Vol. 64 N° 1 - Jan/Feb/Mar - 1996

ORIGINAL ARTICLE

1- Detection of Mycobacterium leprae in nerve lesions by the polymerase chain reaction

Philippe Chemouilli; Sally Woods; Gerard Said; Stewart T. Cole


A simple procedure is described for the detection of Mycobacterium leprae by the polymerase chain reaction in nerve biopsies sectioned with a cryostat and then treated with proteinase K. All samples f rom lepromatous leprosy patients and the majority of samples f rom paucibacillary cases yielded positive results. This approach may be useful for differentiating between leprosy and other inflammatory neuropathies.
On décrit un procédé simple pour la détection de Mycobacterium leprae par la réaction de polymerase en chaîne dans un nerf biopsie sectionné par un cryostat et traité ensuite par proteinase K. Tous les échantillons provenant de patients lépromateux et la majorité des échantillons provenant de cas paucibacillaires ont donné des résultats positifs. Cette approche peut être utile pour différencier la lèpre d'autres neuropathies inflammatoires.
Se describe un procedimiento para la detección de Mycobacterium leprae por la reacción en cadena de la polimerasa en secciones de biopsias de nervios pretratadas con proteinasa K. Todas las muestras de los pacientes lepromatosos y la mayoría de los pacientes paucibacilares dieron resultados positivos. Este enfoque puede ser útil para diferenciar entre la lepra y otras neuropatías inflamatorias.

2- Immunological profiles of leprosy patients and healthy family contacts toward M. leprae antigens

Subburaj llangumaran; Sheela Ramanathan; Nallakandypanangadan Shankernarayan; Gopal Ramu; Veerappan Muthukkarauppan


In this study, we measured simultaneously the in vitro and in vivo T lymphocyte reactivities and the antibody responses of leprosy patients and healthy family contacts (HFC) toward Mycobacterium leprae antigens. The in vitro lymphoproliferativc response of the HFC to leprosin A was comparable to that of tuberculoid leprosy patients. However, their skin-test reactivity to Dharmcndra lepromin was considerably higher compared to the in vitro response to leprosin A. A significant number of HFC failed to respond to M. leprae antigens, both in vitro and in vivo, and the unresponsiveness to either test was not related to the type of leprosy patients in the household. A marginal correlation was observed between the skin-test reactivity of HFC and the age of the individuals. Even though a significant proportion of HFC showed positive anti-PGL-I IgM levels, none showed a positive titer in the serum antibody competition test toward the M. leprae-specihe epitope My2. A positive anti-PGL-I IgM response together with a negative lepromin skin-test reactivity showed a clear downward trend f rom the lepromatous pole toward the tuberculoid pole. A small number of HFC, all contacts of lepromatous patients, were lepromin skin-test negative with positive anti-PGL-I IgM levels, but the majority among them showed T-cell reactivity to mycobacterial antigens in vitro. These results are discussed in relation to immunological correlates of the susceptibility to M. leprae infection.
Dans cette étude, nous avons mesuré simultanément la réactivité in vitro et in vivo des lymphocytes T et les réponses en anticorps de malades de la lèpre et de contacts familiers en bonne santé vis-à-vis des antigènes de Mycobacterium leprac. La réponse de prolifération lymphocytaire in vitro des contacts vis-à-vis de la léprosinc A était comparable à celle des patients présentant une lèpre tuberculoide. Cependant, leur réactivité au test cutané avec la lépromine de Dharmendra était considérablement plus élevée que la réponse in vitro vis-à-vis de la léprosine A. Un nombre significatif de contacts ne répondait pas aux antigènes de M. leprae. aussi bien in vitro qu'in vivo, et il n'y avait pas d'association entre leur non-réponse aux tests et le type de lèpre du malade dont ils étaient les contacts. Une correlation faible a été observée entre la réactivité des contacts au test cutané et l'âge des individus. Même si une proportion significative des contacts a montré des taux positifs d'IgM anti-PGL-I, aucun n'a montré un titre positif dans le test de compétition d'anticorps sériques vis-à-vis de l'épitope My2 spécifique de M. leprae. Une réponse positive d'IgM anti-PGL-I associée à un test cutané à la lépromine négatif, montrait une nette tendance à la diminution depuis le pole lépromateux jusqu'au pole tuberculoide. Un petit nombrae de contacts, tous contacts de malades lépromateux, présentait un test cutané à la lépromine négatif ainsi que des taux positifs d'IgM anti-PGL-I, mais la majorité d'entre eux montrait une réactivité des cellules T vis-à-vis des antigènes mycobactériens. Ces résultats sont discutés en rapport avec les correlations immunologiques de la susceptibilité visà-vis de l'infection à M. leprae.
En este estudio se midieron simultáneamente las reactividades in vitro e in vivo de los línfocitos T, y las respuestas en anticuerpos de pacientes con lepra y sus convivientes sanos (CS) contra antígenos de Mycobacterium leprac. La respuesta Iinfoproliferativa in vitro de los CS a la leprosina A fue comparable a la de los pacientes con lepra tuberculoide. Sin embargo, su reactividad en piel a la lepromina de Dharmendra fue considerablemente mayor que la respuesta in vitro a la leprosina A. Un número considerable de CS no respondieron a los antígenos de M. leprac, ni in vitro ni in vivo, pero esto no estuvo relacionado con el tipo de lepra del paciente conviviente. Se observó una correlación marginal entre la reactividad en piel de los CS y la edad de los individuos. Aún cuando una importante proporción de CS tuvieron niveles mcdibles de anticuerpos IgM anti-PGL-I, ninguno mostró anticuerpos contra el epitopo My2 específico de M. leprae. La presencia de anticuerpos IgM anti-PGL-I y la reactividad en piel negativa a la lepromina, mostraron una clara tendencia a revertir del extremo lepromatoso al extremo tuberculoide de la enfermedad. Un pequeño número de CS, todos contactos de pacientes LL, fueron lepromino negativos y tuvieron anticuerpos IgM anti-PGL-I pero la mayoría de ellos mostraron reactividad celular T (in vitro) hacia antígenos micobacterianos. Estos resultados se discuten en relación a los factores inmunológicos de susceptibilidad a la infección por M. leprae.

3- A survey of leprosy impairments and disabilities among patients treated by MDT in burkina faso

Alexandre Tiendrebeogo; Idrissou Toure; Petit-Jean Zerbo


Since 1990, Burkina Faso, a West African country, has carried out a national leprosy control program treating with WHO/MD T nearly 12,000 patients between 1990 and 1994. A sample survey of 600 cases among these patients showed that 29.8% were disabled cases. There was a predominance of males, older patients, the multibacillary form of leprosy, and former cases treated with dapsone before MDT. The actual rate increased 8.5% compared to the frequency of disabilities at detection (21.3%). The need for disability care was estimated, respectively, at 24.4% and 5% for primary and secondary grades of disability. These important needs were so great that the authors recommend the planning and initiation of a physical rehabilitation and disability prevention program in this country.
Depuis 1990, le Burkina Faso, un pays d'Afriquc occidentale, a realise un programme national de lutte contre la lèpre, traitant par PCT/OMS pros de 12.000 malades entre 1990 et 1994. Une enquête par échantillonnage de 600 cas parmi ces patients a montré que 29.8% d'entre eux étaient porteurs d'incapacités. Il y avait une prédominance d'hommes, de patients âgés, de forme multibacillaire de lèpre, et de cas traités antérieurement par dapsone avant la PCT. Le taux observé était plus élevé de 8.5% par rapport à la fréquence des incapacités à la détection (21.3%). Les besoins de soins pour incapacités ont été estimés à respectivement 24.4% et 5% pour les incapacités de grade I et II. Ces besoins étaient si grands que les auteurs recommandent la planification et la mise en route d'un programme de réhabilitation physique et de prévention des incapacités dans le pays.
Desde 1990, Burkina Faso, un país Africano occidental, ha implementado un programa nacional de control contra la lepra consistente en el tratamiento con PQT/OMS, de casi 12,000 pacientes entre 1990 y 1994. Una exploración de 600 casos entre estos pacientes mostró que el 29.8% fueron casos discapacitados. Hubo un predominio de hombres, de pacientes viejos, de la forma multibacilar de la lepra, y de casos tratados con dapsona antes de instituirse la PQT. La frecuencia de incapacidades aumentó en un 8.5% en comparación con la frecuencia encontrada al momento de su detección (21.3%). Se calculó la necesidad de atención de las incapacidades en un 24.4% y en un 5%, para los grados primario y secundario de incapacidad, respectivamente. Estas necesidades fueron tan grandes que los autores recomiendan la plancación y la iniciación de un programa de rehabilitación física y de prevención de las incapacidades en este país.

4- Immunotherapy of far-advanced lepromatous leprosy patients with low-dose convit vaccine along with multidrug therapy (Calcutta trial)

Vibek Majumder; Ashutosh Mukerjee; S. K. Hajra; B. Saha; Kunal Sana


This report describes a promising mode of treatment of lepromin-unresponsive, faradvanced, lepromatous (LL) leprosy patients with antileprosy vaccines as an adjunct to multidrug therapy (M DT). The Trial Groups included 50 highly bacilliferous, lepromin-negative, untreated LL patients. They were given MDT for 2 years. Of them, 30 patients were administered a mixed antileprosy vaccine containing killed Mycobacterium leprae of human origin plus A/. bovis BCG. The remaining 20 patients were given M. bovis BCG. Depending on the severity of lepromin unresponsiveness, they were given one to six inoculations at 3-month intervals. Another 20 similar LL patients were taken in the Control Group. They were given only MDT for 2 years. F rom the start of the study, all patients belonging to the Trial and Control Groups were followed every 3 months for clinical, bacteriological and immunological outcomes. Within 2 years all 50 patients of the Trial Groups and 19 of the 20 patients of the Control Group became clinically inactive and bacteriologically negative. However, the clinical cure and the falls of the bacterial and morphological indexes were much faster in those patients receiving the mixed vaccine therapy than in those patients who were given BCG plus MDT or only MDT. The immunological improvements in the patients of the Trial and Control Groups were assessed by: a) lepromin testing at the beginning of the study and at 3-month intervals and also by b) the in vitro leukocyte migration inhibition (LMI) test at both the beginning and end of the study. As the patients were given more and more vaccinations, the incidence of lepromin conversion increased, more so in the patients receiving the mixed vaccine. Thus, 63%, 15% and 5% of the patients became lepromin positive in those patients receiving the mixed vaccine, BCG, and MDT only, respectively. Lamentably, the vaccine-induced lepromin positivity was temporary and faded away within several months. At the beginning of the study, the LMI test against specific M. leprae antigen was negative in all patients of both the Trial and Control Groups. After the end of the chemo-immunotherapy schedule, the LMI test became positive in 50% and 20% of LL patients receiving the mixed vaccine and BCG, respectively. None of the Control Group could show LMI positivity after completion of the MDT schedule. These results show that treatment of LL patients with the mixed vaccine and MDT could quickly reverse the clinical course of the disease, remove immunologic anergy in some patients, and induce a rapid decrease in the bacterial load in them.
Ce rapport décrit un mode de traitement prometteur par vaccins anti-lépreux comme complément à la polychimiothérapic (PCT) pour des malades de la lèpre présentant une lèpre lépromateuse très avancée (LL) ne répondant pas à la lépromine. Le groupe expérimental comprenait 50 patients LL non traités, hautement bacillifères et négatifs à la lépromine. On leur a donné la PCT pendant deux ans. Parmi eux, 30 ont reçu le vaccin anti-lèpre mixte, contenant du Mycobacterium leprae d'origine humaine tué par la chaleur; les autres 20 patients ont reçu du BCG de M. bovis. Selon le degré de non-réponse à la lépromine, ils ont reçu de une à six injections à trois mois d'intervalle.
Un autre groupe de 20 patients LL semblables ont été pris dans le groupe témoin. Ils ont reçu seulement la PCT pour deux ans.
Depuis le début de l'étude, tous les patients appartenant au groupe expérimental et au groupe témoin ont été suivis tous les trois mois du point de vue clinique, bactériologique et immunologiquc. Endéans deux ans, tous les 50 patients du groupe expérimental et 19 des 20 témoins du groupe témoin sont devenus cliniquement inactifs et bactériologiquement négatifs. Cependant, la guérison clinique et la chute des indices bactériens et morphologiques furent beaucoup plus rapides parmi les patients ayant reçu un vaccin mixte que parmi les patients ayant reçu le BCG avec la PCT ou la PCT seule. Les améliorations immunologiqucs chez les patients du groupe expérimental et du groupe témoin ont été évaluées par a) le test à la léprominc au début de l'étude et à chaque intervalle de trois mois, et également par b) le test d'inhibition de la migration leucocytaire (IML) au début et à la fin de l'étude. Comme les patients recevaient de plus en plus de vaccins, l'incidence de la conversion à la léprominc augmentait, plus encore parmi les patients recevant le vaccin mixte. Ainsi, respectivement 63%, 15% et 5% des patients devinrent positifs à la léprominc parmi les patients recevant le vaccin mixte, le BCG, et la PCT seule. Malheureusement, la positivité à la léprominc induite par le vaccin ne fut que temporaire et disparut en l'espace de quelques mois. Au début de l'étude, le test IML vis-à-vis de l'antigène spécifique de M. leprae était négatif pour tous les patients des groupes expérimental et témoin. A la fin du schéma de chimio-immunothérapic, le test IML devint positif chez respectivement 50% et 20% des patients LL recevant le vaccin mixte et ceux recevant le BCG. Aucun patient du groupe témoin n'a pu montrer une positivité à l'IML à la lin du schéma PCT.
Les résultats montrent que le traitement des patients LL avec un vaccin mixte et la PCT pourrait modifier rapidement l'évolution clinique de la maladie, supprimer l'anergie immunologique chez certains patients, et induire une diminution rapide de la charge bactérienne.
Este reporte describe un modo promisorio de tratamiento con vacunas antileprosas complementarias al tratamiento con poliquimioterapia (PQT) de pacientes con lepra lepromatosa avanzada (LL) negativos a la lepromina. El grupo de prueba incluyó 50 pacientes LL altamente bacilíferos, lepromina negativos y sin tratamiento previo. Los pacientes recibieron PQT durante 2 años. De ellos, 30 pacientes recibieron una vacuna mixta preparada con Mycobacterium leprae inactivado, de origen humano; los 20 pacientes restantes recibieron M. bovis. BCG. Dependiendo de la severidad de la anergia a la lepromina los pacientes recibieron de una a seis dosis de vacuna con intervalos de 3 meses. Otros 20 pacientes LL similares, recibieron sólo la PQT durante 2 años (grupo control).
Desde el comienzo del estudio, todos los pacientes fueron valorados cada 3 meses desde el punto de vista clínico, bacteriológico c inmunológico. En 2 años todos los pacientes tratados con vacunas y 19 de los 20 pacientes del grupo control se tornaron clínicamente inactivos y bacteriológicamente negativos. Sin embargo, la curación clínica y la caída de los índices bacteriológico y morfológico fueron mucho más rápidas en los pacientes que recibieron la terapia con vacuna mixta que en los pacientes que recibieron BCG más PQT o solo la PQT. La mejoría inmunológica en los pacientes de los grupos de ensayo y control se estableció (a) por pruebas dérmicas con lepromina al inicio del estudio y después a intervalos de 3 meses, y (b) por la prueba de inhibición de la migración de leucocitos (IML) realizada al inicio y al final del estudio. La frecuencia de conversión positiva a la lepromina aumentó conforme los pacientes recibieron más y más vacunaciones, y esto fue más claro en los pacientes que recibieron la vacuna mixta. Así, el 63%, cl 15%, y el 5% de los pacientes se tornaron lepromino-positivos cuando recibieron, respectivamente, la vacuna mixta, BCG, y la PQT sola. Lamentablemente, la positividad a la lepromina inducida por la vacunación fue temporal y se desvaneció por completo después de varios meses. Al comienzo del estudio, la prueba de IML con antígenos especificos de M. leprae fue negativa en todos los pacientes de ambos grupos. Al final de la PQT, la prueba de IML se hizo positiva en el 50% y el 20% de los pacientes LL que recibieron la vacuna mixta o BCG, respectivamente. Ninguno de los pacientes del grupo control mostró una prueba de IML positiva después de completar el tratamiento con PQT.
Estos resultados muestran que el tratamiento de los pacientes LL con vacuna mixta y PQT puede revertir rápidamente el curso clínico de la enfermedad, remover la anergia inmunológica en algunos pacientes, e inducir una rápida disminución de la carga bacteriana en ellos.

5- Reduction of epidermal cell proliferation in skin lesions in lepromatous leprosy is greater than in indeterminate and tuberculoid leprosy lesions

Maria Heloisa R. Palermo; Ithamar Vugman; Raoul N. Fleury; Sergio Zucoloto


We have compared epidermal cell proliferation in skin biopsies f rom areas with lesions to contralateral areas without lesions in patients with indeterminate, tuberculoid and lepromatous leprosy. Cell proliferation was determined as the percentage of labeled cells in the basal and suprabasal epidermal layers, using autoradiographic preparations of skin biopsies taken 1 hr after a 3H-thymidine intradermal injection. We have found a significant reduction in epidermal cell proliferation in areas with lesions in the three groups of patients. The greatest reduction occurred in lepromatous patients. In lesions of patients with indeterminate or tuberculoid leprosy, the reduction was the same, and in both groups it was smaller than in lepromatous patients. In the areas without lesions, the index of labeled cells was similar to that of "normal" skin of nonleprosy patients.
In the contralateral unaffected areas f rom leprosy patients and in "normal" skin f rom nonleprosy patients, as well as in affected areas f rom patients with indeterminate leprosy, epidermal cell labeling was greater in the suprabasal layer than in the basal layer.
In lesions of lepromatous patients, cell labeling was greater in the basal layer than in the suprababal layer. Our findings suggest that the reduction of epidermal cell proliferation in leprosy patients is restricted to the cell-mediated immune response, more intense in lepromatous leprosy. It does not seem to be related to denervation, which is greater in tuberculoid leprosy.
Nous avons comparé la prolifération de cellules épidermiques dans des biopsies cutanées provenant de régions présentant des lésions avec celles provenant de régions contralatérales sans lésions chez des patients présentant une lèpre indéterminée, tuberculoide et lépromateuse. La prolifération cellulaire a été déterminée par le pourcentage de cellules marquées dans les couches épidermiques básales et suprabasales, utilisant des préparations autoragiographiques de biopsies cutanées prélevées une heure après l'injection intradermique de 3H-thymidinc. Dans les trois groupes de patients, nous avons trouvé une réduction significative de la prolifération cellulaire épidermique dans les zones présentant des lésions. La réduction la plus forte survenait chez les patients lépromateux. Au niveau des lésions de patients présentant une lèpre indéterminée ou tuberculoide, la réduction était semblable, et dans les deux groupes elle était plus faible que chez les malades lépromateux. Dans les régions sans lésions, le pourcentage de cellules marquées était similaire à celui de la peau "normale" de témoins non-lépreux.
Dans les régions contralatérales non atteintes de malades de la lèpre et dans la peau "normale" de témoins non-lépreux, ainsi que dans les régions atteintes de patients présentant une lèpre indéterminée, le pourcentage de cellules épidermiques marquées était plus élevé dans la couche suprabasale que dans la couche basale. Dans les lésions des malades lépromaleux, le pourcentage de cellules marquées était plus élevé dans la couche basale que dans la couche suprabasale.
Nos observations suggèrent que la réduction de la prolifération cellulaire épidermique chez les malades de la lèpre est limitée à la réponse immunitaire à médiation cellulaire, étant plus forte dans la lèpre multibacillaire. Cela ne semble pas être associé à une dénervation, qui est plus importante dans la lèpre tuberculide.
Se comparó la proliferación de las células epidérmicas en las biopsias de piel de áreas con lesiones con aquellas de regiones contralatcrales sin lesiones, en pacientes con lepra indeterminada, tuberculoide y lepromatosa. La proliferación celular se determinó como el porcentaje de células marcadas en las capas epidérmicas basai y suprabasal utilizando preparaciones autorradiográñeas de biopsias de piel tomadas 1 h después de la inyección intradérmica de timidina tritiada.
Se encontró una significante reducción en la proliferación de células epidérmicas en las áreas con lesiones de los 3 grupos de pacientes. La mayor reducción ocurrió en los pacientes lepromatosos. En las lesiones de los pacientes con lepra indeterminada o tuberculoide, la reducción fue la misma, y en ambos grupos fue más pequeña que en los pacientes lepromatosos. En las áreas sin lesiones, el índice de células marcadas fue similar al de la piel normal de los pacientes no leprosos.
En las áreas contralatcrales no afectadas de los pacientes con lepra y en la piel normal de los individuos sin lepra, así como en las áreas afectadas de los pacientes con lepra indeterminada, el mareaje de las células epidérmicas fue mayor en la capa suprabasal que en la capa basai. En las lesiones de los pacientes lepromatosos el mareaje de células fue mayor en la capa basal que en la suprabasal.
Nuestros hallazgos sugieren que la reducción de la proliferación de las células epidérmicas en los pacientes con lepra (más intensa en la lepra lepromatosa) está relacionada con el nivel de respuesta inmune celular y que no parece estar relacionada con denervación, la cual es mayor en la lepra tuberculoide.

6- Viability of Mycobacterium leprae in skin and peripheral nerves and persistence of nerve destruction in multibacillary patients after 2 years of multidrug therapy

Charles K. Job; Joseph Jayakumar; Maria Aschhoff; Minnie M. Mathan


The pathological changes, bacterial load, and viability of Mycobacterium leprae in the skin and nerves of nine lepromatous leprosy patients who had undergone 2 years of multidrug therapy (MDT) were studied. M. leprae and varying amounts of their remnants were present in the nerves and skin of all but one patient. M. leprae isolated f rom skin biopsies of six patients and nerve biopsies of nine patients were inoculated into mouse foot pads. No growth was obtained f rom any one of them. During the electron-microscopic examination of three nerve biopsies, only one specimen showed a small number of solid-staining M. leprae. These findings would explain the low relapse rate in patients treated with 2 years of lix-duration MDT. Results of a long-term follow up of patients is awaited with interest. The possibility of nerve paralysis due to intraneural microreaction and fibrosis consequent to the continued presence of dead bacterial remnants should be seriously considered.
On a étudié les modifications pathologiques, la acharge bactérienne, et la viabilité de Mycobacterium leprae dans la peau et les nerfs de neuf patients lépromateux qui avaient suivi deux ans de polychimiothérapic (PCT). M. leprae et des quantités variables de leurs résidus étaient présents dans les nerfs et la peau de tous les patients, à l'exception d'un seul. Des M. leprae isolés de biopsies cutanées provenant de six patients et de biopsies de nerfs de neuf patients ont été inoculés dans le coussinet plantaire de souris. On n'a obtenu aucune croissance pour aucune d'entre elles. Lors de l'examen par microscopic électronique de trois biopsies nerveuses, seul un spécimen a montré un petit nombre de M. leprae uniformément colorés. Ces observations expliqueraient le faible taux de récidive chez les patients traités par une PCT de durée fixe de deux ans. Les résultats d'un suivi à long terme des patients sont attendus avec intérêt. La possibilité d'une paralysie nerveuse duc à une microréaction intraneurale et à la fibrose consécutive à la présence continue de résidus de bactéries mortes devrait être sérieusement prise en considération.
Se estudiaron los cambios patológicos, la carga bacteriana y la viabilidad de Mycobacterium leprae en la piel y los nervios de 9 pacientes lepromatosos que habían recibido poliquimioterapia (POT) durante 2 años. M. leprae y cantidades variables de sus residuos estuvieron presentes en la piel y nervios de todos los pacientes menos en uno. Las bacterias aisladas de las biopsias de piel de 6 pacientes y de las biopsias de nervio de 9 pacientes fueron inoculadas en las almohadillas plantares del ratón. En ningún caso se obtuvo crecimiento. En el examen por microscopía electrónica de 3 biopsias de nervios, sólo un espécimen mostró un pequeño número de M. leprae con tinción sólida. Estos hallazgos explicarían la baja frecuencia de recurrencias en los pacientes tratados por 2 años con PQT. Se esperan con interés los resultados de un seguimiento más prolongado de los pacientes. Por otro lado, debe considerarse muy seriamente la posibilidad de parálisis neural debida a la microrreacción intraneural y a la fibrosis resultante de la continua presencia de los remanentes bacilares.

7- Rapid village survey to determine the size of the leprosy problem in Khon Kaen province, Thailand

Somdej Pinitsoontorn; Pieter A. M. Schreuder; Aroon Chirawatkul; Sompong Srisaenpang; Piya Piyasilpa; Sastri Saowakontha


The rapid village survey (RVS) method has been developed as a simpler, less-expensive alternative to random sample surveys for determining the prevalence of leprosy and was compared with a total population survey (TVS). In the RVS, the cluster population receives clear information about the disease, and those with symptoms are invited to be examined by the survey team. A list of household contacts and suspects was made and those on the list were actively traced. The registered population was 20,815; 10 new patients were found among the 2034 people self-reporting in the RVS, 0 among the household contacts and suspects, and an additional 2 new patients in the TVS. There were 12 registered patients among the sample population. The prevalence rate found by the RVS was 1.06 per 1000 (95% CI = 0.49-1.63) and in the TVS 1.16 per 1000 (95% CI = 0.5-1.77). The man-days and costs of an RVS are considerably less than those for a TVS. It was concluded that the RVS is a valid replacement for the TVS as conducted in Khon Kaen Province, Thailand. The RVS can be applied under low-endemic conditions and could be carried out by the general hcalth staff.
La méthode d'Enquête Rapide de Village (ERV) a été développée comme une méthode plus simple et moins chère, alternative à l'enquête par échantillonnage aléatoire, pour déterminer la prévalence de la lèpre, et a été comparée à l'enquête de population totale. Dans l'ERV, le groupe de population reçoit une information claire à propos de la maladie, et les personnes qui présentent des symptômes sont invitées à se faire examiner par l'équipe. Une liste des contacts domiciliaires et des suspects a été établie et les personnes notées sur la liste ont été activement recherchées. La population enregistrée était de 20,815 personnes; 10 nouveaux patients ont été découverts parmi les 2034 personnes venues d'elles-mêmes au cours de l'ERV, aucun parmi les contacts domiciliaries et les suspects, et deux nouveaux patients supplémentaires dans l'enquête de population totale. Il y avait 12 patients enregistrés parmi la population de l'échantillon. Le taux de prévalencc obtenu par l'ERV était de 1.06 pour 1000 (L.C. à 95%: 0.5-1.77). Le nombre de personnes-jours et les coûts de l'ERV étaient considérablement moins élevés que ceux d'une enquête de population totale. On en conclut que l'ERV est un bon substitut à l'enquête de population totale telle que conduite dans la Province de Khon Kaen en Thaïlande. L'ERV peut être appliquée dans des conditions de basse cndémicité et pourrait être réalisée par le personnel général de santé.
Se ha desarrollado un método de exploración rápida de pequeñas poblaciones (MERPP) como una alternativa más simple y menos cara de muestreo par a determinar la prcvalcncia de la lepra y su eficiencia se ha comparado con la del método estándar de muestreo de la población total (MPT). En el MERPP, la población estudiada recibe información clara sobre la enfermedad y aquellos con síntomas de la misma son invitados a ser examinados por el equipo de exploración. Los convivientes y aquellos sospechosos de tener la enfermedad son enlistados y mantenidos bajo vigilancia médica. En el estudio, la población registrada fue de 20,815; entre las 2034 personas que se autoreportaron en el MERPP se encontraron 10 casos nuevos, 0 casos entre los convivientes y sospechosos, y 2 nuevos pacientes adicionales en el MPT. Hubieron 12 pacientes registrados entre la población de muestra. La tasa de prevalencia encontrada por el MERPP fue de 1.06 por 1000 (95% Cl=0.49-1.63) en tanto que por el MPT fue de 1.16 por 1000 (95% Cl= 0.5-1.77). Los días-hombre involucrados y el costo del MERPP son considerablemente menores que aquellos del MPT. Se concluyó que, como se llevó a cabo en la provincia de Khon Kacn, Tailandia, el MERPP es un substituto válido del MPT. El MERPP puede ser aplicado en condiciones de baja endemia y puede ser ejecutado por las autoridades generales de salud.

8- Development of a SOD ELISA to determine the immunological relatedness among mycobacteria

Channappa T. Shivannavar; Vishwa M. Katoch; Vishnu D. Sharma; Madhusudan A. Patil; Kiran Katoch; Ved P. Bharadwaj; Bhakt M. Agrawal


This study reports on the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system for the measurement of immunological distances (ImDs) of the superoxide dismutase (SOD) molecule among the cultivable mycobacteria, namely, Mycobacterium vaccae, M. phlei, M. smegmatis, M. avium, M. scrofulaceum, M. tuberculosis H37Ra, M. tuberculosis H37Rv, and M. bovis BCG, and M. leprae. SODs f rom cultivable mycobacteria were purified, antibodies were raised against these molecules, and ImDs between these anti-SOD antibodies and antigen (SODs) were determined by an immunoprecipitation technique standardized earlier and by the ELISA technique developed in this study. The ELISA system developed in this study showed higher sensitivity and consistent and reproducible ImDs among various mycobacteria, including pathogens such as M. tuberculosis, M. leprae and M. avium. These values were comparable with the values derived by the immunoprecipitation technique. Our ELISA technique appears to be a sensitive and rapidly reproducible method with the additional advantage of the stability of reagents, and holds promise in the taxonomy as well as in the development of diagnostics for leprosy and other mycobacterial infections.
Cette étude concerne la standardisation d'un système enzymatique (ELISA) pour la mesure des distances immunologiques de la molécule de dismutase superoxide (DOS) parmi les mycobactéries cultivables Mycobacterium vaccae, M. phlei, M. smegmatis, M. avium, M. scrofulaceum, M. tuberculosis H37Ra, M. tuberculosis H37Rv, et le BCG à M. bovis) et M. leprae. Les DOS des mycobactéries cultivables ont été purifiées, on a provoqué la production d'anticorps contre ces molécules, et les distances immunologiques entre ces anticorps anti-DOS et l'antigène ont été déterminées par une technique d'immunoprécipitation standardisée précédemment, et par la technique ELISA développée dans cette étude. Le système ELISA développé dans cette étude a montré une sensibilité plus élevée et des distances immunologiques cohérentes et reproductibles parmi les différentes mycobactéries, y compris les pathogènes tels que M. tuberculosis, M. leprae et M. avium. Ces valeurs étaient comparables aux valeurs dérivées par la technique d'immunoprécipitation. Notre technique ELISA apparaît être une méthode sensible et rapidement reproductible, avec l'avantage supplémentaire de la stabilité des réactifs, et elle est pleine de promesses pour la taxonomie aussi bien que pour le développement de méthodes diagnostiques pour la lèpre et d'autres infections mycobactériennes.
Este estudio se refiere a la estandarización de un ensayo inmunoenzimático (ELISA) par a la medición de las distancias inmunológicas (ImDs) de la molécula de superóxido dismutasa (SOD) entre Mycobacterium leprae y las micobacterias cultivables M. vaccae, M. phlei, M. smegmatis, M. avium, M. scrofulaceum, M. tuberculosis H37Rv, y M. bovis, BCG. Las SODs de las micobacterias cultivables fueron purificadas, contra ellas se prepararon anticuerpos, y las lmDs entre estos anticuerpos anti-SOD y los antígenos (SODs) se determinaron por una técnica de inmunoprecipitación estandarizada antes y por la técnica de ELISA desarrollada en este estudio. El sistema de ELISA aquí desarrollado mostró mayor sensibilidad y dio ImDs consistentes y reproducibles entre varias micobacterias, incluyendo a patógenos tales como M. tuberculosis, M. Ieprae y M. avium. Estos resultados fueron comparables con los valores derivados de la técnica de inmunoprecipitación. Nuestra técnica de ELISA parece ser un método sensible, rápido y reproduciblc, que tiene la ventaja adicional de la estabilidad de los reactivos. El método promete ser de utilidad en estudios taxonómicos y en el desarrollo de pruebas de diagnóstico de la lepra y de otras enfermedades micobacterianas.

9- Climatic droplet keratopathy in leprosy

Ebenezer Daniel; S. Arunthathi


An atypical gross form of climatic droplet keratopathy (CDK) occurring in the cornea of 24 eyes of 17 leprosy patients is described. The CDKs were situated in the lower outer quadrant of the cornea and were not associated with trauma, scars or vascularization. All patients, except one, belonged to the lepromatous group. Fifteen of the 24 eyes with this form of CDK had impaired corneal sensation. We suggest that this form of CDK is a distinctive condition found among lepromatous leprosy patients with possible infection and involvement of the corneal nerves.
On décrit une forme atypique et grossière de kératopathie en goutte survenant sur la cornée de 24 yeux provenant de 17 malades de la lèpre. Les keratopathies étaient situées dans le quadrant inféro-externe de la cornée et n'étaient pas associées à un traumatisme, des cicatrices ou une vascularisation. Tous les patients, sauf un, étaient du type lépromateux. Quinze des 24 yeux avec cette forme de kératopathic avaient une sensibilité cornéenne altérée. Nous émettons l'hypothèse que cette forme de kératopathic est une pathologie distincte qui se retrouve parmi les patients lépromateux avec une infection possible et implication des nerfs cornéens.
Se describe una forma de queratopatía climática atípica en la córnea de 24 ojos de 17 pacientes con lepra. Las queartopatías estuvieron localizadas en el cuadrante inferior externo de la córnea y no estuvieron asociados con trauma, cicatrices, o vascularización. Todos los pacientes, excepto uno, fueron del grupo lepromatoso. Quince de los 24 ojos con esta forma de queratopatía tuvieron una disminuida sensibilidad corneal. Sugerimos que esta forma de queratopatía es una condición distintiva encontrada entre los pacientes con lepra lepromatosa con una posible infección y afección de los nervios corneales.

10- IgG subclass recognition pattern in leprosy: recognition of M. leprae antigens by lgG1 and lgG3 antibodies is distinct across the disease spectrum

Arnawaz Kifayet; Rabia Hussain


The recognition of Mycobacterium leprae antigens by IgG subclasses in patients with leprosy was investigated by electrophoresing M. leprae sonicate in SDS-polyacrylamide gel and immunoblotting analysis. Serum pools were used f rom leprosy patients with cither lepromatous (LL/BL) or tuberculoid (BT/TT) disease. A serum pool f rom healthy controls (EC) was used to determine the baseline antibody activity. To adjust for quantitative differences in antibodies across the disease spectrum, the LL/BL serum pool was used at a 1:200 dilution; the BT/TT serum pool, at 1:20 dilution. Monoclonal antibodies specific for each of the IgG subclasses were used as probes, with anti-mouse IgG conjugated to alkaline phosphatase as the revealing probe. IgG1 antibodies bound to several discrete bands in the range of 10-70 kDa in LL/BL patients, while BT/TT patients showed a more diffuse pattern with the strongest IgG1 antibody binding in the region of 25-40 kDa. Recognition with IgG2 was restricted to a region between 25-36 kDa (which also stained strongly for carbohydrates) in both LL/BL and BT/TT patients. Binding with IgG3 antibodies was more restricted than IgG1 antibodies in LL/ BL sera with strong recognition restricted to 25 and 28 kDa. BT/TT sera showed strong binding with IgG3 antibodies in the region of 25-32 as well as 5-7 kDa. IgG4 antibodies showed weak binding to a 28-kDa in lepromatous patients only. The différences in IgG subclass récognition patterns and their implications are discussed.
On a étudié, par électrophorèse de sonicats de Mycobaclerium leprae dans du gel de SDS-polyacrylamide et par immunoblotting, la reconnaissance des antigènes de M. leprae par des sous-classes d'IgG chez, des malades de la lèpre. On a utilisé des pools de serum provenant de malades de la lèpre, soit du type lépromatcux (LL/BL), soit du type tuberculoide (BT/TT). On a utilisé un pool de serum de témoins en bonne santé afin de déterminer l'activité de base des anticorps. Afin d'ajuster pour les différences quantitatives d'anticorps tout le long du spectre de la maladie, le pool de serum LL/BL a été utilisé à une dilution de 1:200 et le pool de serum BT/TT à une dilution de 1:20. Des anticorps monoclonaux spécifiques pour chacune des sous-classes d'IgG ont été utilisées comme sondes, avec des IgG anti-souris conjugués à de la phosphatase alkaline comme sonde de révélation. Des anticorps IgGl se lièrent à dillércntes bandes discrètes dans des régions allant de 10 à 70 kDa chez les patients LL/BL, tandis que les malades BT/TT montraient un type plus diffus avec la plus forte liaison anticorps IgG1 dans la région 25-40 kDa. La reconnaissance avec l'IgG2 a été limitée à une région entre 25 et 36 kDa (qui avait également une forte coloration pour les carbohydrates) chez les malades LL/BL et chez les BT/TT. La liaison avec les anticorps IgG3 était plus limitée que pour les anticorps IgG1 aux scrums LL/BL, avec une forte reconnaissance limitée aux 25 et 28 kDa. Les scrums BT/TT ont montré une forte liaison avec les anticorps IgG3 dans la région 25-32 kDa aussi bien que dans celle de 5-7 kDa. Les anticorps IgG4 ont montré une faible liaison dans la région de 28 kDa seulement chez les malades lépromatcux. Les différences dans les types de reconnaissance de sous-classes d'IgG, ainsi que leurs implications, sont discutées.
Se investigó el reconocimiento de antigenos de Mycobacterium leprae por anticuerpos IgG de pacientes con lepra utilizando las técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida y de inmunoelcctrotransferencia. Se usaron mezclas de sueros de pacientes con lepra lepromatosa (LL/BL) y de pacientes con lepra tuberculoide (BT/TT). También se usó una mezcla de sueros de individuos sanos (CS) para determinar la actividad basai de anticuerpo. Para corregir las diferencias cuantitativas en anticuerpos a lo largo del espectro de la enfermedad, la mezcla de sueros LL/BL se usó a la dilución 1:200 y la mezcla de sueros BT/TT, a la dilución 1:20. Como sondas se utilizaron anticuerpos monoclonales especificos para cada subclase de IgG y el revelado se hizo con anticuerpos anti-IgG de ratón conjugados con fosfatasa alcalina. Mientras que en los pacientes con LL/BL los anticuerpos IgG1 se enlazaron a varias bandas discretas en el rango de los 10-70 kDa, en los pacientes BT/TT el patrón de reactividad fue más difuso y el cnlazamicnto más fuerte de los anticuerpos IgG1 ocurrió en la región de los 25-40 kDa. Tanto en los pacientes LL/BL como en los pacientes BT/TT, el reconocimiento con anticuerpos IgG2 estuvo restringido a la región entre los 25 y los 40 kDa (la cual también se tiñe fuertemente para carbohidratos). En los sueros LL/BL, el cnlazamicnto de los anticuerpos IgG3 fue más restringido que el de los anticuerpos IgG1, con fuerte reactividad con componentes de 25 y 28 kDa. Los sueros BB/TT mostraron fuerte cnlazamicnto con anticuerpos IgG3 en las regiones de 25-32 y de 5-7 kDa. Los anticuerpos IgG4 mostraron enlazamiento débil con un componente de 28 kDa sólo en los pacientes lepromatosos. Se discuten las diferencias en los patrones de reconocimiento de las subclases de IgG y sus implicaciones.

CORRESPONDENCE

12- Dr. Jamet, et al. reply

Pierre Jamet; Baohong Ji


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