 54,2% à 92,3% parmi les patients avec un IB allant de moins de 2+ à plus de 4+ sur l'échelle de Ridley, avec une moyenne générale de 84,5%. Les patients atteints de lèpre paucibacillairc (PB) avaient un faible degré de réactivité, avec seulement 15% d'ELISA positifs. Le test est plus efficient pour la détection de la lèpre MB que la lèpre PB. Les contacts de patients MB ont montré une positivité de l'ELISA de 6,5%; les contacts de patients PB une positivité de 7%. La population normale avait une positivité à l'ELISA de 1,7%, ou 17 positifs pour milie personnes, ce qui est beaucoup plus faible que les taux observés pour les contacts domiciliarics. Cependant, du fait que la population normale est beaucoup plus grande que la population de contacts domiciliares dans une communauté, un plus grand nombre de nouveaux cas de lèpre en sortira. Le personnel impliqué dans la lutte contre la lèpre se soucie particulièrement de la transmission de la maladie parmi les contacts domiciliaires. Cependant, pour la raison énoncée ci-dessus, nous devrions nous sentir plus concernés par la dissémination silencieuse de la maladie dans la population normale. D'autres études sont nécessaires en ce sens: une pour déterminer s'il existe une correlation entre les taux de prévalence et les taux de positivité à l'ELISA dans la population normale; l'autre pour voir si le taux de positivité à l'ELISA dans la population normale à l'intérieur d'une communauté peut être utilisé pour monitorcr l'efficience d'un programme de lutte contre la lèpre
De 1985 a 1989 se utilizó en Cebu, Filipinas, un inmunoensayo enzimático (ELISA) indirecto para analizar la reactividad de los sueros de pacientes con lepra, de sus contactos y de la población sana, contra el antígeno disacárido natural-octil-albúmina sérica bovina (ND-O-BSA). El estudio incluyó un total de 1413 personas. Los resultados del ELISA y del índice bacteriano (BI) correlacionaron bien de manera general. En los casos de lepra multibacilar (MB), la positividad osciló del 54.2% al 93.2% entre los pacientes con un BI de menos de 2+ a más de 4+ en la escala de Ridley, con un promedio general del 84.5%. Los pacientes con lepra paucibacilar tuvieron un bajo grado de reactividad, con sólo un 15% de positivos por ELISA. La prueba resultó más eficiente en la detección de casos MB que PB. Los contactos de los casos MB mostraron una positividad del 6.5% por ELISA; los contactos de los casos PB, un 7.0% de positividad. La población normal mostró una positividad del 1.7% (o 17 por 1000 habitantes) por ELISA, mucho menor que la encontrada entre los contactos convivientes. Sin embargo, debido a que la población normal en una comunidad es mucho mayor que la población de contactos convivientes, seguramente surgirán de ella más nuevos casos de lepra. Aunque los trabajadores de la lepra están procupados por la transmisión de la enfermedad a los contactos convivientes, de acuerdo los datos anteriores es claro que todos deberíamos estar también muy procupados de la silenciosa dispersión de la enfermedad a la población normal en la comunidad. Se requieren más estudios, y más extensos, para determinar si hay correlación entre los grados de prevalência y la positividad por ELISA en la población normal, y para establecer si el grado de positividad por ELISA en la población normal de una comunidad se puede usar para "monitorear" la eficiência de un programa de control contra la lepra.
3- Tuberculosis in leprosy patients detected between 1902 and 1991 in French Polynesia
Philippe Glaziou; Jean-Louis Cartel; Jean-Paul Moulia-Pelat; Lam N'guyen Ngoc; Suzanne Chanteau; Régis Plichart; Jacques-Henri Grosset
From 1902 onward, notification and follow up of leprosy patients has been systematic in French Polynesia. Since 1960, a tuberculosis control program and a register has also been implemented. From 1902 to 1959, 673 cases of leprosy were detected [346 multibacillary (MB), 138 paucibacillary (PB), and 179 unclassified due to the loss of medical files by the time of classification which was done during the 1980s]. Of these 673 cases, 89 (13.2%) died f rom tuberculosis, giving a mean annual death rate of tuberculosis in leprosy patients of 232 per 100,000. Mortality f rom tuberculosis in leprosy patients detected between 1901 and 1930 was 20.7%, and decreased to 8.04% in patients detected f rom 1931 to 1959. In total, it was estimated that 26.4% of the leprosy cases had developed tuberculosis. From 1960 to 1991, 350 new cases of leprosy were detected (141 MB, 209 PB). Of them, 12 (3.4%) developed tuberculosis (7 before detection of leprosy, 5 after detection of leprosy). The dramatic decrease of the proportion of leprosy patients who developed tuberculosis between the periods 1902-1959(26.4%) and 1960-1991 (3.4%) might be related to the important decline of the tuberculosis situation since 1960. From 1902 to 1959, mortality f rom tuberculosis occurred significantly more frequently in MB patients (13%) than in PB patients [4%, relative risk (RR) = 3.21, p = 0.003]. From 1960 to 1991, the incidence of tuberculosis seemed more frequent in MB patients (RR = 2.96, p = 0.07) whatever the sequence of detection of the two diseases. Our study suggests that lepromatous patients could share factors of susceptibility to mycobacterial diseases with patients developing tuberculosis.
Depuis 1902, la notification et le suivi des malades de la lèpre a été systématique en Polynésie française. Depuis 1960, un programme de lutte contre la tuberculose a également été mis en route, ainsi qu'un registre. De 1902 à 1959, 673 cas de lèpre ont été détectés [346 multibacillaires (MB), 138 paucibacillaires (PB) et 179 sans classification suite à la perte du dossier médical au moment de la classification, qui fut réalisée dans le années quatre-vingts]. De ces 673 cas, 89 (13,2%) sont morts de tuberculose, donnant un taux annuel moyen de mortalité par tuberculose de 232 pour 100.000 chez les malades de la lèpre. La mortalité par tuberculose chez les lépreux détectés entre 1901 et 1903 était de 20,7% et a diminué à 8,04% chez les patients détectés de 1931 à 1959. Au total, on a estimé que 26,4% des malades de la lèpre avaient développé une tuberculose. De 1960 à 1991, 350 nouveaux cas de lèpre ont été détectés (141 MB, 209 PB). Parmi ceuxci, 12 (3,4%) ont développé une tuberculose (7 avant et 5 après la détection de la lèpre). La diminution spectaculaire de la proportion des malades de la lèpre qui ont développé une tuberculose entre les périodes 1902¬ 1959 (26,4%) et 1960-1991 (3,4%) pourrait être liée au déclin important de la tuberculose depuis 1960. Entre 1902 et 1959, la mortalité par tuberculose survenait sigificativement plus souvent chez des patients MB (13%) que chez des patients PB [4%, risque relatif (RR) = 3,21, p = 0,003]. De 1960 à 1991, l'incidence de la tuberculose paraissait plus fréquente chez des patients MB (RR = 2,96, p = 0,07) quel que soit l'ordre dans lequel les deux maladies avaient été détectées. Notre étude suggère que les malades lépromateux pourraient partager avec les patients tuberculeux des facteurs de susceptibilité aux maladies à mycobactéries.
A partir de 1902, la notificación y el seguimiento de los pacientes con lepra ha sido una práctica sistemática en la Polinesia Francesa. Desde 1960 también se ha implementado un programa de control y registro para la tuberculosis. De 1902 a 1959, se descubrieron 673 casos de lepra [346 multibacilares (MB), 138 paucibacilares (PB), y 179 no clasificados debido a la pérdida de los archivos médicos correspondientes]. Ochenta y nueve de estos 673 casos (13.2%) murieron de tuberculosis, dando una mortalidad media anual por tuberculosis de 232 por 100,000 pacientes con lepra. La mortalidad por tuberculosis que en los pacientes con lepra descubierta entre 1901 y 1930 fue del 20.7%, disminuyó al 8.04% en los pacientes descubiertos entre 1931 y 1959. Se calculó que el 26.4% de los casos de lepra habían desarrollado tuberculosis. De 1960 a 1991, se descubrieron 350 nuevos casos de lepra (141 MB, 209 PB). De ellos, 12 (3.4%) desarrollaron tuberculosis (7 antes y 5 después de la detección de la lepra). La dramática disminución en la proporción de pacientes con lepra que desarrollaron tuberculosis entre los periodos de 1902-1959 (26.4%) y de 1960-1991 (3.4%) podría estar relacionada con la importante disminución de tuberculosis observada desde 1960. De 1902 a 1959, la mortalidad por tuberculosis ocurrió más frecuentemente en los pacientes MB (13%) que en los PB [4%, riesgo relativo (RR) = 3.21, p = 0.003]. De 1960 a 1991, la incidencia de tuberculosis pareció ser más frecuente en los pacientes MB (RR = 2.96, p = 0.07), independientemente de la secuencia de detección de las dos enfermedades. Nuestro estudio sugiere que los pacientes lepromatosos comparten factores de susceptibilidad a las enfermedades por micobacterias con los pacientes que desarrollan tuberculosis.
4- Development of giant reaction in response to PPD skin test in lepromatous leprosy patients
Elizabeth Pereira Sampaio; Nadia Cristina Duppre; José Augusto de Costa Nery; André Luis Moreira; Euzenir Nunes Samo
The present study analyzes some clinical and immunological aspects of the giant reaction (GR) in lepromatous leprosy. Sixteen out of a total of 147 (10.9%) lepromatous patients developed the clinical features of GR upon the intradermal administration of PPD; most (14 of 16) GRs occurred in bacteriologically positive cases. GR precipitated an episode of erythema nodosum leprosum (ENL) in three patients. In addition, patients with GR showed enhanced in vitro response to PPD, by the lymphoproliferation test and interferon-gamma assay, as compared to either PPD-negative individuals or PPD-positive patients without GR. Therefore, cell-mediated-immune response to mycobacterial antigens is present in lepromatous patients with GR. It is suggested that the exacerbated in vivo response to PPD in lepromatous leprosy is the result of an increased immunoreactivity to the antigen, which well may be associated with the local and/or systemic release of cytokines [tumor necrosis factor-a (TNFα) and interferongamma (IFNγ)] by the inflammatory cells. These episodes may, in fact, play an important role in determining the development of disabilities and reactional states, thereby interfering with the prognosis of leprosy disease.
Cette étude analyse quelques aspects cliniques et immunologiqycs de la réaction géante (RG) dans la lèpre lépromateuse. Seize patients parmi un total de 147 patients lépromateux (10, 9%) ont développé les signes cliniques d'une RG suite à l'administration intradermique de PPD; la majorité des réetions (14 sur 16) sont survenues chez des malades bactériologiquement positifs. La RG a précipité un épisode d'érythème noueux lépreux (ENL) chez trois patients. De plus, les patients avec une RG ont montré une stimulation de leur réponse in vitro au PPD par le test de prolifération lymphocytaire et le titrage de l'interferon-gamma, en comparaison avec des patients, aussi bien négatifs que positifs au PPD, mais sans RG. Donc, la réponse à médiation cellulaire aux antigènes mycobactériens est présente chez les patients lépromateux avec RG. On émet l'hypothèse que la réponse exacerbée au PPD in vivo dans la lèpre lépromateuse est le résultat d'une augmentation de la réactivité immunologiquc à l'antigène, qui pourrait bien être associée à une libération locale ou systémique de cytokines [le facteur a de nécrose des tumeurs (FNTα) et l'interferon-gamma (IFNγ)] par les cellules inflammatoires. Ces épisodes pourraient en fait jouer un rôle important dans le dévcloppement f incapacites et d'états réactionnels, influençant ainsi le pronostic de la maladie lépreuse.
El presente estudio analiza algunos aspectos clinicos e inmunológicos de la reacción gigante (RG) en la lepra lepromatosa. Diez y seis de un total de 147 pacientes lepromatosos (10.9%), desarrollaron las características clínicas de la RG después de la administración intradérmica de PPD; la mayoría de las RG (14 de 16) ocurrieron en casos bacteriológicamente positivos. La RG desencadenó un episodio de eritema nodoso leproso (ENL) en 3 pacientes. Comparados con los individuos PPD-negativos o con los individuos PPDpositivos sin RG, los pacientes con RG también mostraron respuestas in vitro incrementadas al PPD, tanto en los ensayos de linfoproliferación como en los del interferón gamma. Lo anterior indica que la respuesta inmune celular hacia los antigenos micobacterianos está presente en los pacientes lepromatosos con RG. Se sugiere que la exacerbada respuesta in vivo al PPD en la lepra lepromatosa es el resultado de una incrementada reactividad al antígeno, la cual bien podría estar asociada con la liberación local y/o sistémica de citocinas [factor nécrosante de tumores alfa (TNFα) e interferón gamma (IFNγ)] por las células inflamatorias. Estos episodios bien podrían tener un papel determinante del desarrollo de incapacidades y de estados rcaccionales y por lo tanto podrían interferir en el pronóstico de la enfermedad leprosa.
5- Leprosy reversal reaction in HIV-Positive patients
Laurent Blum; Béatrice Flageul; Salif Sow; Pascal Launois; Marie-Domnique Vignon-Pennamen; Awa Coll; Jacques Millan
We report two cases of leprosy in HIV-infected patients who, by their clinical, histological and immunological features, enhance the evidence that HIV-positive leprosy does not differ f rom nonHIV-positive leprosy. Moreover, extensive studies of reversal reactions in HIV-positive patients might be of great interest in determining the exact pathogenesis of this leprosy reactional state.
Nous rapportons deux cas de lèpre chez des patients infectés par le VIH qui, par leurs caractéristiques cliniques, histologiques et immunologiqucs, renforcent l'évidence que la lèpre chez les patients séropositifs pour le VIH ne diffère pas de celle des séronégatifs. De plus, des études approfondies des réactions reverses chez des patients séropositifs pour le VIH pourraient être d'un grand intérêt pour déterminer la pathogénèse exacte de cet état réactionncl de la lèpre.
Informamos sobre dos casos de lepra en pacientes infectados con el virus de la inmunodcficicncia adquirida (HIV) quienes, por sus características clínicas, histológicas e inmunológicas, refuerzan la evidencia de que los pacientes con lepra HIV-positivos, no difieren de los pacientes con lepra HIV-negativos. El estudio cuidadoso y extensivo de las reacciones reversas en los pacientes HIV-positivos, podría resultar de gran valor para ayudar a entender la patogénesis exacta de este tipo de lepra reaccional.
6- Correlation between TNF production, increase of plasma C-Reactive protein level and suppression of T lymphocyte response to concanavalin a during erythema nodosum leprosum
Norma Tiraboschi Foss; Eduardo Brandt de Oliveira; Celio Lopes Silva
The complex symptoms observed in lepromatous leprosy patients with reactive episodes of the erythema nodosum leprosum (ENL) type are associated with different serum components actively participating in the acute inflammatory reaction. Among them are the tumor necrosis factor (TNF) and the acute-phase protein C-reactive protein (CRP). TNF and CRP were found at significantly more elevated concentrations in the serum of patients with ENL, with a positive correlation of about 95% when compared with patients with nonreactive lepromatous leprosy (L) or tuberculoid leprosy (T) or with control individuals. Furthermore, in another series of experiments CRP had a specific and significant suppressive action on concanavalin A (ConA)-induced lymphoproliferation in cultures f rom patients and controls, the reduction being more marked (75%) in patients with ENL. By extrapolation f rom its known actions, production of TNF may have a number of potential consequences for the immunobiology of ENL. Thus, TNF may cause direct injury to compromised cells, facilitating mononuclear cell activation and production of cytokines such as interleukin-1 and interleukin-6, and upregulating hepatocyte expression of CRP. Both CRP and TNF in high serum concentrations have the ability to enhance the acute inflammatory process in ENL, favoring increased macrophage activation and phagocytosis, and contributing to the elimination of damaged cells and bacilli, as well as in the reduction of T-suppressor cells, with a consequent improvement in the immunologic response of ENL patients.
Les symptômes complexes observés che/ les patients présentant une lèpre lépromateuse avec des épisodes réactionncls du type érythème noueux lépreux (ENL) sont associés avec différents composés du serum participant activement dans la réetion inflammatoire aigue. Parmi ceux-ci, il y a le facteur de nécrose des tumeurs (FNT) et la protéine C-réactive de phase aigue (CRP). Les FNT et CRP ont été trouvés à des concentrations significati vement plus élevées dans le serum de patients présentant un ENL, avec une correlation positive d'environ 95% par rapport à des patients présentant une lèpre lépromateuse non réactionnclle (L), une lèpre tuberculoidc (T) ou des témonis. De plus, dans une autre série d'expérimentations, la CRP avait une action spécifique et significativement suppressive sur la prolifération lymphocytaire induite par la concanavalinc A (ConA) dans des cultures provenant de patients et de témoins, la réduction étant plus marquée (75%) chez les patients avec ENL. Par extrapolation de ses actions connues, la production de FNT peut avoir plusieurs conséquences potentielles pour l'immunobiologic de l'ENL. C'est ainsi que le FNT peut causer un dommage direct à des cellules compromises, facilitant l'activation mononucléaire et la production de cytokines telles que rinterleukinc-1 et l'interleukine-6, et déregulant vers une augmentation la production hépatocytaire de CRP. La CRP et le FNT à hautes concentrations dans le serum ont le pouvoir de stimuler le processus inflammatoire aigu dans l'ENL, favorisant une activation macrophagique accrue et la phagocytose, et contribuant à l'élimination des cellules endommagées et des bacilles, avec comme conséquence une amélioration de la réponse immunologiquc des patients présentant un ENL.
Los complejos síntomas observados en los pacientes lepromatosos con reacción del tipo eritema nodoso leproso (ENL) están relacionados con la participación de diferentes componentes del suero dentro de los que se encuentran el factor necrosante de tumores (TNF) y la proteína C-reactiva (CRP) de fase aguda. El TNF y la CRP se encontraron a concentraciones significativamente más elevadas en el suero de los pacientes con ENL que en el suero de los pacientes lepromatosos no reactivos (L) o que en el suero de los individuos control. Además, en otro serie de experimentos, la CRP tuvo una significante y específica acción supresora sobre la linfoproliferación inducida por la concanavalina A (Con-A) en cultivos de pacientes y de controles, siendo la reducción más marcada (75%) la observada en los pacientes con ENL. Por extrapolación de sus efectos conocidos, la producción del TNF podría tener un gran número de consecuencias potenciales en la inmunobiología del ENL. Así, el TNF podría causar un daño directo a las células comprometidas, facilitando la activación de las células mononucleares y la producción de citocinas tales como intcrleucina-1 e interleucina-6, además de que podría estimular la expresión aumentada de CRP por los hepatocitos. Tanto el TNF como la CRP, en altas concentraciones tienen la habilidad de aumentar el proceso inflamatorio agudo en el ENL, favoreciendo la activación y la fagocitosis de los macrófagos, y contribuyendo a la eliminación de células y bacilos dañados, asi como a la reducción de células T supresoras, con la consecuente mejoría de la respuesta inmunológica en los pacientes con ENL.
7- Molecular cloning and characterization of contiguously located repetitive and single copy DNA sequences of Mycobacterium tuberculosis: development of PCR-Based diagnostic assay
P. Prabhakara Reddi; Gursaran P. Talwar; P. S. Khandekar
Screening of a λgt11 genomic library has been used as an approach for molecular cloning of the Mycobacterium tuberculosis repetitive DNA shown to be present on a previously described 5.6-kb Alu I genomic fragment. The recombinant clone R 18.8.2, which strongly hybridized with the radiolabeled 5.7-kb Alu fragment, carried two Eco RI inserts of 2 kb and 1.4 kb in size. Southern hybridization of each of these fragments to restriction endonucleasecleaved M. tuberculosis DNA clearly demonstrated the 2 kb to contain the repetitive DNA sequence, while the 1.4 kb is represented in a single copy. When replica plaque lifts f rom the genomic library were probed, the 5.6-kb genomic fragment and the cloned 2-kb repetitive insert hybridized to an identical number of plaques, indicating the similarity and the high copy number of the repeating unit shared by the two fragments. Restriction mapping and Southern hybridization patterns indicated that the 2-kb repetitive and the 1.4-kb single-copy DNA sequences originated f rom a contiguous piece of genomic DNA. Both fragments were found to be unique to members of the M. tuberculosis complex, except that the 2-kb insert exhibited a weak hybridization with M. kansasii DNA. Finally, a 169-bp region f rom one end of the single-copy sequence has been amplified by polymerase chain reaction (PCR) in a manner specific to members of the M. tuberculosis complex. The sensitivity of the PCR was such that as few as 9-10 bacilli could be detected.
L'analyse d'une librairie génomique λgt11 a été utilisée comme approche pour le clonage moléculaire de l'ADN répétitif de Mycobacterium tuberculosis dont on a montré la présence sur un fragment génomique Alu I de 5,6 kb précédemment décrit. Le clone recombinant RI8.8.2, qui s'hybridisait fortement avec le fragment Alu de 5,7 kb marqué par radioactivité, contenait deux fragments Eco RI d'une taille de 2 kb et 1,4 kb. L'hybridisation de chacun de ces fragments à l'ADN de M. tuberculosis clivé par une endonucléasc de restriction a clairement démontré que le fragment de 2 kb contenait la séquence d'ADN répétitif, tandis qu'un seul exemplaire du fragment de 1,4 kb est représenté. Lorsque des répliques en provenance de la librairie génomique ont été sondées, le fragment génomique de 5,6 kb et l'insert répétitif cloné de 2 kb s'hybridisaient avec un numbre identique de plaques, indiquant la similarité et le grande nombre d'exemplaires de l'unité répétitive que les deux fragments avaient en commun. La cartographie par restriction et l'hybridisation indiquaient que le fragment répétitif d'ADN de 2 kb et l'exemplaire unique de 1,4 kb provenaient de parties contiguës de l'ADN génomique. Les deux fragments se révélèrent spécifiques aux membres du complexe M. tuberculosis, si ce n'est que le fragment de 2 kb montrait une hybridisation faible avec l'ADN de M. kansasii. Finalement, une région de 169 bp d'une extrémité de la séquence unique a été amplifiée par une réaction de polymerase en chaîne (PCR) d'une manière spécifique aux membres du complexe M. tuberculosis. La sensibilité de la PCR était telle que des bacilles en nombre aussi faible que 9 ou 10 pouvaient être détectés.
Se hizo el tamisaje de una genoteca preparada en λgt11 para después intentar la clonación de la secuencia repetitiva del DNA del Mycobacterium tuberculosis presente en el fragmento genómico Alu I de 5.6 kb. La clona recombinante R 18.8.2, la cual hibridizó fuertemente con el fragmento Alu 5.7-kb radiomarcado, contuvo dos insertos Eco RI de 2 kb y 1.4 kb, respectivamente. La hibridización de cada uno de estos fragmentos con el DNA del M. tuberculosis fraccionado por endonueleasas de restricción, demostró claramente que el fragmento de 2 kb contuvo la secuencia repetitiva de DNA, mientras que el framento de 1.4 kb se expresó en una sola copia. El análisis de la réplicas de las placas de la genoteca, mostró que el fragmento genómico de 5.6 kb y el inserto repetitivo de 2 kb, hibridizaron con un número idéntico de placas, indicando la similitud y el alto número de copias de la unidad repetitiva compartida por los 2 fragmentos. Los patrones de restricción y de hibridización indicaron que tanto la secuencia de DNA repetitiva (2 kb) como la contenida en una sola copia (1.4 kb), se originaron de secuencias contiguas en el DNA genómico. Se encontró que ambos fragmentos fueron exclusivos de los miembros del complejo del M. tuberculosis, aunque el inserto de 2 kb exhibió una débil hibridización con el DNA de M. kansasii. Finalmente, utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se ha amplificado una región de 169 pb de uno de los extremos déla secuencia contenida una sola copia (1.4 kb), la cual ha resultado ser especifica para los miembros del complejo M. tuberculosis. La sensibilidad del PCR fue tal que permitió detectar desde 9-10 bacilos.
8- Serologic responses to nerve antigens in sooty mangabey monkeys with experimental leprosy
Sang-Nae Cho; Bobby J. Gormus; Keyu Xu; Rudolf P. Bohm Jr.; Gerald P. Walsh; Wayne M. Meyers; Joo-Deuk Kim
Eight sooty mangabey monkeys were inoculated intravenously and intradermally with varying doses of Mycobacterium leprae f rom 4.8 x 107 to 4.8 x 1010. Serum samples were obtained f rom the animals at intervals of about 3 months for 90 months, and were examined for IgM and IgG antibodies to nerve antigens, including ceramide, galactocerebroside (GC), and asialo-GM, (AGM1), using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The serological results were then compared with clinical findings, particularly nerve involvement. Of 8 mangabey monkeys inoculated with M. leprae, 7 animals had clinical leprosy; 6 of them had nerve damage, including neurologic deformities in 4 monkeys and nerve enlargement in 2. Median time for the initial signs of leprosy was 10 months postinoculation (p.i.), a range f rom 4 to 35 months. In contrast, nerve damage was noted rather late, about 35 to 86 months p.i. (median 54 months). The major immunoglobulin class to ceramide, GC, and AGM1 antigens was IgM, and the antibody responses to the nerve antigens appeared f rom 15 to 63 months p.i. (median 37 months). Antineural antibodies were thus detectable about 18 months (range -2 to 60 months) prior to observable nerve damage. In addition, elevation of antineural antibody levels were predictive of clinical exacerbation of the disease and neuritic damage. This study suggests that antineural antibodies are produced during the course of M. leprae infection and may be indicative of nerve damage, such as neurological deformities or nerve enlargement, in leprosy patients.
On a inoculé huit singes mangabey par voies intraveineuse et intradermique avec du Mycobacterium leprae à des doses variant de 4, 8 x 107 à 4, 8 X 1010. On a prélevé des échantillons de serum chez les animaux à intervalles d'environ trois mois durant nonante mois, et on a recherché la présence d'anticorps IgG et IgM vis-à-vis d'antigènes nerveux, y compris le ceramide, legalactocebroside (GC) et l'asialo-GM, (AGM1) par un test immuno-enzymatique (ELISA). Les résultats sérologiques ont été comparés avec les observations cliniques, en particulier l'atteinte nerveuse. Parmi les huit singes mangabey inoculés avec du M. leprae, sept avaient une lèpre clinique; six d'entre eux avaient une atteinte nerveuse, avec des déformités d'origine neurologique chez quatre singes et un épaississemente de nerfs chez deux d'entre eux. L'intervalle de temps médian pour l'apparition des premiers signes de lèpre suite à l'inoculation était de 10 mois, allant de 4 à 35 mois. Par contre, l'atteinte nerveuse a été notée plutôt tardivement, environ 35 à 86 mois après l'inoculation (médiane 54 mois). La principale classe d'immunoglobulines vis-à-vis des antigènes ceramide, GC, et AGM1 était du type IgM et les réponses par anticorps aux antigènes nerveux sont apparus entre le quinzième et le soixante-troisième mois après l'inoculation (médiane 37 mois). Des anticorps dirigés contre les nerfs étaient donc détectables environ 18 mois (de 2 à 60 mois) avant qu'on puisse observer des dégâts nerveux. De plus, une augmentation des taux d'anticorps vis-à vis des nerfs prédisait une exacerbation clinique de la maladie et une détérioration nerveuse. Cette étude suggère que des anticorps vis-àvis des nerfs sont produits dans le décours de l'infection par M. leprae et peuvent indiquer une atteinte nerveuse chez les malades de la lèpre, telle que des déformités d'origine neurologique ou un épaississement des nerfs.
Se inocularon 8 monos mangabey pardos con difcrentres cantidades de Mycobacterium leprae (de 4.8 x 107a 4.8 X 1010) por las vías intravenosa c itradermiea. Después, a intervalos de 3 meses, se obtuvieron muestras de suero durante 90 meses, y en los sueros se buscaron anticuerpos I gM c IgG contra antígenos del sistema nervioso, incluyendo un cerámido, un galactoccrebrósido (GC), y un asialo-GM, (AGM1), usando un inmunoensayo enzimático (ELISA). Los resultados scrológicos se compararon con los hallazgos clínicos, particularmente con el daño a nervios. De los 8 monos mangabey inoculados con M. leprae, 1 animales desarrollaron la enfermedad: 6 de ellos mostraron daño a nervios, incluyendo deformidades ncurológicas en 4 monos y engrosamiento nervioso en 2 de ellos. El tiempo promedio de aparición de los síntomas de la lepra fue de 10 meses postinoculación (p.i.), con un rango de 4 a 35 meses. En contraste, el daño a nervios se notó más tardiamente, entre los 35 y los 86 meses p.i. (mediana d3 54 meses). La inmunoglobulina predominante contra los tres antígenos (cerámido, GC y AGM1) fue de la clase IgM, y las respuestas en anticuerpos contra los antigenos aparecieron entre los 15 y los 63 meses p.i. (mediana de 37 meses). Así, los anticuerpos antineurales fueron detectados aproximadamente 18 meses (rango de -2 a 60 meses) antes de la aparición clínica del daño a nervios. Además, la elevación de los niveles de anticuerpos antineurales fue predictiva de la exacerbación clínica de la enfermedad y del daño neurítico. Este estudio sugiere que los anticuerpos antineurales se producen durante el curso de la infección por el M. leprae y que su presencia puede ser indicativa del daño a nervios. Esto podría ocurrir en los pacientes con lepra que muestran alteraciones ncurológicas o engrosamicnto de nervios.
9- Recognition of Mycobacterium leprae antigens with antibodies present in sera f rom patients with lepromatous leprosy
Alfonso E. Islas-Rodríguez; Cecilia M. Guillen-Vargas; Mary Fafutis-Morris; Fernando Alfaro-Bustamante; Roberto Morales-Ortiz; Amado Gonzalez-Mendoza; Iris Estrada-Parra
A great diversity of antigens f rom Mycobacterium lepraehavc been described. One practical approach should be to utilize them as markers to indicate when a household contact is at risk of becoming infected and then moving to an active form of leprosy. For this purpose, sonic extracts of M. leprae were fractionated in 10% SDS-PAGE under reducing conditions. The fractionated proteins were then transferred to nitrocellulose sheets and incubated with sera f rom lepromatous leprosy cases, their contacts, and normal subjects in order to reveal the frequency of antigen recognition of each set of sera. The results showed that sera f rom lepromatous leprosy patients frequently recognized two proteins, one of approximately 28 kDa and the other of approximately 65 kDa, when compared with the sera f rom normal subjects. The contacts frequently recognized an approximately 16-kDa antigenic band, while sera f rom normal subjects recognized one protein of approximately 18 kDa. According to the results, the four recognized proteins f rom M. leprae can be considered markers of the above conditions (approximately 65 kDa, approximately 28 kDa for lepromatous leprosy, approximately 16 kDa for contacts, and approximately 19 kDa for normal subjects). From these, an easy serological test, such as an ELISA, can be developed to predict if a contact is moving toward lepromatous leprosy before detection of the actual clinical signs or symptoms.
Une grande diversité d'antigènes en provenance de Mycobacterium leprae ont été décrits. Une approche orientée vers la pratique pourrait être de les utiliser comme marqueurs pour indiquer quand un contact domiciliaire est à risque de s'infecter et ensuite de migrer vers une forme active de lèpre. Dans ce but, des extraits soniqués de M. leprae ont été fractionnés par SDS-PAGE à 10% dans des conditions réductrices. Les protéines fractionnées ont alors été transférées sur des membranes de nitrocellulose et incubées avec du serum de patients lépromateux, leurs contacts et des sujets en bonne santé, afin d'étudier la fréquence de reconnaissance de l'antigène dans chaque set de serums. Les résultats ont montré que les serums de malades lépromateux reconnaissaient fréquemment deux protéines, l'une d'environ 28 kDa et l'autre d'environ 65 kDa, par comparaison avec les serums des personnes en bonne santé. Les contacts reconnaissaient fréquemment une bande antigénique d'approximativement 16 kDa, tandis que les serums provenant d'individus sains reconnaissaient une protéine d'environ 18 kDa. D'après les résultats, les quatre protéines provenant de M. leprae qui ont été reconnues peuvent être considérées comme des marqueurs des conditions ci-dessus (environ 65 kDa et environ 28 kDa pour la lèpre lépromatcuse, environ 16 kDa pour les contacts et environ 19 kDa pour les individus en bonne santé). A partir de celles-ci, un test serologique aisé, tel qu'un ELISA, peut être développé afin de prédire, avant la détection des signes cliniques ou des symptômes, si un contact est en train de migrer vers une lèpre lépromateuse.
Se ha descrito una gran variedad de antígenos del Mycobacterium leprae. Una aplicación prática de ésto podria ser la utilización de estos antígenos como marcadores del riesgo que tienen los contactos de infectarse y de moverse después hacia alguna forma activa de la lepra. Con este propósito se fraccionaron extractos sonicados de M. leprae por PAGE-SDS en geles al 10% bajo condiciones de reducción. Las proteínas fraccionadas se transfirieron después a membranas de nitrocelulosa y se incubaron con sueros de casos de lepra lepromatosa, de sus contactos, y de sujetos normales, para poder revelar la frecuencia de reconocimiento antigenico de cada juego de sueros. Los resultados mostraron que los sueros de los pacientes lepromatosos reconocieron frecuentemente dos proteínas, una de aproximadamente 28 kDa y otra de aproximadamente 65 kDa, los contactos reconocieron frecuentemente una banda de aproximadamente 16 kDa, y los sueros de los individuos normales reconocieron una proteína de aproximadamente 18 kDa. De acuerdo a estos resultados, las cuatro proteínas reconocidas del M. leprae podrían considerarse como marcadores de las condiciones anteriores (aproximadamente 65 kDa y aproximadamente 28 kDa para lepra lepromatosa, aproximadamente 16 kDa para contactos, y aproximadamente 19 kDa para individuos sanos). Con base en los resultados señalados, se podría desarrollar una prueba serológica, tal como un ELISA, para predecir el desplazamiento de un contacto hacia el extremo lepromatoso de la lepra, antes de la aparición de los síntomas y signos clínicos de la enfermedad.
10- Therapeutic efficacy of some new quinolones and a combination of ofloxacin with rifampin against Mycobacterium leprae infection induced in athymic nude mice
Haruaki Tomioka; Hajime Saito
Ofloxacin (OFLX), having superior antileprosy activity among the various quinolones, was studied for its combined therapeutic efficacy with rifampin (RMP) against Mycobacterium leprae infection induced in nude mice. When OFLX (3 mg/mouse) was given to infected mice in combination with RMP (0.01 mg/mouse) by gavage once daily six times per week, f rom day 31 to day 80 postinfection, a significant combined effect was observed. This study demonstrates the possibility of using OFLX in multidrug regimens for the clinical control of bacilliferous leprosy patients.
L'olloxacinc (OFLX), qui a une activité antiléprcuse supérieure parmi les différentes quinolones, a été étudiée pour son efficacité thérapeutique en combinaison avec la rifampicine (RMP) vis-à-vis de l'infection par Mycobacterium leprae chez la souris nue. Quand l'olloxacinc (3 mg par souris) était donnée aux souris infectées en combinaison avec la rifampicine (0.01 mg par souris) par gavage une fois par jour six fois par semaine, du trente et unième au quatrevingticme jour après l'infection, on observait un effet combine significatif. Cette étude démontre la possibilité d'utiliser l'oxfloxacinc dans des régimes de polychimiothérapie pour le traitement de patients bacillifères.
Se estudió la eficacia terapéutica de una combinación de rifampicina (RMP) con ofioxacina (OFLX), la quinolona de mayor actividad antilcprosa, sobre la infección inducida por el Mycobacterium leprae en el ratón desnudo. Cuando se administró la OFLX (3 mg/ratón) en combinación con RMP (0.01 mg/ratón) por la via oral, una vez al día, seis veces por semana, del día 31 al día 80 postinfección, se observó un significante efecto terapéutico combinado. Este estudio demuestra la posibilidad de usar OFLX en esquemas de poliquimioterapia para el control clínico de los pacientes con lepra bacilífera.
11- In vivo antileprosy activity of the newly synthesized benzoxazinorifamycin, KRM-16481
Haruaki Tomioka; Hajime Saito
The in vivo anû-Mycobacterium leprae activity of the newly synthesized benzoxazinorifamycin, KRM-1648, was studied. KRM-1648 was given orally to athymic nude mice, infected subcutaneously with M. leprae in the hindfoot pad, at doses between 0.001 and 0.01 mg of the drug/mouse/day six times per week, f rom day 31 to day 80. KRM-1648 administration markedly suppressed bacterial growth in the foot pads for 360 days.KRM-1648 given daily at the dose of 0.01 mg/mouse elicited a 2-4-log decrease in the number of acid-fast bacilli. The therapeutic effects of KRM-1648 were significantly higher than that of rifampin when both drugs were given in the same dosage. Moreover, when mice were fed a KRM 1648-containing diet (0.00004%-0.0004%), the drug displayed an even higher efficacy against M. leprae infection, causing an almost 4-log decrease in the number of leprosy bacilli in the infected foot pad compared to untreated controls.
L'activité anti-Mycobacterium leprae in vivo de la benzoxazinorifamycine, KRM-1648, nouvellement synthétisée, a été étudiée. Le KRM-1648 a été administré oralement à des souris nues athymiques, infectées par voie sous-cutanée dans la patte arrière par du M. leprae, à des doses entre 0,001 et 0,01 mg par souris et par jour six fois par semaine, du jour 31 au jour 80. L'administration de KRM-1648 supprimait de façon marquée la croissance bactérienne dans les coussinets plantaires pour 360 jours. Le KRM-1648 administré quotidiennement à la dose de 0,01 mg par souris entraînait une réduction de 2 à 4 log du nombre de bacilles acido-résistants. Les effets thérapeutiques du KRM1648 étaient significativement plus élevés que ceux de la rifampicine quand les deux médicaments étaient donnés aux mêmes doses. De plus, quand les souris étaient nourries avec un régime contenant du KRM 1648 (0,0000 4%-0,0004º/o), le médicament montrait une efficacité encore plus élevée vis-à-vis de l'infection par M. leprae, causant une diminution de près de 4 log du nombre de bacilles lépreux dans les coussinets plantaires infectés par rapport aux témoins non traités.
Se estudió el efecto in vivo de la droga recién sintetizada benzoxazinorifamicina, KRM-1648, contra el Mycobacterium leprae. La droga se administró oralmente a ratones atímicos infectados subcutáneamente con M. leprae en la almohadilla plantar, a dosis entre 0.001 y 0.01 mg/ratón/día, seis veces por semana, del día 31 al dia 80. La administración de KRM-1648 suprimió marcadamente el crecimiento bacteriano en la almohadilla plantar durante 360 días. La KRM1648 administrada oralmente a la dosis de 0.01 mg/ ratón, condujo a una disminución de 2-4 log en el número de bacilos. Los efectos terapéuticos de KRM1648 fueron significativamente mayores que aquellos de la rifampina cuando ambas drogas se administraron en las mismas dosis. Además, cuando los ratones fueron alimentados con una dicta conteniendo KRM-1648 (0.00004%-0.0004%), el efecto de la droga contra el M. leprae fue todavía mayor, causando una disminución de casi 4 log en el número de bacilos en la almohadilla plantar en relación a los controles no tratados.
12- Effect of recombinant interferon gamma administration on lesional monocytes/macrophages in lepromatous leprosy patients
Krowidi S. R. SivaSai; Hanumanthappa K. Prasad; Radhey S. Misra; Venkatesh Ramesh; Daphne Wilfred; Indira Nath
Hydrogen peroxide (H2O2) and superoxide anion (O
) were estimated in lesional cells f rom 10 lepromatous leprosy patients injected intralesionally with recombinant interferon-gamma (rIFN-γ). Clinically similar contralateral lesions injected with excipient served as controls. Lesional esterase-positive cells (suggestive of monocytes/ macrophages) f rom rIFN-γ-injected sites of many subjects showed net increments in the H2O2 and O levels compared to controls. When these cells were exposed to Mycobacterium leprae in vitro, there was a downregulation of O in 4 of 5 subjects. Such inhibition was not observed in rIFN-γ-injected sites. From the present studies it was not possible to determine whether the above effects of rIFN-γ were primarily on lesional mature macrophages or on newly migrated young monocytes. Erythema and induration were observed at the cytokine-injected site but not at the control site between 24 and 72 hr. A monthly slit-skin smear examination of the former site showed a bacterial index (BI) reduction compared to the controls in 4 of 10 patients, this reduction occurring as early as 4 to 8 weeks. Histopathology of the biopsies of 6 of 10 subjects between 9 and 10 months showed a further BI decrease attributable to rIFN-γ and not to the subsequently instituted chemotherapy.
) were estimated in lesional cells f rom 10 lepromatous leprosy patients injected intralesionally with recombinant interferon-gamma (rIFN-γ). Clinically similar contralateral lesions injected with excipient served as controls. Lesional esterase-positive cells (suggestive of monocytes/ macrophages) f rom rIFN-γ-injected sites of many subjects showed net increments in the H2O2 and O levels compared to controls. When these cells were exposed to Mycobacterium leprae in vitro, there was a downregulation of O in 4 of 5 subjects. Such inhibition was not observed in rIFN-γ-injected sites. From the present studies it was not possible to determine whether the above effects of rIFN-γ were primarily on lesional mature macrophages or on newly migrated young monocytes. Erythema and induration were observed at the cytokine-injected site but not at the control site between 24 and 72 hr. A monthly slit-skin smear examination of the former site showed a bacterial index (BI) reduction compared to the controls in 4 of 10 patients, this reduction occurring as early as 4 to 8 weeks. Histopathology of the biopsies of 6 of 10 subjects between 9 and 10 months showed a further BI decrease attributable to rIFN-γ and not to the subsequently instituted chemotherapy.Le peroxyde d'hydrogène (H2O2) et l'anion superoxyde (O) ont été dosés dans des cellules provenant des lésions de 10 patients lépromateux chez qui on avait injecté en intralésionnel de l'interféron-gamma recombinant (IFN-γr). Des lésion cliniquement similaires situées sur l'autre moitié du corps et à l'intérieur desquelles on avait injecté un excipient ont servi de témoins. Les cellules esterasc-positives (suggestives de monocytes/macrophages) en provenance des sites où on avait injecté de l'IFN-γr ont montré chez beaucoup de patients de nettes augmentations des taux d'H2O2 et d'O par rapport aux témoins. Quand ces cellules ont été exposées au Mycobacterium leprae in vitro, il y eut une diminution de l'O chez 4 des 5 patients. Une telle inhibition n'a pas été observée au niveau des sites où on avait injecté de l'IFN-γr. A partir de ces analyses, il ne fut pas possible dse déterminer si les effets de l'IFN-γr ci-dessus se rapportaient premièrement à des macrophages mûrs ou à des jeunes monocytes nouvellement migres. De l'érythème et une induration ont été observés au site d'injection de cytokine mais non au site témoin entre la vingt-quatrième heure et la septante-deuxième heure. Un examen mensuel de frottis cutané du premier site a montré une diminution de l'index bactérien (IB) par rapport aux témoins pour 4 des 10 patients, cette diminution survenant de manière aussi précoce qu'entre la quatrième et la huitième semaine. L'histopathologie des biopsies de 6 des 10 patients entre 9 et 10 mois a montré une poursuite de la réduction de l'IB attribuable à l'IFN-γr et non à la chimiothérapie instaurée ultérieurement.
) ont été dosés dans des cellules provenant des lésions de 10 patients lépromateux chez qui on avait injecté en intralésionnel de l'interféron-gamma recombinant (IFN-γr). Des lésion cliniquement similaires situées sur l'autre moitié du corps et à l'intérieur desquelles on avait injecté un excipient ont servi de témoins. Les cellules esterasc-positives (suggestives de monocytes/macrophages) en provenance des sites où on avait injecté de l'IFN-γr ont montré chez beaucoup de patients de nettes augmentations des taux d'H2O2 et d'O par rapport aux témoins. Quand ces cellules ont été exposées au Mycobacterium leprae in vitro, il y eut une diminution de l'O chez 4 des 5 patients. Une telle inhibition n'a pas été observée au niveau des sites où on avait injecté de l'IFN-γr. A partir de ces analyses, il ne fut pas possible dse déterminer si les effets de l'IFN-γr ci-dessus se rapportaient premièrement à des macrophages mûrs ou à des jeunes monocytes nouvellement migres. De l'érythème et une induration ont été observés au site d'injection de cytokine mais non au site témoin entre la vingt-quatrième heure et la septante-deuxième heure. Un examen mensuel de frottis cutané du premier site a montré une diminution de l'index bactérien (IB) par rapport aux témoins pour 4 des 10 patients, cette diminution survenant de manière aussi précoce qu'entre la quatrième et la huitième semaine. L'histopathologie des biopsies de 6 des 10 patients entre 9 et 10 mois a montré une poursuite de la réduction de l'IB attribuable à l'IFN-γr et non à la chimiothérapie instaurée ultérieurement.Se estimó la cantidad de peróxido de hidrógeno (H2O2) y del anión superóxido (O) en las células lesiónales de pacientes lepromatosos inyectados intralesionalmente con interferon gamma recombinante (rIFN-γ). Como controles se incluyeron las lesiones contralesionales inyectadas con excipiente. Comparadas con las células de las lesiones control, las células lesiónales esterasa positivas (sugestivas de monocitos/ macrófagos) de los sitios inyectados con rIFN-γ de muchos sujetos mostraron incrementos netos en sus niveles de H2O2 y O. Cuando estas células se expusieron al Mycobacterium leprae in vitro, se observó una disminución de la producción de O en 4 de 5 pacientes. Tal inhibición no se observó en los sitios inyectados con rIFN-γ. No fue posible determinar si los efectos del rIFN-γ fueron primariamente sobre los macrófagos lesiónales maduros o sobre los monocitos recién llegados a la lesión. Los sitios inyectados con citocinas mostraron eritema e induración 24 a 72 horas después. El examen mensual de los extendidos de linfa cutánea del sitio inyectado con rIFN-γ, mostró una reducción en el índice bacteriano (Bl) en 4 de 10 pacientes; esta reducción ocurrió tempranamente, entre las 4 y las 8 semanas. El estudio histopatológico realizado entre las 9 y 10 semanas después de la inyección del rIFN-γ, mostró una disminución adicional del BI en 6 de 10 pacientes. Este efecto se atribuyó al rIFN-γ y no a la quimioterapia instituida subsecuentemente.
) en las células lesiónales de pacientes lepromatosos inyectados intralesionalmente con interferon gamma recombinante (rIFN-γ). Como controles se incluyeron las lesiones contralesionales inyectadas con excipiente. Comparadas con las células de las lesiones control, las células lesiónales esterasa positivas (sugestivas de monocitos/ macrófagos) de los sitios inyectados con rIFN-γ de muchos sujetos mostraron incrementos netos en sus niveles de H2O2 y O. Cuando estas células se expusieron al Mycobacterium leprae in vitro, se observó una disminución de la producción de O en 4 de 5 pacientes. Tal inhibición no se observó en los sitios inyectados con rIFN-γ. No fue posible determinar si los efectos del rIFN-γ fueron primariamente sobre los macrófagos lesiónales maduros o sobre los monocitos recién llegados a la lesión. Los sitios inyectados con citocinas mostraron eritema e induración 24 a 72 horas después. El examen mensual de los extendidos de linfa cutánea del sitio inyectado con rIFN-γ, mostró una reducción en el índice bacteriano (Bl) en 4 de 10 pacientes; esta reducción ocurrió tempranamente, entre las 4 y las 8 semanas. El estudio histopatológico realizado entre las 9 y 10 semanas después de la inyección del rIFN-γ, mostró una disminución adicional del BI en 6 de 10 pacientes. Este efecto se atribuyó al rIFN-γ y no a la quimioterapia instituida subsecuentemente.13- Extent, origin, and implications of observer variation in the histopathological diagnosis of suspected leprosy
Paul E. M. Fine; Charles K. Job; Sebastian B. Lucas; Wayne M. Meyers; Jörg M. Pönnighaus; Jonathan A. C. Sterne
Identical slides f rom 100 biopsies obtained f rom individuals suspected of having leprosy, ascertained in a total population survey in Malawi, were examined twice, independently, by three histopathologists. Results were reported in a standard protocol, and were compared among themselves and with a standardized clinical assessment of each "suspect." The proportion of biopsies considered to show definite evidence of leprosy ranged f rom 29 to 55 among the six evaluations (twice by each of three histopathologists). Comparisons of variations within and between histopathologists revealed three different patterns. Two of the pathologists were very consistent as individuals, but differed markedly between themselves in that one was the least inclined and the other the most inclined to report definite evidence of leprosy. The third pathologist was less consistent, reporting appreciably more definite leprosy on the first than on the second examination of the same biopsies. Although acid-fast bacilli (AFB) were reported on at least 1 examination in 40 of the biopsies, they were observed in all six examinations of only six of the biopsies. There was greater agreement regarding classification than regarding diagnosis, except with reference to the indeterminate category which was employed more frequently by one histopathologist than by the other two. A workshop of participants at the end of the investigation highlighted several reasons for the variations observed. The fact that AFB were reported in only nine biopsies by one histopathologist but in 33 by another reveals the importance of the examination method and time in arriving at a diagnosis of leprosy. The differences in the interpretation of cellular evidence of inflammation revealed the need for further studies of nerve-related pathology in nonleprosy conditions to serve as a reference against which to judge possible evidence of leprosy per se.
Des préparations identiques en provenance de 100 biopsies obtuenues chez des personnes suspectes de lèpre, découvertes lors d'une enquête dans une population entière au Malawi ont été examinées deux fois de manière indépendante par trois pathologistes. Les résultats ont été rapportés selon un protocole standard et ont été comparés entre eux et avec une évaluation clinique standardisée de chaque suspect. La proportion des biopsies considérées comme montrant des signes clairs de lèpre s'étalait de 29 à 55 pour les six évaluations (deux fois par chacun des trois histopathologistes). La comparaison des variations intra- et interhistopathologistes a révélé trois tendances différentes. Deux des pathologistes étaient très cohérents avec euxmêmes, mais différaient de manière marquée entre eux en ce sens que l'un était le moins enclin et l'autre le plus enclin à rapporter des signes clairs de lèpre. Le troisième pathologiste était moins cohérent, rapportant nettement plus de cas de lèpre lors du premier que lors du second examen des mêmes biopsies. Bien que des bacilles acido-résistants (BAR) aient été rapportés pour au moins un examen dans quarante des biopsies, ceuxci ont été observés pour seulement six biopsies lors des six examens. Il y avait un meilleur accord concernant la classification que concernant le diagnostic, sauf pour la catégorie indéterminée, qui était utilisée plus fréquemment par un pathologiste que par les deux autres. Une réunion de travail des participants, tenue à la fin de la recherche, a mis en humière différentes raisons pour les variations observées. Le fait que des BAR aient été rapportés pour seulement neuf biopsies par un histopathologiste mais pour trent-trois par un autre révèle l'importance de la méthode d'examen et du facteur temps avant d'arriver à un diagnostic de lèpre. Les différences dans l'interprétation des signes cellulaires d'inflammation ont révélé le besoin pour des études supplémentaires des pathologies non-lépreuses en rapport avec les nerfs pour servir de pointe de comparaison afin de juger des signes possibles de lèpre.
Tres histopatólogos examinaron, en 2 ocasiones diferentes, laminillas idénticas preparadas a partir de 100 biopsias tomadas de individuos bajo sospecha de tener lepra. El estudio se hizo en Malawi. Los resultados se registraron en un protocolo estándar y se compararon entre sí y con los datos clínicos correspondientes a cada individuo bajo sospecha. La proporción de biopsias consideradas para decidir la existencia de evidencias definitivas de la lepra varió de 29 a 55 entre las 6 evaluaciones (dos por cada uno de los 3 histopatólogos). Los histopatólogos fueron individualmente muy consistentes pero difirieron marcadamente entre ellos. Mientras que uno de ellos fue el más inclinado a reportar evidencias definitivas de la lepra, otro fue el menos inclinado, en tanto que el tercero fue menos consistente, reportando apreciablemente más lepra definitiva en el primer examen que en el segundo examen de la misma biopsia. Aunque los bacilos ácido resistentes (AFB) fueron reportados en cuando menos 1 examen, en 40 de las biopsias, éstos fueron observados en los 6 examenes de sólo 6 de las biopsias. Hubo más concordancia en relación a la clasificación que al diagnóstico, excepto que la categoria indeterminada fue empleada más frecuentemente por un histopatólogo que por los otros dos. La discusión conjunta de los participantes al final de la investigación apuntó varias razones de las discrepancias observadas. El hecho que los AFB fueran reportados en solo 9 biopsias por un histopatólogo y en 33 por otro, revela la importancia del método de examen y el tiempo requerido para llegar al diagnóstico de lepra. Las diferencias en la interpretación de las evidencias celulares de la inflamación, revelaron la necesidad de ampliar los estudios sobre la patología relacionada a nervios en condiciones no leprosas, con el fin de tomar los hallazgos como referencia contra la cual se pueda hacer el estudio diferencial de la lepra.
EDITORIAL
14- Leprosy and the case of king Baldwin iv of Jerusalem: mycobacterial disease in the crusader states of the 12th and 13th centuries
Piers D. Mitchell
CORRESPONDENCE
15- Erythema nodosum leprosum in a case of histoid leprosy
Surrinder Kaur; Sandipan Dhar; Vinod K. Sharma; Ruma Ray
16- Necrotic erythema nodosum leprosum; a presenting manifestation of lepromatous leprosy
Kaushal K. Verma; Ravinder K. Pandhi
17- Attempts to grow Mycobacterium leprae in a medium with palmitic acid as the substrate
Mohammed Ishaque