Vol. 60 N° 1 - Jan/Feb/Mar - 1992
ORIGINAL ARTICLE
Suzanne Chanteau; Philippe Glaziou; René Chansin
A major phenolic glycolipid (PGLTB1) f rom Mycobacterium tuberculosis, that resembles the phenolic glycolipid-I (PGL-I) f rom M. leprae, and its synthetic terminal diglycosyl conjugate (PGLTB0) were reported and raised the prospects of a specific sérodiagnostic test for tuberculosis (TB). The diagnostic use of a sulfolipid, namely the SLIV, was also reported. The objective of this investigation was to assess the relative sensitivity, specificity, and predictive values of three ELISAs using the PGLTB1, the PGLTB0, and the SLIV as antigens for the serodiagnosis of TB. Similarly to leprosy patients for the PGL-I antigen, the TB patients responded preferentially in IgM against the phenolic glycolipid. We screened the sera f rom 191 active tuberculous patients, 29 healthy subjects living in France, 102 healthy Polynesian blood donors, 82 contacts of new TB patients, and 20 leprosy patients before treatment for IgG anti-SLIV, and for IgM anti-PGLTB1 and IgM anti-PGLTB0. TB patients showed significantly higher activity than did healthy Polynesians when tested against SLIV and PGLTB0, and the smear-positive group gave higher activity than did the smear-negative but culturepositive group, especially for IgG anti-SLIV. The leprosy patients did not show higher activity than the Polynesian controls. Respectively, for SLIV, PGLTB1 and PGLTB0 antigens, the specificities were of 95%, 85%, and 89%; the sensitivities of 36%, 16% and 15%; the efficiencies of 58%, 40% and 39%; the predictive values for a positive result, assuming a prevalence of 15% among patients with respiratory symptoms, were of 30%, 16% and 19%.
Un glycolipide phénolique majeur (PGLTB1) de Mycobacterium tuberculosis, qui ressemble au glycolipide phénolique-I (PGL-I) de M. leprae, et son conjugué diglycosyl terminal synthétique (PGLTB0) ont été mis en évidence et ont fait naître l'espoir de voir développer un test spécifique pour le sérodiagnostic de la tuberculose (TB). L'utilité diagnostique d'un sulfolipide, le SLIV, a également été rapportée. L'objectif de cette recherche était d'évaluer les sensibilité, spécificité et valeur prédictive de 3 ELISA utilisant le PGLTB1, le PGLTB0, et le SLIV comme antigènes pour le sérodiagnostic de la tuberculose. De même que l'antigène PGL-I pour les patients lépreux, les patients tuberculeux répondent de manière préférentielle par des IgM vis-à-vis du glycolipide phénolique. Nous avons testé les sérums en provenance de 191 patients présentant une tuberculose active, 29 personnes en bonne santé vivant en France, 102 donneurs de sang polynésiens en bonne santé, 82 contacts de nouveaux patients tuberculeux, et 20 patients lépreux avant traitement, pour la présence d'IgG vis-à-vis du SLIV, et pour la présence d'IgM vis-à-vis du PGLTB1 et du PGLTB0. Les patients tuberculeux ont montré une activité significativement plus importante que les polynésiens quand ils furent testés vis-à-vis du SLIV et du PGLTB0, et le groupe des personnes positives à l'examen direct montra une activité plus importante que les personnes négatives à l'examen direct mais positives à la culture, surtout pour les IgG anti-SLIV. Les patients lépreux n'ont pas montré une activité plus importante que les témoins polynésiens. Les spécificités étaient respectivement de 95%, 85%, et 89% visà-vis des antigènes SLIV, PGLTB1 et PGLTB0; les sensibilités étaient de 36%, 16% et 15%; les efficiences étaient de 58%, 40% et 39%; les valeurs prédictives pour un test positif, en supposant une prévalence de 15% parmi les patients présentant des symptômes respiratoires, étaient de 30%, 16% et 19%.
Previamente se ha reportado la existencia de un glicolípido fenólico del Mycobacterium tuberculosis (PGLTB1) y la preparación de un conjugado con su residuo glicosilico terminal sintético (PGLTB0). El PGLTB1 se semeja al glicolipido fenólico-I del .1/. leprae (PGL-I). También se ha reportado el uso del sulfolipido SLIV del .M. tuberculosis para el diagnóstico de la tuberculosis (TB). El objetivo de esta investigación fue el establecer la sensibilidad relativa, la especificidad y el valor predictive de tres ELISAs para el serodiagnóstico de TB. usando como antígenos el PGLTB1, el PGLTB0. y el SLIV. Al igual que los pacientes con lepra con el PGL-I, los pacientes con TB respondieron preferentemente con anticuerpos IgM contra el glicolipido fenólico. Se analizaron los sueros de 191 pacientes con TB activa, de 29 sujetos sanos habitantes de Francia, de 102 donadores de sangre polinesios, de 82 contactos de nuevos pacientes con TB. y de 20 pacientes con lepra sin tratamiento. Se buscaron las respuestas de IgG anti-SLIV. de IgM anti-PGLTB1. y de IgM ant-PGLTB0. Los pacientes TB mostraron una actividad significativamente mayor que los controles polinésios sanos cuando se probaron contra SLIV y contra PGLTB0. El grupo con baciloscopías positivas dio mayor reactividad que los pacientes con baciloscopías negativas pero con cultivos positivos, especialmente para IgG anti-SLIV. Los pacientes con lepra no mostraron mayor reactividad que los controles polinésios. Las especificidades respectivas para losanígenos SLIV, PGLTB1 y PGLTB0, fueron: 95%, 85%, y 89%; las sensibilidades: 36%, 16%, y 15%. y las eficiências: 58%, 40%, y 39%. Los valores predictivos de un resultado positivo, suponiendo una prevalência del 15% entre los pacientes con sintomas respiratórios, fueron del 30%, 16% y 19%, respectivamente.
Richard I. Frankel; Randall T. Mita; Robert Kim; Francis J. Dann
Type 1 Hansen's disease reaction (reversal reaction) is believed to result f rom a change in the immune response in patients with borderline Hansen's disease. The only effective therapy for significant type 1 reactions has been systemic corticosteroid therapy. Cyclosporine is an immunosuppressive drug which has been widely used in organ transplantation. We report a case of type 1 reaction complicating borderline leprornatous Hansen's disease. Cyclosporine therapy resulted in prompt and sustained resolution of the reaction. The possible mechanism of action of cyclosporine and the implications regarding the immunopathogenesis of type 1 reaction are discussed.
La réaction de type I de la maladie de Hansen (réaction reverse) est supposée résulter d'une modification dans la réponse immunitaire des patients qui présentent une maladie de Hansen borderline. Le seul traitement efficace pour des réactions de type 1 significatives a été un traitement par corticostéroïdes. La cyclosporine est un médicament immunosuppresseur qui a été largement utilisée pour des transplantations d'organes. Nous rapportons un cas de réaction de type 1 apparaissant comme complication d'une maladie de Hansen de type borderline lépromateux. Un traitement par cyclosporine a permis une rémission prompte et de longue durée de la réaction. Le mécanisme d'action possible de la cyclosporine et les implications en ce qui concerne l'immunopathogénèse de la réaction de type 1 sont discutés.
Se considera que la reacción tipo 1 de la enfermedad de Hansen (reacción reversa) es el resultado de un cambio en la respuesta inmune de los pacientes con enfermedad de Hansen intermedia. Hasta ahora, la única terapia efectiva para el tratamiento de las reacciones de tipo 1. ha sido la administración sistémica de corticoesteroides. La ciclosporina es una droga inmunosupresora que ha sido ampliamente utilizada en los transplantes de órganos. Aquí se reporta un caso de reacción tipo 1 en un paciente con enfermedad de Hansen lepromatosa subpolar cuyo tratamiento con ciclosporina condujo a una rápida y sostenida resolución de la reacción. También se discuten los posibles mecanismos de acción de la ciclosporina y las implicaciones sobre la inmunopatogénesis de la reacción tipo 1.
V. Ramesh; R. S. Misra; Uma Saxena
The article records the experience of treating multibacillary (BB, BL and LL) leprosy with multidrug therapy (MDT) in an urban leprosy center. The problem of leprosy is to be properly assessed throughout the Indian subcontinent because most of the epidemiological data f rom the areas labeled low-endemic have to be updated. The regularity of therapy must be ensured and monitored constantly, but in spite of our efforts to do so some factors were beyond our control, such as providing a means of livelihood for the migrants f rom other places. In addition, the intake of drugs also has to be periodically checked f rom the history and discoloration of skin and, most importantly, confirmed by performing random spot tests for dapsone in the urine. The main problems discussed are the difficulty in demonstrating acid-fast bacilli in slit-skin smears f rom the macular form of borderline leprosy (also called dimorphous macular) and, secondly, whether the duration of multibacillary therapy was adequate since only approximately 50% of our patients achieved smear negativity after taking MDT for the stipulated period of 24 months. Experiences f rom other centers have suggested that the duration of MDT should be prolonged in multibacillary patients to achieve smear negative status. Yet anothergroup notes that smear negativity is gradually achieved during the period of surveillance following stoppage of MDT after 24 months. Thèse questions await more information f rom good centers with controlled field studies.
L'article rapporte le traitement de la lèpre multibacillaire (BP, BL et LL), par la polychimiothérapie (PCT) dans un centre urbain de traitement de la lèpre. Le problème de la lèpre doit être évalué de manière adéquate à travers le sous-continent Indien parce que la majorité des données épidémiologiques provenant des régions dites à basse endémicité doivent être remises à jour. La régularité du traitement doit être assurée et surveillée de manière constante, mais en dépit de nos efforts pour agir en ce sens, certains facteurs n'ont pas pu être contrôlés, tels que la fourniture de moyens de subsistance pour les émigrants d'autres régions. De plus, la prise effective des médicaments doit également être contrôlée périodiquement par l'anamnèse ainsi que par la coloration cutanée, et, ce qui est très important, confirmée en réalisant de manière aléatoire des tests pour la recherche de dapsone dans les urines. Les principaux problèmes discutés sont premièrement la difficulté de démontrer des bacilles acido-résistants dans les frottis cutanés, dans les formes maculaires de la lèpre borderline (également appelée forme maculaire dymorphe), et deuxièmement de savoir si la durée du traitement de la lèpre multibacillaire était adéquate puisque seulement environ 50% de nos patients ont atteint une négativation de leur frottis cutané après avoir pris la PCT pour la durée recommandée de 24 mois. Des expériences réalisées dans d'autres centres ont suggéré que la durée de la PCT devrait être prolongée chez les patients multibacillaires pour obtenir la négativation des frottis. Cependant un autre groupe rapporte que la négativation des frottis est progressivement atteinte durant la période de surveillance suivant l'arrêt de la PCT après 24 mois. Ces questions nécessitent de plus amples informations en provenance de centres bien organisés qui réalisent des essais contrôlés sur le terrain.
En este articulo se registra la experiencia adquirida en un centro dermatológico urbano en relación con el tratamiento de pacientes multibacilares (BB, BL y LL) con la terapia multidrogas (MDT). El problema de la lepra debe valorarse apropiadamente en el subcontinente Indio porque la mayoría de los datos epidemiológicos en las áreas llamadas de baja endemia deben ser actualizados. Algunos factores fuera de control, tales como el proporcionar un sitio de habitación a los inmigrantes de otros lugares, entorpecen la vigilancia y el registro de la regularidad de la terapia. La ingestión de las drogas tiene que corroborarse periódicamente en función de la historia y la decoloración de la piel y, más importantemente, debe confirmarse haciendo muéstreos al azar para demostrar la presencia de dapsona en la orina de los pacientes. Los principales problemas que se discuten son la dificultad para demostar bacilos ácido resistentes en los extendidos de linfa cutánea de los pacientes con lepra dimorfa macular y, segundo, si la duración de la terapia multidrogas fue adecuada, puesto que sólo aproximadamente-el 50% de los pacientes de este centro alcanzaron la negatividad bacilar después de tomar la MDT durante el periodo estipulado de 24 meses. Las experiencias de otros centros han sugerido que la duración de la MDT debe prolongarse en los pacientes multibacilares hasta que se logre la negatividad bacilar en los extendidos de linfa cutánea. Otros grupos, sin embargo, indican que la negatividad bacilar se logra gradualmente después de terminar los 24 meses de MDT. Estos aspectos requieren más información por parte de buenos centros dermatológicos con estudios de campo controlados.
Iris C. E. Estrada-G.; Maria C. Gutiérrez; José Esparza; Fausto Quesada-Pascual; Sergio Estrada-Parra; Lourival D. Possani
In this work we report the synthesis of 10 peptides (P1-P10) corresponding to one or several segments of the amino acid sequence of proteins f rom Mycobacterium leprae: 65 kDa, 28 kDa, 18 kDa, and 28 kDa superoxide dismutase, recently renamed antigens 2L, 9L, 12L, and 14L, respectively. They were assayed in the guinea pig model for the induction of a delayedtype hypersensitivity response in M. leprae and BCG-sensitized animals. To sensitize the animals two schemes were used: either a single dose of 5 × 109 irradiated or autoclaved whole bacilli, or four weekly intramuscular injections each containing 500 µg of soluble extract of M. leprae (MLSE) in incomplete Freund's adjuvant. Because the second scheme used far too much antigen, we decided to use the first scheme for the experiments we report here. DTH reactions of sensitized animals were induced after 30 days with intradermal injections of 5µg of MLSE and with each of the 10 peptides at three different concentrations: 250 µg, 100µg, and 0.05µg. All M. leprae-sensitized guinea pigs gave indurations of 10 mm or more with MLSE, which indicates that the animals were sensitized. None of them gave DTH indurations with 250 µg or 100µg, but some of them had positive DTH reactions with the 0.05 µg doses of the synthetic peptides. This is most likely due to the fact that we have used an outbred strain of guinea pigs. The peptides were also tested at 0.05µg in animals sensitized with BCG. P7 and P10 seem to be nonspecific peptides; the remaining peptides only induced DTH in the M. leprae-sensitized guinea pigs. P3 (segments 65-85 of the 65-kDa protein) induced a positive DTH in 58% of the tested animals. In other experiments, guinea pigs were sensitized with a single injection (500µg) of each of the synthetic peptides. All animals, except those sensitized with P4 and P8, had positive DTH responses when the homologous peptide was used. Those sensitized with P2, P4, P5, P7, and P8 were able to produce indurations when MLSE was used for the induction of the DTH reaction.
Dans ce travail nous rapportons la synthèse de 10 peptides (P1-P10) correspondant à 1 ou plusieurs segments de séquences d'acides aminés de protéines de Mycobacterium leprae: 65 kDa, 28 kDa, 18 kDa, et al dismutasc superoxyde de 28 kDa récemment renommés les antigènes 2L, 9L, 12L, et 14L, respectivement. Ils ont été testés chez le cobaye pour la production d'une réponse d'hypersensibilité de type retardé chez des animaux sensibilisés au M. leprae et au BCG. Deux protocoles distincts ont été suivis pour sensibiliser les animaux: soit une dose unique de 5 × 109 bacilles entiers irradiés ou autoclaves, soit 4 injections intramusculaires hebdomadaires contenant chacune 500µg d'extrait soluble de M. leprae (MLSE) dans l'adjuvant incomplet de Freund. Du fait que le second protocole utilisait beaucoup trop d'antigènes, nous avons décidé d'utiliser le premier protocole pour les expérimentations que nous rapportons ici. Des réactions d'hypersensibilité retardée chez les animaux sensibilisés ont été produites après 30 jours avec des injections intradermiques de 5µg de MLSE et avec chacun des 10 peptides à 3 concentrations différentes: 250µg, 100 µg, et 0,05µg. Tous les cobayes sensibilisés au M. leprae ont donné des indurations de 10 mm ou plus avec MLSE. ce qui indique que les animaux étaient sensibilisés. Aucun d'entre eux ne donna des indurations d'hypersensibilité retardée avec 250 µg ou 100 µg, mais certains d'entre eux avaient des réactions d'hypersensibilité retardée avec des doses de 0,05 µg des peptides synthétiques. Ceci est vraisemblablement dû au fait que nous avons utilisé une souche de cobaye d'élevage. Les peptides ont également été testés à 0.05µg chez des animaux sensibilisés au BCG. Les peptides P7 et P10 semblent ne pas être spécifiques; les peptides restants n'induisaient une hypersensibilité retardée que chez les cobayes sensibilisés à M. leprae. Le peplide P3 (les segments 65-85 de la protéine de 65 k-Da) induisait und hypersensibilité retardée positive chez 58% des animaux testés. Dans d'autres expérimentations, des cobayes ont été sensibilisés avec une injection unique (500 µg) de chacun des peptides synthétiques. Tous les animaux à l'exception de ceux sensibilisés avec les peptides P4 et P8 avaient des réponses d'hypersensibilité retardée positive quand le peptide homologue était utilisé. Ceux sensibilisés avec P2, P4, P5, P7, et P8 étaient capables de produire des indurations quand MLSE était utilisé pour produire la réaction d'hypersensibilité retardée.
En este trabajo reportamos la síntesis de 10 péptidos (P1-P10) correspondientes a uno o a varios segmentos de las proteínas del Mycobacterium leprae, 65 kDa, 28 kDa, 18 kDa, y 28 kDa (superoxido dismutasa), recientemente renombradas como antígenos 2L, 9L, 12L y 14L, respectivamente. Los péptidos se usaron para inducir respuestas de hipersensibilidad tardía (DTH) en cobayos sensibilizados con M. leprae o con BCG. Los animales se sensibilizaron con una sola dosis de 5 × 109 bacilos completos irradiados o autoclaveados, o con cuatro inyecciones intramusculares de 500µg de extracto soluble de M. leprae (MLSE) en adyuvante incompleto de Freund. Debido a que el segundo esquema requirió demasiado antígeno, decidimos usar el primero para los experimentos reportados aquí. Las reacciones de DTH en los animales sensibilizados se indujeron después de 30 días con inyecciones intradérmicas de 5 iug de MLSE o con cada uno de los 10 péptidos a 3 diferentes concentraciones: 250 µg, 100µg, y 0.05 µg. Todos los cobayos sensibilizados con .M. leprae dieron induraciones de 10 mm o más con el MLSE. Ninguno de ellos dio induraciones de DTH con 250µg o con 100µg de los péptidos sintéticos, aunque algunos de ellos dieron reacciones positivas con la dosis de 0.05 µg. Quizá esto se debió a que se usaron cepas abiertas de cobayos. Los péptidos también fueron probados a la concentración de 0.05µg en los animales sensibilizados con BCG. P7 y P10 parecieron ser péptidos no específicos; el resto de los péptidos sólo indujeron reacciones DTH en los animales sensibilizados con M. leprae. P3 (segmentos 65-85 de la proteína 65 KDa) indugo una DTH positiva en el 58% de los animales probados. En otros experimentos, los cobayos fueron sensibilizados con una sola inyección (500 µg) de cada péptido sintético. Todos los animales, excepto aquellos sensibilizados con P4 y P8, dieron respuestas DTH positivas cuando se usaron los péptidos homólogos. Aquellos sensibilizados con P2, P4, P5, P7, y P8 fueron capaces de producir induraciones cuando se usó MLSE en la inducción de la reacción de DTH.
Ashok Mukherjee; Syed A. Zaheer; Amar K. Sharma; Radhey S. Misra; Hemant K. Kar; Rama Mukherjee; Gursaran P. Talwar
Immunotherapeutic trials with Mycobacterium w (M. w.) on multibacillary patients are in progress at two large hospitals in New Delhi. A total of 380 patients so far have been inducted into the trial. The histopathological profile of the initial 87 patients (52 in the vaccine group, 35 in the control group) who have now completed 2 years of treatment are presented in this report. The vaccine group received multidrug therapy (MDT) and eight intradermal injections of M. w. every 3 months; the control group had MDT with starch injections as a placebo. Skin biopsies were taken at induction and thereafter at every 6 months. The results show a significantly higher proportion of biopsies with histopathological upgrading and/or clearance of dermal granuloma among the vaccinated cases. The number of patients becoming bacteriologically negative was higher in the vaccine group. There was no increase in the degree of neural inflammation in the biopsies showing upgrading. The lepromin site biopsy in patients who converted to positivily after vaccination showed epithelioid cell granulomas as did the biopsies f rom the nodules developing at the vaccination sites. The histopathological observations confirm the additional immunotherapeutic effect of M. w. used along with standard MDT therapy.
Des essais immunothérapeutiques avec le Mycobacterium w (M. w.) sont en route chez des patients multibacillaires dans deux grands hôpitaux de New-Delhi. Jusqu'à présente un total de 380 patients ont été inclus dans l'expérimentation. Le profil histopathologique des 87 patients de début (52 dans le groupe vacciné, 35 dans le groupe témoins) qui ont maintenant achevé deux années de traitement est présenté dans cet article. Le groupe des vaccinés à reçu une polychimiothérapie (PCT) et 8 injections intradermiques de M. w. à intervalles de trois mois; le groupe témoin recevait une polychimiothérapie avec des injections d'amidon comme placebo. Des biopsies cutanées furent prises au début de l'étude et dans la suite tous les 6 mois. Les résultats montrent une proportion significativement plus élevée de biopsies d'un grade histopathologique plus élevé, et/ou une disparition des granulomes dermiques parmi les cas vaccinés. Le nombre de patients devenant négatifs du point de vue bactériologique était plus élevédans le groupe des vaccinés. Il n'y avait pas d'augmentation dans le degré d'inflammation des nerfs dans les biopsies montrant une inversion. La biopsie du site d'injection de la léprominc chez les patients qui ont viré à la positivité après vaccination a montré des granulomes cellulaires épithélioides tout comme les biopsies des nodules s'étant développés au niveau des sites de vaccination. Les observations histopathologiques confirment l'effet immunothérapeutique traditionnel de M. w. avec une polychimiothérapie standard.
En dos grandes hospitales de Nueva Delhi se llevan a cabo ensayos terapéuticos con Mycobacterium w (M. w) en pacientes multibacilares. Hasta ahora se han incluido 380 pacientes en el ensayo. En este reporte se presenta el perfil histopatológico de los 87 pacientes iniciales (52 en el grupo vacunado, 35 en el grupo control) quiénes ahora han completado 2 años de tratamiento. El grupo vacunado recibió tratamiento con múltiples drogas (MDT) y 8 inyecciones intradérmicas de M.w, cada 3 meses; el grupo control recibió MDT e inyecciones de almidón como placebo. Al inicio del ensayo, y cada 6 meses después, se tomaron biopsias de piel. Los resultados muestran una proporción significativamente mayor de biopsias con histopatologia de granulomas en remisión (upgrading) en la mayoría de los casos vacunados. El número de pacientes bacteriológicamente negativos ha sido mayor en el grupo vacunado. No ha habido incremento en el grado de inflamación neural en las biopsias que muestran remisión. La biopsia del sitio de la lepromina en los pacientes que se convirtieron a positivos después de la vacunación, mostró granulomas con células epitelioides, como lo hicieron los nodulos que se desarrollaron en los sitios de vacunación. Las observaciones histopatológicas confirman el efecto inmunoterapéutico adicional del M.w, usado junto con la quimioterapia estándar con múltiples drogas.
Paul W. Roche; Wim J. Theuvenet; Warwick J. Britton
Sixty-three leprosy patients, representing the entire leprosy spectrum f rom tuberculoid to lepromatous disease, and 17 healthy Nepali subjects were tested for their T-cell responses to the purified p65 and p70 protein antigens of Mycobacterium bovis BCG using a lymphocyte proliferative assay. There was strong correlation between the responses to BCG and M. leprae and the responses to the two antigens. Patients and controls lacking a response to either of the whole cell preparations failed to respond to the purified antigens, while BCG responders at the lepromatous pole of the disease did mount a response to both antigens. Significant differences in the magnitude of the responses to these antigens were obtained between controls and the disease groups. In individual subjects, responses to the two antigens were significantly correlated to each other.
Soixante-trois patients lépreux, représentant le spectre entier de la lèpre, de la maladie tuberculoïde à la maladie lépromateuse, et 17 sujets népalais en bonne santé ont été testés quant à la réponse de leurs cellules-T vis-à-vis des antigènes protéiques purifiés P65 et P70 du BCG de Mycobacterium bovis utilisant un test de prolifération lymphocitaire. II y avait une forte corrélation entre les réponses au BCG et M. leprae et les réponses aux deux antigènes. Les patients et les contrôles qui présentaient une réponse déficiente à l'une des deux préparations cellulaires ne répondaient pas non plus aux antigènes purifiés, tandis que ceux qui répondaient au BCG alors qu'ils présentaient une maladie lépromateuse développaient une réponse aux deux antigènes. Des différences significatives dans l'ampleur des réponses à ces antigènes ont été observées entre les groupes de témoins et des groupes de personnes malades. Chez les sujets individuels, les réponses aux deux antigènes étaient corrélées l'une à l'autre de manière significative.
Usando un ensayo de linfoproliferación, se probó la reactividad de las células T de 63 pacientes con lepra y de 17 individuos sanos nepaleses, hacia los antigenos p65 y p70 purificados del Mycobacterium bovis, BCG. El grupo de pacientes con lepra incluyó todas las variedades de la enfermedad. Hubo una fuerte correlación entre las respuestas al BCG y al M. leprae y las respuestas hacia los dos antígenos purificados. Los pacientes y controles que no respondieron a ninguno de los microorganismos Íntegros, tampoco respondieron a los antígenos purificados; aquellos pacientes respondedores del extremo lepromatoso si respondieron a los dos antígenos. Se encontraron diferencias muy significativas en la magnitud de respuesta hacia estos antígenos, entre el grupo control y el grupo de enfermos. En los sujetos individuales, las respuestas a los dos antígenos también estuvieron significativamente correlacionadas entre si.
Heinz Guile; Bernd Schoel; Shubhada Chiplunkar; Sudhara Gangal; Madhav G. Deo; Stefan H. E. Kaufmann
Sonicated extracts of Mycobacterium leprae were separated by two-dimensional gel electrophoresis and electroeluted into 400 distinct soluble fractions. These fractions were probed with T lymphocytes f rom leprosy patients of different disease types, healthy contacts, and unexposed healthy individuals. Proliferative responses were visualized using three-dimensional stimulation profiles. T cells f rom many patients and contacts responded to a multitude of antigen fractions of different molecular masses and isoelectric points. T cells f rom unexposed individuals gave significant responses to lysates or whole organisms of M. leprae, but no or only marginal responses to separated antigen fractions. T cells of polar tuberculoid (TT) and the majority of polar lepromatous (LL) leprosy patients responded only to separated antigen fractions but not to lysates or whole organisms of M. leprae. The remaining LL patients were totally unresponsive and even failed to respond to separated M. leprae fractions. Thus, in some leprosy patients unresponsiveness to M. leprae seems to be caused by distinct components and can be broken by using separated antigen fractions; whereas in others, anergy remains. T cells of borderline tuberculoid (BT) patients, who were under chemotherapy, responded to separated antigen fractions as well as to lysates of M. leprae organisms. In contrast, BT patients who were untreated failed to react with any of the M. leprae preparations. Similarly, T cells of the majority of LL patients responding to separated fractions were under chemotherapy; whereas T cells f rom untreated LL patients gave no or only marginal responses to any of the M. leprae antigen preparations. These findings suggest some linkage between the degree of T-cell responsiveness and antileprosy drug treatment.
Des extraits soniqués de Mycobacterium leprae ont été séparés par électrophorèse sur gel en deux dimensions et électrodilués dans 400 fractions solubles distinctes. Ces fractiones ont été testées avec des lymphocites T en provenance de patients lépreux, de dilïërents types de la maladie, des contacts en bonne santé et des individus en bonne santé non exposés à la lèpre. Des réponses prolifératives ont été observées en examinant des profils de stimulation en trois dimensions. Des cellules T de beaucoup de patients et contacts ont répondu à une multitude de fractions antigéniques de différentes masses moléculaires et points isoélectriques. Les cellules T d'individus non exposés ont donné des réponses significatives vis-à-vis des lysats ou d'organismes entiers de M. leprae, mais pas de réponse ou seulement des réponses marginales vis-àvis des fractions antigéniques séparées. Les cellules T de patients tuberculoïdes polaires (TT) et de la majorité des patients lépromateux polaires (LL) répondaient seulement aux fractions antigéniques séparées mais non aux lysats ou aux organismes entiers de M. leprae. Les autres patients LL ne répondaient absolument pas et ont même manqué de répondre aux fractions séparées de M. leprae. Chez certains patients lépreux, l'allergie vis-à-vis de M. leprae semble done être causée par différentes composantes et peut-être contournée en utilisant des fractions antigéniques séparées; tandis que chez d'autres, l'allergie reste stable. Les cellules T des patients borderline tuberculoïdes (BT) qui étaient sous chimiothérapie répondaient aux fractions antigéniques séparées aussi bien qu'au lysats ou aux organismes entiers de M. leprae. Par contraste, les patients BT qui n'étaient pas traités ne réagissaient à aucune des préparations de M. leprae. De même, les cellules T de la majorité des patients LL répondant aux fractions séparées étaient sous chimiothérapie; tandis que les cellules T des patients LL non traités ne donnaient pas de réponse ou seulement une réponse marginale à l'ensemble des préparations antigéniques de M. leprae. Ces observations suggèrent qu'il existe un lien entre le degré de réponse des cellules T et le traitement chimiothérapeutique de la lèpre
Se separaron extractos sonicados de Mycobacterium leprae por electroforésis bidimensional en gcl, y se electroeluyeron en 400 distintas fracciones solubles. Estas fracciones se probaron con linfocitos T de pacientes con diferentes tipos de lepra, de contactos sanos, y de individuos sanos no expuestos a la lepra. Las respuestas proliferativas se visualizaron usando perfiles de estimulación tridimensional. Las células T de muchos pacientes y contactos respondieron a una multitud de fracciones antigénicas de diferentes masas moleculares y puntos isoeléctricos. Las células T de los individuos no expuestos dieron respuestas significativas contra los microorganismos completos o sus lisados pero no respondieron, o lo hicieron marginalmente, en contra de las fracciones antigénicas separadas. Las células T de los pacientes con lepra TT y de la mayoría de los pacientes con lepra LL, respondieron sólo a las fracciones antigénicas separadas pero no a los lisados o a los microorganismos completos. El resto de los pacientes LL fueron totalmente no-respondedores. Así, en algunos pacientes con lepra, la falta de respuesta al M. leprae parece estar causada por distintos componentes y puede revertirse usando fracciones antigénicas separadas; en otros, la anergia permanece. Las células T de los pacientes con lepra tubcrculoide subpolar (BT) en tratamiento, respondieron tanto a las fracciones antigénicas separadas como a los lisados o a los organismos completos. En contraste, los pacientes BT no tratados fallaron a responder con cualquiera de las preparaciones de M. leprae. De manera similar, la mayoría de los pacientes LL, cuyas células T respondieron a las fracciones separadas, estaban en tratamiento, mientras que no respondieron las células de los pacientes no tratados. Estos resultados sugieren cierta relación entre el grado de respuesta de las células T y el tratamiento con drogas anti-leprosas.
Mohan D. Gupte; Ramakrishna S. Vallishayee; Devarayasamundram S. Anantharaman; Srinivasan Kannan
Soluble skin-test antigens (STA), produced f rom armadillo-derived Mycobacterium leprae by Drs. Rees and Convit, were expected to meet the long-felt need of a test for leprosy infection and also to serve as tests for measuring postvaccination sensitization induced by vaccine preparations against leprosy. The present paper reports results f rom two studies examining the influence, if any, of skin testing with Rees' STA on reaction to a subsequent test with the same antigen. In the first study, 2168 persons f rom households of leprosy patients and f rom neighboring households were skin tested with Rees' STA twice at an interval of 6 months. In the second study, 1700 persons, free f rom leprosy, received cither Rees' STA or normal saline by random allocation. A random subset of 850 persons was tested with Rees' STA after 3 months. The remaining 850 persons were tested with Rees' STA after 6 months. In addition, 242 leprosy patients were given Rees' STA or normal saline by random allocation, and all of these patients were tested with Rees' STA after 6 months. The results of the two studies showed that among persons reacting with a small size of reaction to Rees' STA, the size of the reaction to the repeat test was significantly larger. However, f rom the results of the second study, which included a control group, it was clearly seen that the quantum of boosting or sensitizing effect of the first test as well as that of new sensitization was small over a period of 3-6 months. Thus, the significant increase in reaction size to the second test among those with a small-size reaction to the first test was mostly due to the design effect and was not attributable to the STA. In view of the finding that even without any intervention, reactions to a repeat test would be much larger among those with a small-size reaction to the first test, it becomes important while designing studies for measuring postvaccination sensitivity that provision be made for a control group to ensure a direct measure of the effect of a vaccine.
On avait espéré que les tests cutanés basés sur les antigènes solubles produits à partir de Mycobacterium leprae obtenus de tatous par les Docteurs Rees et Convit, puissent satisfaire les besoins ressentis depuis longtemps pour un test d'infection lépreuse; on avait également espéré que ces tests puissent mesurer la sensibilisation post-vaccinale induite par des préparations de vaccins vis-à-vis de la lèpre. Le présent article rapporte les résultats de deux études examinant l'influence éventuelle des tests cutanés basés sur l'antigène soluble de Rees sur la réaction vis-à-vis d'un test ultérieur avec le même antigène. Dans la première étude, 2168 personnes vivant dans des maisons avec des patients présentant la lèpre ou dans des maisons voisines, ont eu à deux reprises, à un intervalle de 6 mois un test cutané avec l'antigène de Rees. Dans la seconde étude, 1700 personnes, indemnes de lèpre, ont reçu soit l'antigène soluble de Rees, soit une solution saline normale. L'allocation de ces personnes à l'un ou l'autre groupe, s'est déroulée au hasard. Un sous-groupe randomisé de 850 personnes fut testé avec l'antigène soluble de Rees après 3 mois. Les autres 850 personnes furent testées avec l'antigène de Rees après 6 mois. De plus, 242 patients lépreux ont reçu soit l'antigène soluble de Recs, soit la solution saline normale avec allocation au hasard, et tous ces patients ont été testés avec l'antigène de Recs après 6 mois. Les résultats des deux études ont montré que parmi les personnes qui avaient une réaction de petite taille vis-à-vis de l'antigène soluble de Rees, la taille de la réaction augmentait de manière significative lorsque le test était répété. Cependant, à partir des résultats de la deuxième étude, qui comprenait un groupe témoins, on a clairement vu que l'effet sensibilisateur du premier test aussi bien que celui d'une sensibilisation répétée était faible sur une période de 3 à 6 mois. En conséquence, l'augmentation significative de la taille de la réaction au second test parmi ceux qui avaient une réaction de petite taille était due principalement à un artefact et ne pouvait être attribuée à l'antigène soluble. Au vu de l'observation que, même en l'absence d'intervention, les réactions à un test répété seraient beaucoup plus importantes parmi ceux qui avaient présenté une réaction de petite taille pour le premier test, il devient important lors de l'établissement de protocoles d'étude pour mesurer la sensibilité post-vaccinale, de prévoir un groupe témoin afin d'assurer une mesure directe de l'effet du vaccin.
Se esperaba que los antígenos solubles para pruebas en piel (STA), producidos a partir del Mycobacterium leprae cultivado en armadillos por los Drs. Rees y Convit, sirvieran para demostrar la infección leprosa y también para medir la sensibilización postvacunal inducida por las diferentes vacunas contra la lepra. El presente trabajo reporta los resultados de dos estudios en donde se examinó la influencia de las pruebas con los STA de Rees, sobre la reacción a una prueba de repetición con el mismo antígeno. En el primer estudio, 2168 personas (convivientes y no convivientes con pacientes con lepra), se probaron con los STA en dos ocasiones con un intervalo de 6 meses. En el segundo estudio, 1700 personas libres de lepra, recibieron los STA o solución salina, al azar. Una muestra de 850 personas seleccionada también al azar se probó con los STA después de 3 meses. Las restantes 850 personas se probaron con los STA, 6 meses después. Además, 242 pacientes con lepra se inyectaron, al azar, con los STA o con solución salina, y lodos se probaron con los STA de Rees, 6 meses después. Los resultados de los 2 estudios mostraron que las personas que dieron una pequeña reacción a los STA, exhibieron una reacción significativamente mayor cuando se probaron una segunda vez con los STA. Sin embargo, los resultados del segundo estudio, el cual incluyó un grupo control, indicaron que la magnitud del efecto reestimulante o sensibilizante de la primer prueba en piel, así como la magnitud del efecto de una nueva sensibilización, fueron pequeñas durante un periodo de 3 a 6 meses. Así, el significante incremento en el tamaño de la reacción a la segunda prueba dérmica, entre aquellos individuos con una reacción de pequeño tamaño a la primer prueba en piel, no fue atribuible a los STA, sino al diseño experimental. En vista del hallazgo de que aún sin ninguna intervención, las reacciones a una prueba de repetición son mucho mayores en los individuos con una reacción de pequeño tamaño a la primer prueba intradérmica, se hace evidente la importancia de incluir siempre un grupo control en los estudios diseñados para medir la sensibilidad resultante de cualquier vacunación contra la lepra.
Muhammad Ishaque
Mycobacterium lepraemurium was cultivated on Ogawa egg-yolk medium and its energy coupling mechanisms were investigated. Cell-free extracts prepared f rom in vitro-grown cells catalyzed phosphorylation coupled to the oxidation of generated NADH, added NADH, and succinateyielding ratios of phosphorus moles incorporated into high-energy bonds to oxygen atoms utilized (P/O ratios) of 0.75, 0.52, and 0.36, respectively. Ascorbate oxidation alone or in the presence of tetramethyl-pphenyline-diamine (TMPD) did not yield any adenosine triphosphate (ATP). However, ascorbate in the presence of added cytochrome c was coupled to ATP synthesis and yielded a P/O ratio of 0.12. The oxidative phosphorylation was uncoupled by all of the uncouplers used without any inhibition of oxygen consumption. ATP generation coupled to NADH oxidation was completely inhibited by the flavoprotcin inhibitors, such as rotcnone and amytal; these inhibitors had no effect, however, on ATP synthesis associated with succinate oxidation. Antimycin A or 2-n-hcptyl-4-hydroxy-quinoline-N-oxide (HQNO) and cyanide inhibited markedly the oxidations of NADH and succinate as well as the coupled ATP generation. The phosphorylation coupled to ascorbate plus cytochrome c was not affected by either of the flavoprotcin inhibitors or by antimycin A or HQNO, but was completely inhibited by cyanide. The thiolbearing agents p-chloromercuribenzoate (PCMB) and N-ethylmaleimide were the potent inhibitors of the phosphorylation associated with the oxidation of NADH and succinate. The results indicate that the three energy-coupling sites are functional in the respiratory chain of in wire-grown M. lepraemurium.
Mycobactcrium lepraemurium a été cultivé sur milieu de jaune d'oeuf d'Ogawa et ses mécanismes de couplage d'énergie ont été étudiés. Des extraits acellulaircs préparés à partir de cellules cultivées in vitro ont catalysé la phosphorilation couplée à l'oxydation du NADH endogène, NADH exogène, et des rapports de production de succinate des moles de phosphore incorporés dans des liens à haute énergia à des atomes d'oxygène utilisés (rapport P/O) de respectivement 0, 75, 0, 52, et 0, 36. L'oxydation de l'ascorbate seul ou en présence de diaminc de tétraméthyl-p-phénylinc (TMPD) n'a pas d'adénosinc triphosphate (ATP). Cependant, de l'ascorbate en présence de cytochrome c additionnel était couplée à la synthèse d'ATP et produisait un rapport P/O de 0, 12. La phosphorilation oxydative était découplée par tous les découpleurs utilisés sans inhibition de la consommation d'oxygène. La production d'ATP couplée à l'oxydation du NADH était complètement inhibée par les inhibiteurs de la flavoprotéinc, telle que la rotenone et l'amytal; ces inhibiteurs n'avaient pas d'effet, cependant, sur la synthèse d'ATP associée à l'oxydation du succinate. L'antimycine A ou le 2-n-heptyle-4-hydroxiquinolincn-oxyde (HQNO) et la cyanide inhibaient de façon marquée les oxydations du NADH et du succinate ainsi que le couplage de la production d'ATP couplé. La phosphorilation couplée à l'ascorbate plus cytochrome c n'était affectée par aucun des inhibiteurs de la flavoprotéine ni par l'antimycine A ou le HQNO, mais était complètement inhibée par la cyanide. Les agents p-chloromercuribenzoate (PCMB) et N-ethylmaleimide et porteurs de thiol étaient les inhibiteurs puissants de la phosphorilation associée à l'oxydation du NADH et du succinate. Les résultats indiquent que les trois sites de couplage d'énergie sont fonctionnels dans la chainc respiratoire de M. lepraemurium cultivé in-vitro.
Se estudiaron los mecanismos acopladores de energía del Mycobacterium lepraemurium crecido en el medio de Ogawa-yema de huevo. Los ext ractos libres de células de las micobacterias cultivadas in vitro catalizaron la fosforilación acoplada a la oxidación del NADH generado y del NADH y succinato adicionados, exhibiendo índices de incorporación de fósforo (en moles) en enlaces de alta energía/átomos de oxígeno utilizados (índices P/O) de 0.75, 0.52, y 0.36, respectivamente. La oxidación del ascorbato sólo o en presencia de tetrametil-p-fenilen diamina (TMFD) no produjo nada de trifosfato de adenosina (ATP). Sin embargo, en presencia de citocromo c exógeno, el ascorbato fue acoplado a la síntesis de ATP y produjo un índice P/O de 0.12. La fosforilación oxidativa fue desacoplada por todos los desacopladores usados sin que ocurriera ninguna inhibición del consumo de oxígeno. La generación de ATP acoplada a la oxidación del NADH fue completamente inhibida por los inhibidores de flavoproteínas, retenona y amital; sin embargo, estos inhibidores no tuvieron efecto sobre la síntesis del ATP asociada a la oxidación del succinato. La antimicina A o óxido de la 2-n-heptil-4-hidroxiquinolina (HQNO) y el cianuro, inhibieron marcadamente las oxidaciones del NADH y del succinato, así como la generación acoplada del ATP. La fosforilación acoplada al ascorbato en presencia de citocromo c, no fue afectada ni por los inhibidores de flavoproteínas ni por la antimicina A o HQNO, pero fue completamente inhibida por cianuro. Los agentes tiolados p-cloromercuribenzoato (PCMB) y N-etilmaleimida, fueron potentes inhibidores de la fosforilación oxidativa del NADH y succinato. Los resultados indican que los 3 sitios acopladores de energía son funcionales en la cadena sitios acopladores de energía son funcionales en la cadena respiratoria del M. lepraemurium cultivado in vitro.
EDITORIAL
CORRESPONDENCE
Subramanian Dhandayuthapani; Duraisamy Anandan; Vivekanand N. Bhatia
Julia Ignez Salem; Maria Francisca de A. Costa ; Philippe Cruaud; Hugo L. David
Dilvani O. Santos; Jorge L. Salgado; Andre L. Moreira; Euzenir N. Sarno
Sreevatsa; Bhavaneshwar K. Girdhar; Ipe M. Ipe; Kothapalli V. Desikan
Sang-Nae Cho; Joo-Deuk Kim; Robert H. Gelber; Patrick J. Brennan
Narendra K. Mathur; Asit Mittal; Dinesh Mathur; Suresh K. Jain
Narendra K. Mathur; Dinesh C. Mathur; Rajesh D. Mehta; Asit Mittal; Suresh K. Jain
Luis N. Baliña; Laura Jotimliansky; del Carmen Sasiain; Cristina Kien; Fernando Minnucci; Cristina Kien; Edgardo Chouela
Laszlo Kato; J. Szejtli; L. Szente
OBITUARY
NEWS AND NOTES
BOOK REVIEW
CURRENT LITERATURE
ACKNOWLEDGMENT