Vol. 65 N° 1 - Jan/Feb/Mar - 1997

ORIGINAL ARTICLE

1- Low serum HDL-cholesterol is associated with raised tumor necrosis factor-α during ENL reactions

Riaz A. Memon; Arnawaz Kifayet; Firdaus Shahid; Anisa Lateef; Thomas J. Chiang; Rabia Hussain


The concentrations of serum lipids and tumor necrosis factor (TNF) were measured in leprosy patients across the spectrum of the disease and in erythema nodosum leprosum (ENL) patients at the onset of the reaction and after the reaction had clinically subsided. Lepromatous/borderline lepromatous (LL/BL) patients had significantly higher serum triglyceride and lower HDLcholesterol levels; there was no such change in the tuberculoid/borderline tuberculoid (TT/BT) patients. The household contacts (HC) of the LL/BL patients also had significantly lower serum HDL levels. ENL patients during the acute phase of the reaction had significantly lower total, LDL-, HDL-cholesterol levels compared to the stable LL/BL patients, and these changes were reversible to pre-ENL levels after the reaction had subsided. Serum TNF levels were significantly higher in household contacts and in LL/BL patients but were not statistically different in TT/BT patients. Serum TNF levels were also significantly higher during the acute phase of ENL, and declined after the clinical remission of the reaction to levels comparable with those of LL/BL patients. There was a significant negative correlation between serum TNF and HDL-cholesterol levels during and after ENL reaction. However, there was no such correlation between TNF and total or LDL-cholesterol leveis in ENL patients. Our results suggest that the changes in HDL-cholesterol mctabolism are a spécifie part of the host response to lepromatous leprosy and to the ENL reaction, and may be mediated by inereased TNF production.
Les concentrations de lipides sériques et de facteur nécrosant des tumeurs (FNT) ont été mesurées chez des malades de la lèpre dans tout le spectre de la maldie et chez des patients présentant un érythème noueux lépreux (ENL) au début de la réaction et après que la réaction ait cliniquement disparu. Les patients lépromateux/borderline (LL/BL) avaient des taux de triglycérides sériques significativement plus élevés et des taux de HDL-cholestérol significativement plus bas. Il n'y avait pas de telles modifications chez les patients tiberculoides/borderlines (TT/BT). Les contacts domiciliaires des patients LL/BL avaient également des taux de HDL sérique significativement plus bas. Les patients avec un ENL en phase aiguë avaient des taux totaux, de LDL- et de HDL-cholesterol significativement plus faibles, comparés aux patients LL/BL en état stable; ces modifications étaient réversibles pour revenir aux niveaux d'avant la réaction une fois que celle-ci avait disparu. Les taux sériques de FNT étaient significativement plus élevés chez les contacts domiciliaires des patients LL/BL, mais n'étaient pas statistiquement différents chez les patients TT/BT. Les taux sériques de FNT étaient également significativement plus élevés durant la phase aiguë de l'ENL, et diminuaient, après la rémission clinique de la réaction, à des niveaux comparables à ceux des patients LL/BL. Il y avait une correlation négative significative entre les taux sériques de FNT et de HDL-eholestérol durant et après la réaction d'ENL. Cependant, il n'y avait pas une telle correlation entre les taux de FNT et le cholestérol total ou LDL chez les patients avec un ENL. Nos résultats suggèrent que les modifications dans le métabolisme du HDL-eholestérol sont une composante spécifique de la réponse de l'hôte à la lèpre lépromateuse et à la réaction ENL, et peut être médiée par une production accrue de FNT.
Se midieron las concentraciones de los lípidos y de factor de necrosis tumoral (TNF") en el suero de pacientes con lepra sin reacción y en pacientes con eritema nodoso leproso (ENL), al inicio de la reacción leprosa y después de que ésta hubo remitido. Los pacientes lepromatosos y los lepromatosos subpolares (LL/BL) tuvieron los niveles de triglicéridos más altos y los menores niveles de 1 IDL-colesterol; en los pacientes tuberculoides y tuberculoid.es subpolares (TT/BL) no hubieron tales cambios. Los contactos familiares de los pacientes LL/BL también tuvieron niveles de HDL significativamente disminuidos. Los pacientes con ENL tuvieron niveles significativamente más bajos de colesterol total, de LDL- y IIDL-colesterol, que los pacientes LL/BL estables, y estos cambios regresaron a los niveles encontrados antes de la reacción, después de que ésta hubo remitido. Los niveles de TNE fueron significativamente más altos en los contactos familiares que en los pacientes LL/BL pero no fueron estadísticamente diferentes en los pacientes TT/BT. Los niveles de TNF en suero también estuvieron significativamente elevados durante la fase aguda del ENL y decayeron después de la remisión clínica de la reacción, a niveles comparables a los encontrados en los pacientes LL/BL. Se encontró una correlación negativa significativa entre los niveles de TNF y los de HDL-colesterol durante y después de la reacción ENL. Sin embargo, no se observó tal correlación entre los niveles de TNF y de HDL-colesterol en los pacientes con ENL. Nuestros resultados sugieren que los cambios en el metabolismo del HDL-colesterol son una parte específica de la respuesta del huésped a la lepra lepromatosa y a la reacción ENL, y que estos cambios pueden estar mediados por la incrementada producción de TNF.

2- Regional lymphadenitis following antileprosy vaccine BCG with killed Mycobacterium leprae

R. Lourduraj John De Britto; Vadakkupattu D. Ramanathan; Mohan D. Gupte


Phase-II and extended Phase-II studies were conducted in three different sets of the population in Thiruthani taluk, Chengalpattu District, South India, involving BCG and killed Mycobacterium leprae (KML) combination vaccines to ascertain the acceptability of the vaccines. In the Phase-II study, 997 healthy volunteers were vaccinated on individual randomization with one of the vaccine arms: BCG 0.1 mg + 6 x 108 KML, BCG 0.1 mg + 5 x 107 KML, BCG 0.1 mg + 5 x 106 KML, BCG 0.1 mg or normal saline. Blood samples were taken and the serum was tested for antibody levels against phenolic glycolipid-I (PGL-I) and the 35-kDa protein of M. leprae. In this study, we observed regional suppurative adenitis in 6% (6 out of 100), 3% (3 out of 100), and 3% (3 out of 100) of the vaccinees in the BCG 0.1 mg + 6 x 108 KML, BCG 0.1 mg + 5 x 107 KML, and BCG 0.1 mg + 5 x 107 KML vaccine arms, respectively, in the 13-70-year age group. Earlier BCG scar status, skin-test reactions to lepromin-A, Rees' MLSA, and serum antibody levels against PGL-I and the 35-kDa protein did not help to identify the group at risk of developing suppurative adenitis. Suppurative adenitis appears to have a direct relationship between the age of the subject and the dose of the vaccine. In order to overcome the problem of regional suppurative adenitis and to know the mechanism involved, an extended Phase-II study was conducted in similar groups of the population by reducing the BCG and KML doses, i.e., with BCG 0.05 mg + 6 x 108 KML, BCG 0.05 mg + 5 x 107 KML, and BCG 0.01 mg + 5 x 107 KML. Biopsy specimens were collected f rom lymph nodes of the suppurative adenitis cases and were subjected for culture and histopathological examination. The observations showed that regional suppurative adenitis could be reduced to 1% in the BCG 0.05 + 6 x 108 KML group, 0.5% in the BCG 0.05 + 5 x 107 KML group, and 0.5% in the BCG 0.01<+ 5 x 107 KML group. This phenomenon of suppurative adenitis appears to be related to the total dose of mycobacterial antigens. Suppurative adenitis was seen by weeks 18 and 20 post-vaccination in the latter two lower doses; whereas it was seen by week 8 in the higher dose of the combination vaccines. No case of suppurative adenitis was observed in the BCG 0.1 mg group. Culture and histopathology ruled out the possibilities of progressive BCG infection and superadded infection. Considering the above results, BCG 0.05 mg + 6 x 108 KML was accepted for a large-scale vaccine trial in South India.
On a réalisé des études de phase II et des études ex tensives de phase II avee des vaccins combinés BCG et Mycobacterium leprae tué (MCI) dans trois différents groupes de population au Thiruthani Taluk, dans le Distict de Chengalpattu dans le Sud de l'Inde, afin d'évaluer l'acceptabilité des vaccins. Dans l'étude de phase II, 997 volontaires en bonne santé ont été vaccinés en ayant reçu de manière aléatoire: BCG 0.1 mg + 6 x 108 MLT, BCG 0.1 mg + 5 x 107 MLT, BCG 0.1 mg + 5 x 106 MLT, BCG 0.1 mg ou du serum salin normal. On a pris des échantillons de sang et on a analysé le serum pour déterminer les taux d'anticorps contre le glycolipide phénolique I (PGL-I) et la protéine de 35 -kDa de M. leprae. Dans cette étude, nous avons observé une adénite suppurative régionale chez respectivement 6% (6 sur 100). 3% (3 sur 100) et 3% (3 sur 100) des personnes du groupe d'âge 13-70 ans vaccinées avec le BCG 0.1 mg + 6 x 108 MLT, BCG 0.1 mg + 5x I07 MLT, BCG 0.1 mg + 5 x 106MLT. La présence d'une cicatrice de BCG, les réactions au lest cutané à la lepromine A, au MLSA de Kees et les taux d'anticorps sériques vis-à-vis du PGL-I et de la protéine de 35 kDa n'ont pas aidé à identifier le groupe à risque de développer une adénite suppurative. Le développement d'une adénite suppurative apparaît être en relation directe avec l'âge du sujet cl la dose vaccinale. Afin de surmonter le problème d'adénite suppurative régionale et de connaître le mécanisme impliqué, nous avons conduit une étude extensive de phase II dans des groupes similaires de populations en réduisant les doses de BCG et de MLT, c'est à dire avec du BCG 0.05 mg + 6 x 108 MLT, BCG 0.05 mg + 5 x 107 MLT, BCG 0.01 mg + 5 x 107MLT. On a prélevé, pour culture et examen histopathologique, des biopsies des ganglions lymphatiques des cas présentant une adénite suppurative. Les observations ont montré que la fréquence de l'adénite suppurative régionale pouvait être réduite à 1% dans le groupe BCG 0.05 mg + 6 x 108 MLT, à 0.5% dans le groupe BCG 0.05 mg + 5 x 107 MLT, et à 0.5% dans le groupe BCG 0.01 mg + 5 x I07 MLT. Ce phénomène d'adénite suppurative apparaît associé à la dose totale d'antigène mycobactériens. L'adénite suppurative a été observée aux dix-huitième et vingtième semaines dans les deux derniers groupes aux doses plus faibles, alors qu'il a été observé à la huitième semaine avec la dose plus élevée de combinaison vaccinale. Aucun cas d'adénite suppurative n'a été observé dans le groupe ayant reçu le BCG 0.1 mg. La culture et I'histopathologic ont exclu la possibililé d'infection progressive par le BCG et d'inleclian surajoutée. Considérant les résultats cidessus, le BCG 0.05 mg + 6 x 10* MLT a été accepté pour un essai de vaccination à grande échelle dans le Sud de l'Inde.
Para establecer la aceptabilidad del BCG y de Mycobacterium leprae muerto por calor (MLMC) como vacunas contra la lepra, se realizaron estudios de tase II y de fase II ampliada en tres grupos de la población de Thiruthani taluk, Distrito de Chengalpattu, al sur de la India. En el estudio de fase II, se vacunaron 997 voluntarios sanos con uno de los siguientes esquemas de vacunación: 0.1 mg de BCG + 6 x 108 MLMC, 0.1 mg BCG + 5 x 107 MLMC, 0.1 mg de BCG + 5 x 106 MLMC, 0.1 mg de BCG, o solución salina fisiológica. Se tomaron muestras de sangre y el suero se utilizó para buscar anticuerpos contra el glicolípido fenólico-I (PGL-1) y el antigeno de 35 kDa de M. leprae. En el grupo de 13 a 70 años de edad, observamos adenitis supurativa regional en 6%, 3%, y 3% de los vacunados con BCG + 6 x 108 MLMC, BCG + 5 x I07 MLMC, y BCG + 5 x 106 MLMC, respectivamente. La presencia de cicatriz por BCG, las reacciones en piel a la lepromina A, el MLSA de Rees, y los niveles de anticuerpos anti-PGL-I y anti-35 kD, no ayudaron a identificar el grupo en riesgo de desarrollar adenitis supurativa. La adenitis supurativa parece tener una relación directa entre la edad del sujeto y la dosis de vacuna. Para resolver el problema de la adenitis supurativa regional y para conocer los mecanismos involucrados, se realizó un estudio de fase II ampliada en grupos similares de la población, utilizando dosis reducidas de vacunas BCG y MLMC (0.05 mg de BCG + 6 x 108 MLMC, 0.05 mg de BCG + 5 x 107 MLMC, y 0.01 mg de BCG + 5 x 107 MLMC). Se tomaron biopsias de ganglios linfáticos de los casos con adenitis supurativa y se usaron para cultivo y para examen histopatológico. Las observaciones mostraron que la adenitis supurativa regional pudo reducirse al 1 % en el grupo de 0.05 mg de BCG + 6 x 108 MLMC, al 0.5% en el grupo de 0.05 mg de BCG + 5 x 107 MLMC, y al 0.5% en el grupo de 0.01 mg de BCG + 5 x 107 MLMC. Este fenómeno de adenitis supurativa parece estar relacionado con la dosis total de los antígenos micobacterianos. La adenitis supurativa se observó entre las semanas 18 y 20 post-vacunación con las 2 dosis más bajas, mientras que ocurrió hacia la semana 8 con las dosis más altas de vacuna combinada. En el grupo vacunado con 0.1 mg de BCG no se observé adenitis supurativa. Los cultivos y la histopatología descarlaron las posibilidades de una infección progresiva por BCG o de una infection asociada. Considerando los resultados anteriores, se aceptô la combination tie 0.05 ing de BCG + 6 x 108 MLMC como la vacuna nuis apropiada para ensayos de canipo de amplia cobertura en el sur de la India.

3- Effect of steroid therapy on parameters of peripheral autonomic dysfunction in leprosy patients with acute neuritis

Annelies Wilder-Smith; Einar Wilder-Smith


Recent electrophysiological studies on peripheral autonomic dysfunction in leprosy patients show a high prevalence of autonomic dysfunction as measured by abnormal vasomotor reflexes (VMR) and absent sympathetic skin response (SSR). Nothing is known about the reversibility of these autonomic parameters with treatment. Since there is evidence that small fiber function may be the most reversible component in neuropathies, we measured the effect of steroid treatment on autonomic parameters together with motor and sensory functions in leprosy patients with acute neuritis. Control subjects were investigated for repeatability testing of autonomic function. Due to a relatively high variability on repeat VMR testing in the controls, we defined a change in VMR testing as a change of > 30%. With this definition, the VMR of 14.8% of the patients improved, 75% remained unchanged, and 10.2% worsened. Absent SSR became positive in 16.6% and remained unchanged in 83.4%. Improvement in sensory and motor functions was seen in 21.2% and 1.3% of the patients, respectively.
Des études électro-physiologiques recentes sur les dysfonctionnements autonomiques périphériques che/, les malades de la lèpre ont montré une prévalence élevée de dysfonctionnement autonomique tel que mesuré par des réllexes vasomoteurs (RVM) anormaux et l'absence de réponse sympathique cutanée (RSC). On ne sait rien de la réversibilité de ces paramètres autonomiques avec le traitement. Puisqu 'il y a des évidences que la fonction de la petite libre pourrait être la composante la plus réversible dans les neuropathies, nous avons mesuré l'effet du traitement stéroïdien sur les paramètres autonomiques, ainsi que les fonctions nerveuses et sensorielles chez, des malades de la lèpre présentant une névrite aiguë. On a examiné des sujets-témoins quant à la reproductibilité des tests de fonction autonomique. Du fait d'une variabilité relativement élevée des tests répétés de RVM chez les témoins, nous avons défini un changement dans un test de RVM comme étant un changement supérieur à 30%. Avec cette définition, le RVM s'est amélioré chez 14.8 % des patients, est resté inchangé chez 75%, et a empiré chez 10.2%. Une RSC absente devint positive dans 16.6% et resta inchangée dans 83.4%. Une amélioration dans les fonctions sensitive et motrice a été observée dans respectivement 21.2% et 1.3% des patients.
Algunos estudios electrofisiológicos recientes sobre la disfunción periférica autónoma en los pacientes con lepra mostraron una alta prevalencia de disfunción autónoma (rellejos vasomotores, RVtVl, anormales) y ausencia de respuesta simpática de la piel ( RSP). No se sabe nada sobre la reversibilidad de estos parámetros de función autónoma en relación al tratamiento. Puesto que hay evidencias de que la función de las pequeñas fibras, es el componente más reversible en las neuropatías, en este estudio medimos el efecto del tratamiento con esteroides sobre los parámetros autónomos y las funciones motora y sensorial en los pacientes con lepra y neuritis aguda. Se incluyeron sujetos control para investigar la función autónoma. Debido a que las pruebas sobre los RVM aplicadas a los controles resultaron muy variables, establecimos que hubieron cambios en los RVM cuando estos cambios fueron superiores al 30%. Con esta definición, encontramos que como resultado del tratamiento, los RVM de 14.8% de los pacientes mejoraron, en 75% permanecieron sin cambio, y en 10.2% empeoraron. Las pruebas sobre la RSP llegaron a ser positivias en 16.6% de los pacientes y permanecieron sin cambio en el 83.4%. La mejoría en las funciones sensorial y motora se observó en el 21.2 (sensorial) y en el 1.3% (motora) de los pacientes.

4- A study on the effectiveness and safety of the WHO/MDT regimen in the northeast of thailand; a prospective study, 1984-1996

Krongkarn Dasananjali; Pieter A. M. Schreuder; Charoon Pirayavaraporn


The aim of this prospective study was to determine the effectiveness and safety of the multidrug therapy as recommended by the World Health Organization (WHO/ MDT) in 1982. One-hundred-eighty-eight newly diagnosed leprosy patients 1130 paucibacillary (PB) and 58 multibacillary (MB) patients] f rom three provinces in northeastern Thailand were recruited into a study f rom April 1984 to March 1985. The study lasted until May 1996. The results showed that 182 patients finished their course of WHO/MDT, representing a treatment completion rate of 95%; 167 (122 PB and 45 MB) were released f rom surveillance (RES); 82 PB patients were still available for follow up by the end of 1994 and 31 MB patients by May 1996. Two PB patients were diagnosed with a relapse, showing a relapse rate of 0.2 per 100 person-years at risk. After an average of 8 years of follow up, no MB relapses have been diagnosed. The proportion of patients with a WHO grade 2 disability among PB and MB patients increased f rom 4% and 8% at the start of treatment to 7% and 13% at last examination, respectively. It is concluded that the fixed-duration, 6 month WHO/MDT regimen tor PB leprosy and the 24-month regimen for MB leprosy are effective, acceptable and safe, and that clinical activity, histopathological activity and/or a positive skin smear at release f rom treatment (RFT) have no bearing on the efficacy of the WHO/MDT regimens. The relapse rates are low and in accordance with most published data available to date. The importance of skin-smear services for a reliable classification (WHO PB/MB classification for control programs) is stressed.
Le but de cette étude en perspective était de déterminer l'efficacité et l'absence de danger de la polychimiothérapie telle que recommandée par l'Organisation Mondiale de la Santé (PCT/OMS) en 1982. Cent quatre-vingt-huit nouveaux malades de la lèpre [130 paucibacillaires (PB) et 58 multibacillaires (MB )] provenant de trois provinces dans le nord-est de la Thaïlande ont été recrutés entre avril 1984 et mars 1985 pour une étude. Cette étude dura jusqu'en mai 1996. Les résultats ont montré que 182 malades ont terminé leur traitement de PCT/OMS, ce qui fait un taux de completion de 95%; 167 ( 122 PB et 45 MB) ont été libérés des contrôles (LDC); 82 patients PB pouvaient encore être suivis en fin de 1994, et 31 MB en mai 1996. Deux rechutes ont été diagnostiquées chez des patients PB, montrant un taux de rechute de 0.2 pour 100 PYR. Après une moyenne de 8 années de suivi, aucune rechute MB n'a été diagnostiquée. La proportion de patients avec une incapacité de grade 2 parmi les PB et les MB a augmenté, passant respectivement de 4% et 8% au début du traitement, à 7% et 13% au dernier examen. On en conclut que les régimes de PCT/OMS de durée fixe de 6 mois pour la lèpre PB et de 24 mois pour la lèpre MB sont efficaces, acceptables et sans danger, et que l'activité clinique, l'activité histopathologique et/ou la positivité de frottis cutanés à l'arrêt du traitement n'influencent pas l 'efficacité des régimes de PCT/OMS. Les taux de rechute sont bas et en accord avec la majorité des données disponibles publiées à ce jour. L'importance des services de frottis cutanés pour une classification fiable (classification OMS PB/MB pour les programmes de contrôle) est soulignée.
El objeto del estudio eu perspective fue el determinar la efectividad y seguridad de la poliquimioterapia (PQT) recomendada por la Organización Mundial de la Salud en 1982 (PQT/OMS). Se estudiaron 188 casos nuevos de lepra (130 paucibacilares, PB, y 58 multibacilares, MB) provinientes de 3 provincias del noreste de Tailandia, reclinados entre abril de 1984 a mar/o de 1985. El estudio duró hasta mayo de 1996. Ciento ochenta y dos pacientes (95% del total) terminaron el tratamiento de PQT/OMS; 167 casos (122 PB y 45 MM) fueron dados de alta al término del tratamiento; 82 pacientes Pl! pudieron ser explorados todavía a finales de 1994 y 31 pacientes MB en mayo de 1996. En dos pacientes se diagnosticaron recaídas, lo que representó una tasa de recaída de 0.2 por 100 PYR. En los cases MB no se registraron recaídas después de un tiempo promedio de seguimiento de 8 años. En el último examen se encontró que la proporción de pacientes con disfunción de grado 2 (OMS), aumentó del 4% (en los casos PB) y del 8% (en los casos MB) al inicio del tratamiento, al 7% en los casos PB y al 1.3% en los casos MB. Se concluye que la duración de la PQT lijada por la OMS, de 6 meses para la lepra PB y tic 24 meses para la lepra MB, es efectiva, aceptable y segura. Las tasas de recaída son bajas y en corcondancia con la mayoría de los datos publicados a la fecha. Se subraya la importancia de los extendidos de linfa cutánea para lograr una clasilicaión confiable (WHO PB/MB) por programas dirección.

5- Daily multidrug therapy for leprosy; results of a fourteen-year experience

Georges-Yves de Carsalade; Daniel Wallach; Edith Spindler; Jean Pennec; Francois Cottenot; Beatrice Flageul


Between 1980 and 1994, 67 new or relapsing leprosy patients were treated by daily administered multidrug regimens. Tuberculoid patients (23 TT/BT) received either bithcrapy [rifampin+dapsone or clofazimine (RMP+DDS or CLO)]or tritherapy [RMP+DDS and/or CLO and/or ethionamide (ETH)] until clinical cure. Lepromatous patients (44 BB/BL/LL) received tritherapy (RMP+DDS and/or CLO and/or ETH) at least until bacteriological negativity. Of the 23 tuberculoid patients only one patient (5%) was cured at 6 months and about 70% needed between 6 and 24 months of treatment to obtain clinical cure (mean 19.5 months). In the 44 lepromatous patients, the achievement of bacteriological negativity was significantly linked to the initial bacterial index (BI), and it occurred after 2 to 7 years (mean 66.5 months) of multidrug therapy (MDT). The average BI decrease per year was 1.1+ during the first year, 0.9+ the second year, and then < 0.5+ per year. Reactional states significantly (p < 0.01) influenced the BI course: reversal reactions (RR) accelerated while erythema nodosum leprosum (ENL) delayed the BI decrease. Three of the 23 (13%) tuberculoid and 19 of the 44 (43%) lepromatous patients (p < 0.02) exhibited a RR and 18 of 44 (41%) lepromatous patients had ENL during MDT. A late RR (LRR) was observed in 1 (5%) and 6 (17%) of our tuberculoid and lepromatous patients, respectively, and 3 (8%) of our lepromatous patients suffered post-MDT ENL. No confirmed relapse has been observed within a follow-up period of 6 months to 7 years and 3 months [59 person-years at risk (PYR)[ for TT/BT patients and of 4 months to 5 years and 10 months (100 PYR) for BB/BL/LL patients. When compared to the recommended WHO/MDT, it appears that daily MDT docs not increase the clinical or the bacteriological cure rates either at 6 months in paucibacillary tuberculoid patients or at 2 years in multibacillary lepromatous patients. Moreover, as does the WHO/MDT, our regimens show a high frequency of reactional states both during and after treatment. This fact constitutes the main new problem of the actual treatment of leprosy.
Entre 1980 et 1994, 67 malades de la lèpre, nouveaux cas ou rechutes, ont été traités par des régimes de polychimiothérapie administrés quotidiennement. Les patients tuberculoides (23 TT/BT) ont reçu soit une bi-thérapie (rifampicine + dapsone ou clofazimine [RMP+DDS ou CLO]) soit une tri-thérapie (RMP+DDS et/ou ethionamide [ETH]) jusqu'à guérison clinique. Les malades lépromateux (44 BB/BL/LL) ont reçu une tri-thérapie (RMP+DDS et/ou CLO et/ou ETH) au moins jusqu'à négativation bactériologique. Parmi les 23 patients tuberculoides, seul un fut guéri à six mois, et environ 70% ont nécessité entre 6 et 24 mois de traitement pour obtenir la guérison clinique (moyenne 19.5 mois). Parmi les 44 patients léproma teux, la négativation bactériologique était positivement liée à l'index bactérien (IB) initial, et est survenue après 2 à 7 ans (moyenne 66.5 mois) de polychimio-thérapie (PCT). Le diminution annuelle moyenne de l'IB était de 1.1+ au cours de la première année, de 0.9+ au cours de la deuxième année, et ensuite in férieure à 0.5+ par an. Les états réactionnels ont signilicativement influencé (p < 0.01) l'évolution de l'IB: les réactions réverses (RR) ont accéléré, tandis que l'érythème noueux lépreux (ENL) a ralenti la diminution de l'IB. Trois des 23 (13%) tuberculoides et 19 des 44 (43%) de malades lépromateux (p < 0.02) ont montré une RR et 18 des 44 (41%) des malades lépromateux ont eu un ENL durant la PCT. Une réaction réverse tardive a été observée chez, respectivement 1 (5%) el 6 (7%) de nos patients tuberculoides el lépromateux, et 3 (8%) tie nos patients lépromateux ont souffert d'un ENL après la PCT. Aucune recluite confirmée n'a été observée durant une période de suivi allant de 6 mois à 7 ans et 3 mois (59 personnes-années à risque [PAR]) pour les patients TT/BT et de 4 mois à 5 ans et 10 mois (100 PAR) pour les patients BB/BL/LL. Quand on le compare à la PCT recommandée par 1'OMS, il apparaît que la PCT quotidienne n'augmente pas les taux de guérison clinique ou bactériologique à 6 mois chez les patients tuberculoides paucibacillaires et à 2 ans chez les patients lépromateux multibacillaires. De plus, ainsi que la PCT recommandée par l'OMS, nos régimes montrent une grande fréquence d'états réactionnels durant et après la traitement. Ce fait constitue le problème principal du traitement actuel de la lèpre.
Entre 1980 y 1994 se trataron 67 casos nuevos o recurrentes de lepra con poliquimioterapia diaria. Los pacientes con lepra tuberculoide (23 TT/BT) recibieron biterapia (rifampina + dapsona o clofazimina (RMP+DDS o CLO) o triterapia (RMP+DDS y/o etionamida, ETH) hasta su curación clínica. Los pacientes lepromatosos (44 BB/BL/LL) recibieron triterapia (RMP+DDS y/o CLO y/o ETH) cuando menos hasta su negativización bacteriológica. De los 23 pacientes tuberculoides sólo un paciente (5%) fue curado a los 6 meses pero el 70% de los pacientes necesitaron entre 6 y 24 meses de tratamiento para alcanzar la cura clínica (media 19.5 meses). En los 44 pacientes lepromatosos, la negativización bacteriológica estuvo significativamente ligada con el índice bacteriano inicial (IB) y ocurrió después de 2 a 7 años (media 66.5 meses) de poliquimioterapia (PQT). La disminución anual promedio en el IB fue de 1.1+ durante el primer año, 0.9+ en el segundo año, y después, < 0.5+ por año. Los estados reaccionales influyeron significativamente (p < 0.01) en el curso del IB: las reacciones reversas (RR) aceleraron la disminución en el IB, el eritema nodoso leproso la retardó. Durante la PQT, 3 de los 23 (13%) pacientes tuberculoides y 19 de los 44 (437o) pacientes lepromatosos (p < 0.02) exhibieron alguna RR, mientras que 18 de los 44 (41%) pacientes lepromatosos tuvieron ENL. Se observó una reacción RR tardía (RRT) en I (5%) y 6 (17%) de los pacientes tuberculoides y lepromatosos, respectivamente, y 3 (8%) de los pacientes lepromatosos presentaron ENL post-PQT. No se observaron recaídas durante un periodo de seguimiento de 6 meses a 7 años y 3 meses (59 personas-años en riesgo, PAR) entre los pacientes TT/BT y de 4 meses a 5 años y 10 meses (100 PAR) entre los pacientes BB/BL/LL. Cuando se compararon con la PQT recomendada por la OMS, las dosis diarias de PQT usadas en este estudio no parecieron incrementar las tasas de curación clínica o bacteriológica a los 6 meses, ni en los pacientes tuberculoides paucibacilares ni en los pacientes lepromatosos multibacilares. Además, como ocurre con la PQT/OMS, nuestro esquema de tratamiento muestra una alta frecuencia de estados reaccionales tanto durante como después del tratamiento. Este hecho constituye el principal problema del tratamiento actual de la lepra.

6- Differential development of CD4 and CD8 cytotoxic T cells (CTL) in PBMC across the leprosy spectrum; IL-6 with IFN-γ or IL-2 generate CTL in multibacillary patients

Silvia de la Barrera; Marta Finiasz; Susana Fink; Raul Valdez; Oscar Bottasso; Luis Maria Balina; Maria del Carmen Sasiain


In the present study we evaluated the contribution of CD4 and CD8 T cells to the antigen-specific cytotoxic activity induced by whole Mycobacterium leprae in leprosy patients and normal controls (N) as well as the modulation of this activity by some cytokines. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) f rom N or f rom leprosy patients were stimulated with antigen in the presence or absence of cytokines for 7 days. M. leprae- stimulated PBMC were depleted of CD4 or CD8 antigen-bearing cells and employed as effector cells in a 4-hr [31 Cr ] release assay against autologous M. leprae -pulsed macrophages. Our results demonstrate that both CD4 and CD8 T cells contribute to M. leprae -induced cytotoxic activity, with differences observed inpaucibacillary (PB) and multibacillary(MB) patients. CD8-mediated cytotoxic activity is higher than that of CD4 cells in PB patients, while in MB patients CD4 cytotoxicity is predominant.
Our data also demonstrate that the generation of CD4 and CD8 cytotoxic T lymphocytes (CTL) can be modulated differentially by interleukin-4 (IL-4), IL-6, gamma interferon (IFN-γ), or IL-2. Although MB patients developed the lowest CTL response, cytokines such as IL-6 plus IL-2 or 1FN-γ were able to generate both CD4 and CD8 cytotoxic T cells f rom MB patients. In PB patients, IL-6 plus IFN-γ displayed the highest stimulation on CD8 effector cells. Thus, an important role may be assigned to IL-6, together with IL-2 or IFN-γ, in the differentiation of M. leprae -specific CTL effector cells.
Nous avons évalué dans l'étude présente la contribution des cellules T CD4 et CD8 dans l'activité cytotoxique antigéniquement spécifique induite per le Mycobacterium leprae entier chez des malades de la lèpre et des témoins normaux ainsi que la modulation de cette activité par certaines cytokines. Des cellules mononucléaires du sang périphérique (CMSP) de témoins et de malades de la lèpre ont été stimulées avec l'antigène en présence ou absence des cytokines pendant 7 jours. Les CMSP stimulées par M. leprae ont été débarassées de leurs cellules CD4 oti CD8 porteuses d'antigènes et employées comme cellules effectrices dans un test de libération 4-hr [31Cr] vis-à-vis des macrophages autologues stimulés par M. leprae. Nos résultats démontrent que les cellules T CD4 et CDS contribuent toutes deux à l'activité cytotoxique induite par, M. leprae, avec des différences observées chez les patients paucibacilllaires (PB) et multibacillaires (MB). L'activité cytotoxique des CD8 est plus élevée que celle des cellules CD4 chez les patients PB, alors que chez les patients MB, la cytotoxicité CD4 est prédominante. Nos données démontrent également que la production de lymphocytes T cytotoxiques (LTC) CD4 et CD8 peut être modulée de manière différenciée per l'interleukine-4 (IL-4), l'interleukine-6, ['interferon gamma (IFN-γ), ou I'IL-2. Bien que les patients MB aient montré la plus faible réponse LTC, des cytokines telles que IL-6 plus IL-2 ou l'interféron-yétaient capables d'induire la production de cellules T cytotoxiques CD4 et CD8 chez les patients MB. Chez les patients PB, l'IL-6 plus IFN-γ amontré la stimulation la plus élevée sur les cellules effectrices CD8. En conséquence, un rôle impoltant peut être attrribué à l'IL-6, ainsi qu'à l'IL-2 et à l'IFN-γ dans la différenciation des cellules effectrices LTC spécifiques vis-à-vis de M. leprae.
En el presente estudio evaluamos la contribución de las células T CD4 y CD8 en la actividad citotóxica antígeno-específica inducida por Mycobacterium leprae integral, en pacientes con lepra y en controles sanos (N), así como la modulación de esta actividad por algunas citocinas. Para esto, las células mononucleares de sangre periférica (MN) de personas N o de pacientes con lepra, se incubaron durante 7 días con el antígeno, en presencia o en ausencia de citocinas. Las células MN estimuladas con M. leprae se depletaron de las células CD4 o CD8 y se emplearon como células electoras en ensayos de liberación de "Cr de 4 h, contra macrófagOS parasitados con M. leprae. Nuestros resultados demostraron que tanto las células CD4 como las CD8 contribuyeron a la actividad citotóxica inducida por M. leprae, aunque hubieron diferencias entre los pacientes paucibacilares (PB) y los multibacilares (MB). La actividad citotóxica mediada por CD8 es mayor que la mediada por las células CD4 en los pacientes PB. mientras que en los pacientes MB la actividad citotóxica de las células CD4 es la predominante.
Nuestros resultados también demuestran que la generación de linfocitos T citotóxicos CD4 y CD8 (CTL) puede ser modulada diferencialmente por las interleucinas IL-4, IL-6, interferon gamma (IFNγ), o IL-2. Aunque los pacientes MB desarrollaron las respuestas citotóxicas más bajas, la IL-6 más la IL-2 o el IFNγ, fueron capaces de generar células T citotóxicas tanto CD4 como CD8 en los pacientes MB. En los pacientes PB. la IL-6 más el IFNyexhibieron la máxima capacidad estimulante sobre las eélulas efectoras CDS. Asi\ la IL-6, junto eon la IL-2 o el IFNγ, parecen jugar un papel importante en la dilerenciaciôn de las eélulas T citotôxicas especi'ficas para M. leprae.

7- Immunotherapy of lepromin-negative borderline leprosy patients with low-dose convit vaccine as an adjunct to multidrug therapy; a six-year follow-up study in Calcutta

Sachin Chaudhury; Sunil Kumar Hajra; Ashutosh Mukerjee; Bibbuti Saha; Vibek Majumdar; Debasis Chattapadhya; Kunal Saha


The present report, which describes management of lepromin-negative borderline leprosy patients with low-dose Convit vaccine, is an extension of our earlier study on the treatment of lepromatous leprosy patients with low-dose Convit vaccine as an adjunct to multidrug therapy (MDT). The test Group I, consisting of 50 lepromin-negative, borderline leprosy patients, were given low-dose Convit vaccine plus MDT. The control group II consisted of 25 lepromin-negative, borderline leprosy patients given BCG vaccination plus MDT and 25 lepromin-negative, borderline leprosy patients given killed Mycobacterium leprae (human) vaccine plus MDT. The control group III consisted of 50 lepromin-positive, borderline leprosy patients not given any immunostimulation but given only MDT. Depending upon the lepromin unresponsiveness, the patients were given one to four inoculations of the various antileprosy vaccines and were followed up every 3 months for 2 years for clinical, bacteriological and immunological outcome. All patients belonging to the test and control groups showed clinical cure and bacteriological negativity within 2 years. However, immunologic potentiation, assessed by lepromin testing and the leukocyte migration inhibition test (LMIT), was better in the test patients receiving low-dose Convit vaccine plus MDT than in the control patients receiving BCG vaccine plus MDT or killed M. leprae vaccine plus MDT or MDT alone. But the capacity of clearance bacteria (CCB) test f rom the lepromin granuloma showed poor bacterial clearance in the test patients. However, there was no relapse during 6 years of follow up. Two mid-borderline (BB) patients had severe reversal reactions with lagophthalmos and wrist drop during immunotherapy despite being given low-dose Convit vaccine.
Le présent rapport, qui décrit la prise en charge de patients borderline négatifs à la lépromine avec une faible dose du vaccin de Convit, est une extension de notre étude précédente sur le traitement de patients lépromateux avec une faible dose du vaccin de Convit en appui à la polychimiothérapie (PCT). Le groupe test I, consistant en 50 patients borderline négatifs à la lépromine. a reçu une faible dose du vaccin de Convit plus la PCT. Le groupe témoin II consistait en 25 patients borderline négatifs à la lépromine ayant reçu le vaccin BCG et 25 patients borderline négatifs à la lépromine avant reçu le vaccin de Mycobacterium leprae tué (d'origine humaine) plus la PCT. Le groupe témoin III consistait en 50 patients borderline positifs à la lépromine qui n'ont reçu aucun immunostimulant, mais bien la PCT. En fonction de leur non-réponse à la lépromine, les patients ont reçu de une à quatre injections des différents vaccins antilèpre et ont été suivis du point de vue clinique, bactériologique et imnumologique tous les trois mois pendant deux ans. Tous les patients appartenant aux groupes test et témoins ont montré une guérison clinique et bactériologique endéans les deux ans. Cependant, la potentialisation immunologique, évaluée par le test à la lépromine et le test d'inhibition migratoire des leucocytes (TIML), était meilleure chez les patients ayant reçu une faible dose du vaccin de Convit plus la PCT que chez les témoins ayant reçu le BCG plus la PCT ou le vaccin de M. leprae tué plus la l'CT ou la l'CT seule. Mais le test de capacité d'élimination bactérienne à partir du gandióme de lépromine a montré une faible élimination chez, les patients du groupe test. Cependant, il n'y a pas eu de rechute au cours des six ans de follow-up. Deux patients borderline (BB) ont eu des réactions d'inversion sévères avec lagophlalmos et poignet tombant durant l'immunothérapie, en dépit du lait qu'ils avaient reçu une faible dose du vaccin de Convit.
El presente reporte describe el manejo de pacientes con lepra intermedia lepromino-negativos, con una dosis baja de la vacuna de Convity es una extensión de nuestro primer estudio sobre el tratamiento de pacientes con lepra lepromatosa con vacuna de Convity poliquimioterapia (PQT). til grupo de prueba I (50 pacientes con lepra intermedia lepromino-negativos) recibió una dosis baja de vacuna de Convit más PQT. El grupo control II consistió de 25 pacientes con lepra intermedia lepromino-negativos. que recibieron la vacuna BCG más la PQT, y de 25 pacientes con lepra intermedia y lepromino-negativos que recibieron la vacuna de Mycobacterium leprae (humano) muerto por calor además de la PQT. El grupo control III consistió de 50 pacientes con lepra intermedia lepromino-positivos que no recibieron vacuna alguna pero sí la PQT. Dependiendo de la reactividad a la lepromina, los pacientes recibieron de tina a 4 inoculaciones de las diferentes vacunas antileprosas y fueron seguidos cada 3 meses durante 2 años para establecer los cambios clínicos, bacteriológicos e inmunológicos. Todos los pacientes de los grupos de prueba y control mostraron curación clínica y negatividad bacteriológica dentro del periodo de 2 años. Sin embargo, la potenciación innuinológica. establecida por la prueba de la lepromina y la prueba de inhibición de la migración de linfocitos. fue mejor en los pacientes que recibieron la vacuna de Convit de dosis baja más PQT que en los pacientes control que recibieron la vacuna de BCG más PQT, o la vacuna de M. leprae muerto más PQT, o sólo la PQT. La capacidad de depuración de bacterias de los granulomas producidos por la lepromina fue pobre en todos los grupos estudiados pero no se observaron recaídas en los 6 años de seguimiento. Dos pacientes con lepra intermedia (BB) tuvieron reacciones reversas severas con lagoftalmos y caída de muñeca durante el tratamiento, no obstante que recibieron la vacuna de Convit de dosis baja.

8- Dharmendra antigen but not integral M. leprae is an efficient inducer of immunostimulant cytokine production by human monocytes, and M. leprae lipids inhibit the cytokine production

Chikako Nakamura; Yasuo Fukutomi; Yoshiko Kashiwabara; Yasukazu Oomoto; Miyae Kojima; Hidetoshi Hayashi; Kikuo Onozaki


Killed integral Mycobacterium leprae, Mitsuda antigen, and chloroform-treated M. leprae, Dharmendra antigen (Dh-Ag), have been used for the classification of leprosy patients based on cell-mediated immunity. Heat-killed M. leprae also are used as a component of the Convit vaccine. Human blood monocytes were stimulated with M. leprae or Dh-Ag and their cytokine-inducing ability was compared. Monocytes were cultured in the presence of fresh human serum because the efficacy of cytokine induction and the phagocytosis of M. leprae have been shown to be optimal in the presence of fresh serum. M. leprae and Dh-Ag were equally phagocytosed by monocytes. Dh-Ag was more potent than M. leprae in the induction of immunostimulatory/proinflammatory cytokines, interleukin-1 (IL-1), IL-6 and tumor necrosis factor (TNF). In contrast, a comparable level of IL-1ra, an immunosuppressive cytokine, was induced by M. leprae and Dh-Ag. The lipids extracted f rom M. leprae induced none of these cytokines by monocytes. Nevertheless, when monocytes were pretreated with the lipids followed by stimulation with Dh-Ag, productions of IL-1, IL-6 and TNF were all inhibited in a dose-dependent manner. However, the lipids did not inhibit the cytokine production induced by other stimuli, including BCG and lipopolysaccharide. Moreover the lipids did not affect the production of IL-1ra. These results suggest that the lipids f rom M. leprae are responsible for the poor cytokine-inducing ability of M. leprae, thus favoring their infection. These results also suggest that Dh-Ag rather than integral M. leprae may be useful as a vaccine candidate because Dh-Ag is able to induce a large amount of cytokines f rom monocytes.
Du Mycobacterium leprae entier tué, l'antigène de Mitsuda, et du M. leprae traité au chloroforme, l'antigène de Dharmendra, ont été utilisés pour la classification des malades de la lèpre sur base de leur immunité à médiation cellulaire. Du M. leprae tué par la chaleur est aussi utilisé en tant que composant du vaccin de Convit. Des monocytes sanguins humains ont été stimulés par M. leprae et leur capacité à induire des cytokines a été comparée. Des monocytes ont été cultivés en présence de serum humain frais parce qu'on a montré que l'efficacité de l'induction des cytokines et la phagocytose de M. leprae étaient optimales en présence de serum frais. M. leprae et l'antigène de Dharmendra étaient phagocytés de manière équivalente par les monocytes. L'antigène de Dharmendra était plus puissant que M. leprae pour induire les cytokines d'immunostimulation et d'inflammation, l'interleukin-1 (1L-1), 1L-6 et le facteur nécrotique tumoral (FNT). Par contre, un taux comparable de 1L-Ira, une cytokine immunosuppressive, a été induite par M. leprae et l'antigène de Dharmendra. Les lipides extraits de M. leprae n'ont induit la production d'aucune de ces cytokines par les monocytes. Néanmoins, quand des monocytes furent pré-traités avec les lipides, puis stimulés avec l'antigène de Dharmendra, les productions d'IL-l, d'lL-6 et FNT furent toutes inhibées avec une intensité qui était fonction de la dose. Cependant, les lipides n'ont pas inhibé la production de cytokine induite par d'autres stimuli, y compris le BCG et le lipopolysaccharide. De plus, les lipides n'ont pas affecté la production d'IL-Ira. Ces résultas suggèrent que les lipides en provenance de M. leprae sont responsables de la faible capacité de M. leprae à induire des cytokines, favorisant ainsi leur infection. Ces résultats suggèrent également que c'est l'antigène de Dharmendra, plutôt que du M. leprae entier, qui pourrait être utile en tant que candidat vaccin, parce que l'antigène de Dharmendra peut induire la production de grandes quantités de cytokines par les monocytes.
Para la clasificación de los pacientes con lepra se han utilizado Mycobacterium leprae integral, antígeno de Mitsuda, y el antígeno de Dharmendra, Ag-Dh (M. leprae tratado con cloroformo). El M. leprae muerto por calor también se ha usado como un componente de la vacuna de Convit. En este estudio, se estimularon monocitos de sangre humana con M. leprae o con Ag-Dh y se comparó la capacidad de estos materiales para inducir la síntesis de citocinas. Los monocitos se cultivaron en presencia de suero humano fresco porque la eficiencia de la inducción de citocinas y la fagocitosis de M. leprae es óptima en presencia de este componente. M. leprae y el Ag-Dh fueron igualmente fagocitados por los monocitos. El Ag-Dh fue más potente que M. leprae en la inducción de las citocinas inmunoestimulatorias/pro-intlamatorias: interleucina-1 (IL1), IL-6 y factor de necrosis tumoral (TNF). En contraste, tanto M. leprae como el Ag-Dh, indujeron la producción de cantidades comparables de IL-Ira, una citocina inmunosupresora. Los lípidos extraídos de M. leprae no indujeron la síntesis de ninguna de estas citocinas por los monocitos. Sin embargo, cuando los monocitos fueron pretratados con los lípidos y luego se estimularon con el Ag-Dh, se encontró una inhibición en su producción de las citocinas 1L-1, 1L-6 y TNF, que fue dependiente de dosis. Los lípidos no inhibieron la producción de citocinas inducida por otros estímulos, incluyendo BCG y lipopolisacárido. Además, los lípidos no afectaron la producción de 1L-Ira. Estos resultados sugieren que los lípidos de M. leprae podrían ser los responsables de la pobre capacidad inductora de citocinas de M. leprae, hecho que favorecería la capacidad infectante del microorganismo. Ya que el Ag-Dh es capaz de inducir la síntesis de una gran cantidad de citocinas por los monocitos, este antígeno podría ser más util que el M. leprae integral como un candidato a vacuna..

9- Effect of phorbol myristate acetate (PMA) and lonophore A23187 on lnterleukin-2 levels and proliferation of activated T lymphocytes f rom patients with lepromatous leprosy

Fernando Alfaro-Bustamante; Gabriela Ramirez-Flores; Amado González-Mendoza; Alfonso Islas-Rodriguez; Mary Fafutis-Morris


The immunodeficiency present in patients with lepromatous leprosy is characterized by the limited proliferation of T lymphocytes, and is explained in part by the impaired synthesis of interleukin-2 (IL-2). Diacylglycerol (DAG) and calcium produce the activation of PKC, ERK and JNK kinases, implying a normal IL-2 response. Phorbol esters, such as PMA, can substitute for DAG and are mitogenic to human T and B cells activating several cytokine-encoding genes. lonophore A23187 increases calcium permeability across the cellular membrane to the cytosol of lymphoid cells and is considered a co-mitogen of T lymphocytes.
Here we report that: 1) PHA-activated T lymphocytes f rom LL patients can be separated into two groups: a) responders (R) with a stimulation index (SI) of > 10 and b) nonresponders (NR) with a SI of < 10. 2) The proliferative responses of cells f rom LL(R), LL(NR) and normal subjects were measured after being stimulated with: I, PHA, PMA, PMA+I PHA+PMA and PHA+PMA+ionophore (PPI). The most important result occurs in LL(NR) patients whose cells did not respond to PHA stimulation but increased to normal levels of proliferation when they were stimulated with PMA. Furthermore, the three groups (NR, R and normals) strongly increased their responses when they were incubated with PPI. 3) Finally, IL-2 concentrations in the supernatants of cultures of T lymphocytes f rom LL(NR), LL(R) and controls were relatively low when they were incubated with PHA or PMA, but the addition of ionophore to PMA and the combination of PHA+ PMA strongly increased the production of IL-2 in all of them, reaching the optimum IL-2 concentration when PPI is used.
It can be concluded that the use of PMA, analogous to DAG, and ionophore A23187 (calcium increaser) in cultures of mitogenactivated T lymphocytes f rom LL patients induced the expression of the IL-2 gene, thus correcting the inadéquate prolifération of T cells f rom LL patients.
L'immunodélicience présente chez, les patients ayant une lèpre lépromateuse est caractérisée par la prolifération limitée des lymphocytes T. et s'explique en partie par l'altération de la synthèse d'interleukine2 (IL-2). Le diacylglycerol (DAG) et le calcium produisent l'activation des kinases PKC, ERK et JNK. cequi suppose une réponse d'IL-2 normale. Des esters de phorbol, tels que le PMA, peuvent être substitués au DAG et sont mitogènes pour les cellules humaines T et B, activant divers gènes encodant des cytokines. L'inophore A23187 accroît la perméabilité du calcium à travers la membrane cellulaire au cytosol des cellules lymphoides, et est considéré comme un co-mitogène des lymphocytes T.
Nous rapportons ici que: 1) Les lymphocytes T activés par le PHA et provenant de patients LL peuvent être séparés en deux groupes: a) les répondants (R), avec un index de stimulation (IS) > 10 et b) les nonrépondants (NR) avec un IS < 10. 2). Les réponses prolifératives de cellules de patients LL(R), LL(NR) et de sujets normaux ont été mesurées après stimulation avec I, PHA, PMA, PMA-1, PHA-PMA et PHA+ PMA+ionophore. Le résultat le plus important survient chez les patients LL(NR) dont les cellules ne répondaient pas à la stimulation avec PHA mais augmentaient à des niveaux normaux de prolifération quand elles étaient stimulées par le PMA. De plus, les trois groupes R, RR et normaux ont fortement augmenté leurs réponses quand ils ont été incubés avec PHA+PMA+ionophore (PPI). 3) Finalement, les concentrations d'IL-2 dans le supernatant des cultures de lymphocytes T en provenance de LL(NR), LL(R) et témoins étaient relativement basses quand elles étaient incubées avec PHA ou PMA, mais l'addition d'ionophore au PMA et les combinaisons de PHA+PMA ont fortement augmenté la production d'IL-2 dans tous les cas, atteignant la concentration optimale d'IL-2 quand on utilisait le PPI.
On peut conclure que l'utilisation du PMA, analogue du DAG et l'ionophore A23187 (accroisseur du calcium) dans les cultures de lymphocytes T activés par de mitogènes provenant de patients LL, comprenait l'expression du gène de 1'IL-2, corrigeant donc la prolifération inadéquate de cellules T provenant de patients LL.
La inmunodeficiencia presente en los pacientes con lepra lepromatosa se caracteriza por la limitada proliferación de los linfocitos T, y se explica en parte por la síntesis disminuida de interleucina-2 (IL-2). El diacilglicerol (DAG) y el calcio producen la activación de las cinasas PKC, ERK y JNK, implicando una respuesta normal de IL-2. Los esteres forbólicos, como el PMA, pueden substituir al DAG y son mitogénicos para las células T y B humanas, donde actúan activando varios genes codificantes de citocinas. El ionóforo A23 187 (I) aumenta la penetración del calcio al citosol de las células linfodes y se considera como comitógeno de los linfocitos T. En este trabajo nosotros reportamos: ( 1 ) Que los linfocitos T (de pacientes LL) activados con PHA pueden separarse en dos grupos: (a) respondedores (R), con índices de estimulación (IE) de > 10 y (b) norespondedores (NR), con IE de < 10. (2) Que se midieron las respuestas proliferativas de las células (de LLR, LLNR y sujetos normales) estimuladas con I, PHA, PMA, PMA+I, PHA+PMA y PHA+PMA+ionóforo. Aquí, los resultados más importantes ocurrieron en los pacientes LLNR cuyas células no respondieron a la estimulación con PHA pero incrementaron su respuesta proliferativa a valores normales cuando se estimularon con PMA. Además, los 3 grupos. NR, R y normales, aumentaron marcadamente sus respuestas proliferativas cuando se incubaron con PHA+PMA+ionóforo (PPI). (3) Que Las concentraciones de IL-2 en los sobrenadantes de los cultivos de los linfocitos T de LLNR. LLR y controles, fueron relativamente bajas cuando las células se incubaron con PHA o con PMA, pero la adición del ionóforo al PMA y las combinaciones de PHA+PMA aumentaron fuertemente la producción IL-2 en todos ellos. La producción óptima de IL-2 se logró con la combinación PPI.
Puede concluirse que el uso de PMA (análogo del DAG) y del ionóforo A23 187 (incrementador de calcio) en los cultivos de linfocitos T (LL) activados con mitógeno, estimula la expresión del gene para IL-2, y corrige la proliferación inadecuada de las células T de los pacientes con lepra.

10- Cytokine gene expression in the foot pad and spleen of BALB/cAJcl mice infected with M. leprae

Yasuko Yogi; Hiroko Nomaguchi; Yoshiki Sakamoto; Masanori Matsuoka; Takao Fujimura; Haruki Okamura; Kyoji Hioki; Muneo Saito; Tatsuji Nomura


The cytokine mRNAs expressed in the foot pads and spleens of BALB/cAJcl mice infected with Mycobacterium leprae were studied by the reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) method using cytokine-specific primers for interleukin-1 alpha (IL-1 α), -2, -4, -6, -10, -12(p40), gamma interferon (IFN-γ), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), and TNF- β and then for CD4 and CD8 markers. The pattern of cytokine gene expression in the foot pad which supports M. leprae growth was different f rom the expression in the spleen which does not permit M. leprae multiplication in mice. Before BALB/cAJcl mice were infected with M. leprae, IL-1α and TNF- β ; mRNAs were expressed physiologically in the foot pad while all of the cytokine genes examined were expressed in the spleen. In the foot pads of mice inoculated with M. leprae, in addition to the physiological appearance of IL-1 α and TNF- β mRNAs, these signals were intensified. TNF-α expression was induced by the infection. On the other hand, in the spleens of mice inoculated with M. leprae, CD4 mRNA expression disappeared on day 1 of the infection, which was accompanied by the reduced expression of IL-2, -4, -6, and -12 mRNAs. The recovery of CD4 mRNA expression at a latter stage was accompanied by a corresponding increase of the cytokine mRNA expression. It was suspected that these results might permit restricted growth of M. leprae in the foot pads of normal mice. Furthermore, our study suggests that tissue-specific, local, immunologic characteristics are important in M. leprae growth.
Les ARNm de cytokine exprimés dans les coussinets plantaires et les rates de souris BALB/cAJcl infectées par Mycobacterium leprae ont été étudiés par la méthode de réaction réverse de transcriptase-polymerase en chaîne (RT-PCR), en utilisant des marqueurs spécifiques de cytokines pour l'interleukine-1 alpha (IL-1α), -2, -4, -6, -10, -12(p40), gamma interféron (IFN-γ), le facteur de nécrose tumorale alpha (FNT -α), et le FNT- β , et pour les marqueurs CD4 et CDS. Le mode d'expression du gène de cytokine dans le coussinet plantaire qui supporte la croissance de M. leprae était différent de l'expression dans la raie qui ne permet pas la multiplication de M. leprae chez la souris. Avant que les souris BALB/cAJcl ne soient infectées par M. leprae. les ARNm d'IL -1α et FNT- β ont été exprimés physiologiquement dans le coussinet plantaire alors que tous les gènes de cytokines examinés ont été exprimés dans la rate. Dans les coussinets plantaires des souris inoculéses avec M. leprae. en plus de l'apparition physiologique des ARNm d'IL-1α et FNT- β , ces signaux ont élé intensifiés. L'expression île FNT -α était induite par l'infection. D'autre part, dans les rates de souris infectées par M. leprae. l'expression de l'ARNm de CD4 disparut au premier jour de l'infection, qui était accompagnée d'une réduction de l'expression des ARNm d'IL-2, -4, -6 et -12. Le rétablissement de l'expression de l'ARNm de CD4 à un stade plus tardif était accompagné d'une augmentation correspondante de l'expression de l'ARNm de cytokine. On a soupçonné que ces résultats pourraient permettre une croissance limitée de M. leprae dans les coussinets plantaires de souris normales. De plus, notre étude suggère que les caractéristiques locales, spécifiques par tissu, sont importâmes pour la croissance de M. leprae.
Utilizando la reacción en cadena de la polimerasatranscriptasa reversa (RT-PCR) se estudiaron los mRNAs para citocinas expresados en las almohadillas plantares de ratones BALB/cAJcl infectados con Mycobacterium leprae. Se utilizaron sondas (iniciadores) para interleucina-l alfa (IL-α), IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 (p40), interferon gamma (IFN-γ), factor de necrosis tumoral alfa (TNFα), TNF β , para los marcadores CD4 y CD8. El patrón de expresión de los genes para citocinas en la almohadilla plantar (que permite el crecimiento de M. leprae) fue diferente del patrón de expresión de citocinas en el bazo (el cual no permite la multiplicación de M. leprae en el ratón). Mientras que sólo los mRNAs para IL-1α y TNF β se expresaron fisiológicamente en las almohadillas plantares de los ratones BALB/cAJCl antes de su infección con M, leprae, todos los genes para citocinas examinados fueron expresatlos en los bazos. En las almohadillas plantares de los ratones inoculados con M. leprae, además de la aparición fisiológica de los mRNAs para IL-1α y TNF β , estas señales fueron intensificadas. La expresión de TNFcr fue inducida por la infección. Por otro lado, en los bazos de los animales inoculados con M. leprae, la expresión del mRNA para Cl)4 desapareció hacia el día I tic la infección y ésto se acompañó de la expresión reducida de los mRNAs para 11.-2, II.-4, II.-6, e IL-12. La recuperación de la expresión del mRNA para CD4 en los estadios más avanzados tic la infección, se acompañó del correspondiente incremento en la expresión de los mRNAs para las otras citocinas. Estos resultados podrían estar relacionados con el crecimiento restringido de M. leprae en las almohadillas plantares de los ratones normales. Además, nuestro estudio sugiere que las características locales y específicas de tejido influyen importantemente en el crecimiento de M. leprae.

11- Pathologic changes in a tibial nerve with surviving M. leprae in a healed tuberculoid leprosy patient

Charles K. Job; Balasubramani Baskaran; Joseph Jayakumar; Maria Aschhoff


A tibial nerve f rom a disease-arrested, borderline tuberculoid (BT) leprosy patient was dissected out and examined almost in its entirety using hematoxylin and eosin staining, a modified Fite's stain for acid-fast bacilli (AFB). solochrome cyanin stain for myelin, and van Gieson's stain for fibrous tissue. Fibrosis of the perineurium and epineurium and fibrous replacement of the nerve parenchyma, which was maxium at the ankle joint area, were seen. In focal areas inflammation was present, especially in the epineurium around blood and lymph vessels. Even 21 years after adequate antileprosy therapy, AFB were present in the endoneurium in all except 2 of the 10 segments of the nerve, evoking hardly an inflammatory reaction or other ill effects. It is pointed out that BT leprosy should also be considered a generalized disease, especially when there is peripheral nerve trunk involvement and, in such cases, a longer duration of currently available antileprosy therapy is advisable. Trauma to nerve trunks plays a major role in producing nerve destruction and paralysis.
Un nerf tibial d'un malade tic la lèpre de type borderline-tuberculoide donl la maladie était arrêtée a été disséqué et examiné presque dans sou entièreté en utilisant une coloration à l'hémaloxylinc et à l'éosine, une coloration de Fite modifiée pour les bacilles acidorésistants (BAR), une coloration à la cyanine de soloebrome pour la myéline, et une coloration de van Gieson pour le tissu fibreux. On a observé une fibrose du perinèvre et de l'epinèvre et le remplacement libreux du parenchyme nerveux, qui était maximale dans la région de l'articulation de la cheville. Une inflammation était présente en foyers, particulièrement dans l'epinèvre autour des vaisseaux sanguins et lymphatiques. Même 21 ans après un traitement anti-lèpre adéquat, des BAR étaient présents dans l'endonèvre de tous les 10 segments de nerf, sauf 2, évoquant presque une réaction inflammatoire ou d'autres effets néfastes. Il est souligné que la lèpre BT devrait aussi être considérée comme une maladie généralisée, particulièrement lorsqu'un tronc nerveux périphérique est impliqué et. dans de tels cas, une durée plus longue du traitement anti-lèpre disponible actuellement est recommandable. Les traumatismes des troncs nerveux jouent un rôle majeur dans la destruction nerveuse et la paralysie.
Se disectó un nervio tibial de un caso curado de lepra tuberculoide subpolar (BT) y se examinó usando las tinciones de hematoxilina-eosina. una tinción modificada de Fite para bacilos ácido-resistentes (BAAR), una tinción de solocromo-cianina para miclina, y la tinción de van Gieson para tejido fribroso. Se observó fibrosis del perineurio y del epineurio. y reemplazamiento librótico del parénquima del nervio el cual fue máximo en el área de la articulación del tobillo. También se observó inflamación en áreas focales, especialmente en el epineurio. alrededor tie los vasos sanguíneos y linfáticos. Se encontró que aun después de 21 años del tratamiento antileproso, 8 de los 10 segmentos del nervio estudiado mostraron BAAR en el endoneurio, pero su presencia difícilmente estuvo asociada con una reacción inflamatoria o con otros electos mal definidos. Se hace incapié en que la lepra BT debe considerarse también como una enfermedad generalizada, especialmente cuando hay afección periférica del tronco nervioso y que en tal caso es aconsejable prolongar la duración tic la terapia antileprosa, til truma a los troncos nerviosos juega un papel importante en la destrucción nerviosa y en la parálisis consecuente.

CORRESPONDENCE

12- Leprosy in children

Pailoor Jayalakshmi; M.Tong; T. Ganesapillai


15- Dr. Ebenezer replies

Gigi J. Ebenezer


18- Dr. Pinitsoontorn replies

Somdej Pinitsoontorn


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