Vol. 63 N° 1 - Dec/Jan/Feb/Mar - 1995
ORIGINAL ARTICLE
Jorg M. Ponnighaus; Gjalt Boerrigter
A trial comparing 18 monthly and 30 monthly doses of the World Health Organization-recommended multidrug therapy (WHO/MDT) in 305 multibacillary leprosy patients in Malawi is described. Patients were randomly allocated to one of the two regimens at the time of taking the 18th supervised dose of WHO/MDT. The mean follow-up period was 3 years (maximum 6 years). No relapse was observed in either group. The cumulative probabilities of remaining slit-skin smear positive were significantly higher among patients receiving only the 18 monthly doses of WHO/MDT, but reached zero at month 60 of follow up. The percentage of patients who developed new disabilities during the trial period was similar in both groups. However, the overall percentage of patients who developed new disabilities (50/305, 16.4%) remains disturbingly high. On the whole, the results of the trial argue in favor of 18 monthly doses of WHO/MDT taken within 24 months as being sufficient for the treatment of multibacillary leprosy.
On décrit un essai comparatif de 18 et 30 doses mensuelles de la polychimiothérapie aux doses recommandées par l'Organisation Mondiale de la Santé (PCTV OMS). Les patients ont été répartis au hasard pour recevoir l'un ou l'autre des deux régimes thérapeutiques au moment de recevoir leur dixscpticmc dose de PCT/OMS. La période moyenne de suivi a été de 3 ans (maximum 6 ans). Aucune rechute n'a été observée dans aucun des deux groupes. Les probabilités cumulées de rester positif aux frottis cutanés étaient sigificativement plus élevées pour les patients qui ont reçu seulement 18 doses mensuelles de PCT/OMS, mais ont atteint zéro au soixantième mois du suivi. Le pourcentage de patients qui ont développé de nouvelles incapacités durant la période d'essai était semblable dans les deux groupes. Cependant, le pourcentage total des patients qui ont développé de nouvelles incapacités (50/305, 16.4%) reste élevé de manière troublante. Dans l'ensemble, les résultats de l'essai plaident en faveur du fait que les 18 doses mensuelles de PCT/OMS prises dans un intervalle de temps de 24 mois seraient suffisantes pour le traitement de la lèpre multibacillaire.
Se hizo un estudio en 305 pacientes con lepra de Malawi, comparando la efectividad de 18 y 30 dosis mensuales de la poliquimioterapia (PQT) recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Los pacientes se repartieron al azar en cada uno de los dos esquemas de tratamiento, cuando ya habian recibido 18 dosis de la PQT/OMS. El periodo promedio de seguimiento fue de 3 años (máximo de 6 años). En ningún grupo se observaron recaídas. Las probabilidades acumulativas de permanecer positivos en las extensiones de linfa cutánea fueron significativamente mayores entre los pacientes que recibieron sólo las 18 dosis de la PQT/OMS, pero fueron de cero hacia el mes 60 de sequimiento. El porcentaje de pacientes que desarrollaron nuevas alteraciones incapacitantes durante el periodo que duró el ensayo fue similar en ambos grupos. Sin embargo, el porcentaje global de pacientes que desarrollaron nuevas alteraciones incapacitantes (50/305, 16.4%) permaneció preocupantemente alto. De manera general, los resultados del estudio cstñ en favor de las 18 dosis mensuales de la PQT/ OMS, tomadas dentro de un periodo de 24 meses, como suficientes para el tratamiento de la lepra multibacilar.
Tranquilino T. Fajardo Jr; Laarni G. Villahermosa; Eduardo C. déla Cruz; Rodolfo M. Abalos; Scott G. Franzblau; Gerald P. Walsh
Twelve patients were treated with three dose levels of minocycline for 30 days, primarily to detect the dose-related effects on Mycobacterium leprae viability, followed by another 5 months of daily minocycline for overall efficacy and persistence of clinical and antibacterial effects. Subsequently, the patients were given standard WHO/MDT chemotherapy for multibacillary leprosy. Clinical improvement was recognizable during the first month, occurring much earlier among those on minocycline 200 mg daily than those who received minocycline 100 mg daily. A similar change also was observed in one patient 11 days after three daily doses of 100 mg of minocycline. At the end of 6 months, all patients were clinically improved with a slight reduction in the average bacterial index (BI) and logarithmic index of bacilli in biopsy (LIB). The effects of minocycline on viability by mouse foot pad inoculation and palmitic acid oxidation assays were noted beginning at 10 to 14 days of daily dosing and becoming more definite after 30 days of treatment. Both tests correlated fairly well. Doses of 200 mg daily did not appear to be more efficient than minocycline 100 daily. Phenolic glycolipid-I (PGL-I) antigen determinations done on some patients during the first month remained positive and did not correlate with changes in viability results. At the end of 6 months, after 5 months of 100 mg of minocycline monotherapy, no viable organisms could be demonstrated by mouse foot pad inoculation and palmitic acid oxidation assays; assays for PGL-I antigen were all negative. No lepra reactions were observed during the 6 months of therapy. Tolerable side effects, dizziness and abdominal discomfort were noted only during the first week of treatment in 2 of 12 patients. A generalized light-brown pigmentation was observed, which was more intense and blue-gray over the sites of subsided localized lesions. The results of this study further confirm the early effects of minocycline on clinical lesions and the viability of M. leprae with antibacterial and clinical effects becoming definitely more demonstrable after 6 months of treatment. Thus, minocycline is a valuable drug in the treatment of leprosy, and studies to determine its efficacy in combination with other antileprosy drugs, dosage levels and pulsed dosaging, as well as the effects of lepra reaction, should be pursued.
Douze patients ont été traités avec trois dosages de minocycline pendant 30 jours, tout d'abord pour détecter les effets liés au dosage sur la viabilité du Mycobacterium leprae; cette période a été suivie de 5 mois de minocycline quotidienne pour étudier l'efficacité globale et la persistance d'effets cliniques et antibactériens. Par la suite, les patients ont reçu une chimiothérapie PCT/OMS standard pour la lèpre multibacillairc. Une amélioration clinique a été reconnue durant le premier mois, survenant beaucoup plus tôt parmi ceux qui recevaient 200 mg de minocycline par jour que chez ceux qui recevaient 100 mg de minocycline par jour. Un changement semblable était également observé chez un patient 11 jours après trois doses quotidiennes de 100 mg de minocycline. A la fin des 6 mois, tous les patients étaient améliorés cliniquement, avec une légère réduction de l'indice bactérien (IB) moyen et de l'indice logarithmique de bacilles (ILB) dans la biopsie. On a noté que les effets de la minocycline sur la viabilité mesurée par inoculation dans le coussinet plantaire de souris et des tests basés sur l'oxydation de l'acide palmitique commençaient du lOème au 14ème jours du traitement quotidien, et devenaient plus nets après 30 jours de traitement. Il y avait une assez bonne correlation entre ces deux tests. Des doses de 200 mg par jour n'apparaissaient pas plus efficaces que 100 mg de minocycline par jour. Les déterminations d'antigène du glycolipide phénolique I (PGL-I) réalisée chez certains patients durant le premier mois sont restées positives et ne montraient pas de correlation avec des changements dans les résultats de viabilité. A la fin des 6 mois, après 5 mois de monothérapie par 100 mg de minocycline, aucun organisme viable ne pouvait être mis en évidence par inoculation dans le coussinet plantaire de la souris et des tests d'oxydation de l'acide palmitique; les tests pour l'antigène PGL-I étaient tous négatifs. Aucune réaction lépreuse n'a été observée durant les 6 mois de traitement. Des efTets secondaires supportables, des vertiges et une gène abdominale n'ont été notés que durant la première semaine de traitement chez 2 des 12 patients. On a observé une pigmentation généralisée brun-clair, qui était plus intense et bleu-gris aux endroits des anciennes lésions localisées. Les résultats de cette étude confirment les effets précoces de la minocycline sur les lésions cliniques et la viabilité de M. leprae, avec des effets anti-bactériens et cliniques devenant nettement plus démontrables après 6 mois de traitement. En conséquence, la minocycline est un médicament utile dans le traitement de la lèpre, et des études pour déterminer son efficacité en combinaison avec d'autres médicaments anti-lépreux, différents dosages et des administrations espacées, ainsi que ses effets sur la réaction lépreuse, devraient être poursuivies.
Se trataron 12 pacientes con tres dosificaciones de minociclina por 30 días, primariamente para detectar los efectos de las diferentes dosis sobre la viabilidad de Mycobacterium leprae, seguido por otros 5 meses de minociclina diaria para establecer la eficiencia general de la droga y la persistencia de sus efectos clínicos y antibacterianos. Posteriormente los pacientes recibieron la poliquimioterapia estándar de la WHO para la lepra multibacilar. La mejoría clínica fue notada durante el primer mes, ocurriendo mucho más temprano entre aquellos en tratamiento con 200 mg diarios de minociclina que entre aquellos tratados con 100 mg diarios de minociclina. También se observó un cambio similar en un paciente a los 11 días de haber recibido 3 dosis diarias de 100 mg de minociclina. Al final de los 6 meses, todos los pacientes mostraron mejoría clínica con una ligera reducción en el índice bacteriano (BI) y en el índice logarítmico de bacilos en las biopsias (LIB). Los efectos de la minociclina sobre la viabilidad, por la técnica de inoculación en la almohadilla plantar del ratón y por los ensayos de oxidación del ácido palmítico, fueron notados entre los días 10 a 14 de tratamiento diario y llegaron a ser más aparentes después de 30 días de tratamiento. Ambas pruebas mostraron una buena correlación. Las dosis de 200 mg diarios de minociclina no parecieron ser más eficientes que la dosis de 100 mg diarios de la misma. Las determinaciones de glicolípido fenólico-I (PGL-I) practicadas en algunos pacientes durante el primer mes de tratamiento, permanecieron positivas y no correlacionaron con los cambios en los resultados de viabilidad. Al final de 6 meses, después de 5 meses de monoterapia con 100 mg de minociclina, no se pudieron demostrar bacilos viables por la técnica de la almohadilla plantar del ratón y por la oxidación del ácido palmítico; los ensayos para PGL-I fueron todos negativos. No se observaron reacciones leprosas durante los 6 meses de terapia. Algunos efectos colaterales tolerables, mareo y malestar abdominal, ocurrieron sólo durante la primera semana de tratamiento en 2 de 12 pacientes. Se observó una pigmentación generalizada de color café que fue más intensa y de color azulgris sobre los sitios de las lesiones curadas. Los resultados de este estudio confirman los efectos tempranos de la minociclina sobre las lesiones clínicas y sobre la viabilidad de M. leprae, con sus efectos antibacterianos y clínicos definitivos después de 6 meses de tratamiento. Así, la minociclina es una droga valiosa en el tratamiento de la lepra pero debe investigarse aún más, su eficacia en combinación con otras drogas antileprosas, los niveles y frecuencia de la dosis, y sus efectos sobre la reacción leprosa.
P. Vijayakumaran; N. Manimozhi; Kumar Jesudasan
Multidrug therapy (MDT) recommended by the World Health Organization (WHO) had been administered in 1982 to a cohort of multibacillary (MB) leprosy patients. Treatment was administered for a minimum period of 2 years or until skin-smear negativity for acid-fast bacilli was achieved (whichever was later). Among 980 MB leprosy patients who completed treatment, 11 patients (1.1%) experienced lepra reactions during surveillance. Probable predictive factors are discussed. The incidence of lepra reaction seemed to be three times more common in borderline (BL) leprosy than in lepromatous (LL) leprosy. The majority of these events occurred during the first 3 years of surveillance. All of these episodes were treated withsteroids without antileprosy chemotherapy. None of these patients was confirmed as experiencing a relapse during the subsequent period of surveillance.
La poychimotherapie (PCT) recommandée par l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS) a été administrée en 1982 à une cohorte de patints lépreux multibacillaircs (MB). Le traitement a été administré pour une période minimale de deux ans ou jusqu'à négativation des frottis cutanés pour les bacilles acido-résistants (quel que soit ce qui arrivait en dernier lieu). Parmi 980 malades de la lèpre qui ont terminé le traitement, 11 malades (1.1 %) ont eu une réaction lépreuse durant la surveillance. Des facteurs prédictifs probables sont discutés. L'incidence de la réaction lépreuse semblait trois fois plus commune dans la lèpre borderline (BL) que dans la lèpre lépromateuse (LL). La majorité de ces épisodes est survenue durant les trois premières années de la surveillance. Tous ces épisodes ont été traités avec des stéroi'des sans chimiothérapie antilépreuse. On n'a confirmé de rechute pour aucun de ces patients durant la suite de la période de surveillance.
En 1982 se adiminstró la poliquimioterapia (PQT) recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) a un grupo de pacientes con lepra multibacilar (MB). El tratamiento fue administrado por un periodo mínimo de 2 años o hasta que los extendidos de linfa cutánea fueron negativos para bacilos ácido-resistentes (lo que haya ocurrido más tarde). De los 980 pacientes con lepra MB que completaron su tratamiento, 11 pacientes (1.1%) desarrollaron reacciones leprosas durante el periodo de seguimiento. Se discuten los probables factores predictivos. La incidencia de la reacción leprosa pareció ser 3 veces más común entre los pacientes con lepra intermedia (BL) que entre los pacientes con lepra lepromatosa (LL). La mayoría de estos eventos ocurrió durante los primeros 3 años de seguimiento. Todos estos episodios fueron tratados con esteroides sin terapia antilcprosa. Ninguno de estos pacientes tuvo una recaída confirmada durante el periodo subsecuente de seguimiento.
Mehmet Koyuncu; Onur Celik; Erol Inan; Ahmet Ozturk
Thirty-six patients with leprosy and 12 sex- and age-matched controls were investigated for disorders of the audiovestibular system, and vertebral artery measurements were calculated using a color Doppler ultrasound technique. Sensorineural hearing loss found to be of cochlear origin was detected in 8 of the leprosy patients. Maximal flow velocity and mean flow velocity were measured, and the total vertebral artery flow was calculated by adding flows F rom the right and left sides. There was a significant reduction in the total maximal peak flow velocity of the vertebral artery of the lepromatous patients compared to the controls. Dopplcr sonography of the vertebral artery gave useful information about some pathology seen in lepromatous patients.
Trente-six patients lépreux et 12 témoins appariés pour le sexe et l'âge ont été examinés pour la recherche de désordres du système audio-vestibulaire, et les mesures de l'artère vertébrale ont été calculées par une technique à ultra-sons de Dopplcr. Une perte d'audition sensori-nerveuse d'origine cochléaire a été trouvée chez huit des malades de la lèpre. La vélocité maximale en flux et la vélocité moyenne ont été mesurées, et le flux total de l'artère vertébrale a été calculé en additionnant les flux des côtés gauche et droit, Il y avait une différence significative entre le pic maximum total de vélocité de l'artère vertébrale des patients lépromateux et des témoins. La sonographic Dopplcr de l'artère vertébrale a donné des informations utiles à propos de certaines pathologies observées chez des malades delà lèpre.
Treinta y seis pacientes con lepra y 12 controles de su misma edad y sexo se sometieron a estudios para buscar desórdenes del sistema audiovestibular. También se hicieron mediciones en la arteria vertebral usando la técnica de sonografia de Dopplcr. Se encontró una pérdida scnsoncural auditiva de origen coclear en 8 de los pacientes con lepra. Se midieron tanto la máxima velocidad de flujo como la velocidad media de flujo. El flujo total de la arteria vertebral se calculó adicionando los flujos de los lados derecho c izquierdo. Hubo una diferencia significativa en la velocidad del flujo máximo de la arteria vertebral entre los pacientes lepromatosos y los controles. La sonografia de Dopplcr de la arteria vertebral proporcionó información útil sobre la patología de los pacientes lepromatosos.
Masahiro Nakamura
The effect of the pH of a cell-free liquid medium on the activity of Mycobacterium leprae during incubation of the cells was investigated. As a parameter for evaluating the activity, the amount of adenosine triphosphate (ATP) extracted F rom the incubated cells collected by ccntrifugation was measured. The results demonstrate that the activity of M. leprae cells was maintained at a significant level for approximately 4 weeks at 30ºC in 0.05 M phosphate buffer containing 10% fetal calf serum at pH 7.0 compared to cells at other pHs tested, but activity was not preserved in phosphate buffer at pH 7.0 without serum and incubated at 37ºC. The maintenance of the activity under these conditions was prolonged somewhat by the addition of glycerin (2%) to the medium, and was definitely inhibited by rifampin but not by either penicillin or isoniazid. F rom the results reported here, it could be postulated that the optimal pH of cell-free media for the study of cultivation of M. leprae is 7.0.
On a examiné l'effet du pH d'un milieu liquide acellulairc sur l'activité de Mycobacterium leprae durant l'incubation des cellules. Comme paramètre d'évaluation de l'activité, on a mesuré la quantité d'adénosine triphosphate (ATP) récoltée par ccntrifugation à partir des cellules incubées. Les résultats démontrent que l'activité des cellules de M. leprae était maintenue à un niveau significatif pour environ 4 semaines à 30ºC dans un tampon phosphate 0.05 M contenant 10% de serum de foetus de veau à pH 7.0, par comparaison à des cellules testées à d'autres pH, mais l'activité n'était pas préservée dans un tampon phosphate à pH 7.0 sans serum et incubée à 37ºC. La maintenance de l'activité dans ces conditions était quelque peu prolongée par l'addition de glycérine (2%) au milieu, et était nettement inhibée par la rifampicine, mais non par la pénicilline ni par l'isoniazide. A partir de ces résultats, on pourrait postuler que le pH optimal des milieux acellulaircs pour l'étude de la culture de M. leprae est 7.0.
Se investigo el efecto del pH de un medio libre de células sobre la actividad metabólica de Mycobacterium leprae incubado en ese medio. Como parámetro de la actividad se midió la cantidad de trifosfato de adenosina (ATP) extraído de las células colectadas por centrifugación. Los resultados demostraron que la actividad de M. leprae se mantuvo a niveles significantes a lo largo de 4 semanas de incubación a 30ºC en regulador de fosfatos 0.05 M, pH 7.0, con 10% de suero fetal de ternera. La actividad del microorganismo no se preservó cuando la incubación se hizo a 37ºC en regulador de fosfatos, pH 7.0, sin suero fetal de ternera. Bajo estas últimas condiciones la actividad se prolongó un poco cuando se adicionó glicerol al 2% al medio, y se inhibió completamente por la rifampina pero no por la penicilina o la isoniazida. De estos resultados se peude postular que el pH óptimo para el cultivo de M. leprae en medios libres de células es de 7.0.
Namita Misra; Venkatesh Ramesh; Radhey S. Misra; Nallakandy Panangadan Shankar Narayan; Michael Joseph Colston; Indira Nath
Skin biopsy and slit-skin smears F rom 46 leprosy patients and 4 nonleprosy patients were tested for the presence of Mycobacterium leprae by the polymerase chain reaction (PCR) using primers based on the sequence of the LSR/15 kD gene. The PCR was found to be specific and sensitive, with a detection level of 10 and 100 bacilli. PCR using skin biopsies gave a higher detection rate than did slit-skin smears, probably due to the higher density of bacilli in a 4-mm punch biopsy. Dot blot hybridization with radioactive probes was 10-fold more sensitive than the ethidium bromide staining. Eight patients who did not show acid-fast bacilli in tissues by the conventional methods were shown to have PCR-amplificd M. leprae DNA. False-negative results were obtained in 3 cases even though formal evidence for tissue inhibitors was absent.
Une biopsie cutanée et des frottis cutanés de 46 malades de la lèpre et 4 patients non-lépreux ont été testés pour la présence de Mycobacterium leprae par la réaction de polymerase en chaîne (PCR) en utilisant des amorces basées sur la séquence du gène LSR/15kD. On a trouvé la PCR sensible et spécifique, avec un taux de détection de 10 à 100 bacilles. La PCR sur des biopsies cutanées a donné un taux de détection plus élevé que la PCR sur frottis cutanés, probablement du fait de la densité plus élevée de bacilles dans une biopsie en poinçon de 4 mm. Une hybridization par "dot blot" avec des sondes radioactives était dix fois plus sensible que la coloration à l'ethidium-bromide. On a révélé de l'ADN de M. leprae amplifié par PCR pour huit patients qui n'avaient pas montré de bacilles acido-résistants par les méthodes conventionnelles. Des résultats faussement négatifs ont été obtenus dans trois cas malgré l'absence d'évidence formelle d'inhibiteurs tissulaires.
Se usaron biopsias de piel y extendidos de linfa cutánea de 46 pacientes con lepra y de 4 individuos sin lepra, para buscar la presencia de Mycobacterium leprae por la técnica de la reacción en cadena de la polimcrasa (PCR) usando iniciadores basados en la secuencia del gene LSR/15 kD. Se encontró que la PCR fue específica y sensible, con un nivel de detección entre 10 y 100 bacilos. La PCR usando biopsias de piel dio un mayor grado de detección que la PCR con extendidos de linfa cutánea, esto probablemente se debió a la mayor densidad de bacilos en la biopsia de 4 mm. La hibridización con sondas radioactivas fue 10 veces más sensible que la tinción con bromuro de etidio. Ocho pacientes que no mostraron bacilos en sus tej idos por las técnicas convencionales tuvieron DNA de M. leprae amplificado por PCR. En tres casos se observaron resultados falsos negativos aún cuando no hubieron evidencias formales de inhibidores tisulares.
Abdolnasser Rati; Helen D. Donoghue; John L. Stanford
In this study of leprosy patients apparently cured by dapsonc monotherapy, the polymerase chain reaction (PCR), one of the most reliable and sensitive DNA-bascd assays, was used for the specific detection of Mycobacterium leprae DNA. Sputum and slit-skin samples f rom 44 such patients at Baba Baghi Leprosy Sanatorium in Iran were examined. Primers for a 530-base-pair fragment of the gene encoding the 36-kDa antigen of M. leprae were used for the study. The PCR results were compared with microscopy for acid-fast bacilli. Of the 44 sputum samples, 2 were positive by PCR (4.5%) and of the 44 slit-skin swabs taken f rom the same patients, 10 were PCR positive (22.7%). Only one patient was PCR positive for both sputum and slit-skin specimens (2.3%). No positive results were found by acid-fast microscopy. In total, 11 of44 (25%) patients in this study were found to be PCR positive for M. leprae, and it was thought probable that this indicated the presence of live organisms. Particularly interesting was the statistically significant association of positive results f rom slit-skin swabs with paucibacillary rather than multibacillary leprosy. It is suggested that whereas relapse or immunological reaction in paucibacillary disease may result f rom surviving organisms, in multibacillary leprosy this may be due to re-infection.
Dans cette étude de malades de la lèpre apparemment guéris par une monothérapie à la dapsonc, la réaction de polymerase en chaîne (PCR), l'un des tests les plus fiables et les plus sensibles basés sur l'ADN, fut utilisée pour la détection spécifique d'ADN de Mycobacterium leprae. Des expectorations et des frottis cutanés de 44 de ces patients du Sanatorium Baba Baghi pour la lèpre ont été examinés. Des amorces pour un fragment pairé de 530 bases du gène encodant l'antigène de 36 kDa de M. leprae ont été utilisées pour l'étude. Les résultats de PCR ont été comparés avec la microscopic pour la recherche de bacilles acido-résistants. Parmi les 44 échantillons de crachats, 2 étaient positifs par PCR (4.5%) et des 44 frottis cutanés prélevés chez les mêmes patients, 10 étaient positifs à la PCR (22.7%). Seul un patient était positif pour les expectorations et les frottis cutanés (2.3%). Aucun résultat positif n'a été trouvé par microscopic Au total, 11 des 44 patients (25%) de cette étude ont été trouvés positifs à la PCR pour M. leprae, et il a semblé probable que cela indiquait la présence d'organismes vivants. D'un intérêt particulier était l'association statistiquement significative de résultats positifs à partir de frottis cutanés, pour la lèpre paucibacillairc plutôt que pour la lèpre multibacillaire. L'hypothèse est émise que, alors qu'une rechute ou une réaction immunologiquc dans la lèpre paucibacillairc peut être le résultat de bacilles survivants, celles-ci pourraient être dues à une reinfection dans la lèpre multibacillaire.
En esté estudio con pacientes con lepra aparentemente curada por monoterapia con dapsona, se usó la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección especifia del DNA de Mycoacterium leprae. Se examinaron el esputo y los extendidos de linfa cutánea de 44 pacientes del sanatorio liaba Baghi en Irán. Se usaron iniciadores para el fragmento de 530 pares de bases del gene del antigeno de 36 kD de M. leprae. Los resultados por PCR fueron comparados con los resultados por microscopía para bacilos ácido-resistentes. De las 44 muestras de esputo, dos resultaron positivas por PCR (4.5%) y de los 44 extendidos de linfa cutánea de los mismos pacientes, 10 fueron positivos por PCR (22.7%). Sólo un paciente fue PCR positivo tanto en el esputo como en los extendidos de linfa (2.3%). Por microscopía no se encontraron bacilos ácido-rcsistcntcs. En total, 11 de 44 (25%) pacientes en este estudio resultaron positivos para M. leprae por PCR; se pensó que esto podría indicar la presencia de organismos vivos. Fue particularmente interesante la asociación entre los resultados positivos de los extendidos de linfa cutánea, con la lepra paucibacilar más que con la multibacilar. Se sugiere que mientras que las recaídas o la reacción leprosa en los pacientes paucibacilares pueden resultar de la presencia de bacilos sobrevivientes, en la lepra multibacilar ésta pueden ser el resultado de reinfecciones.
Immunology of Mycobacterial Diseases (IMMYC) Steering Committee, World Health Organization
Preparations of armadillo-derived Mycobacterium leprae used in vaccine trials were analyzed using a combination of morphological, chemical and immunological criteria. When compared to more recent preparations, vaccine lots prepared in 1984 and 1985 were found to contain fewer intact bacilli and lower amounts of M. leprae antigens. These differences may be characteristic of the original preparations, or alternatively, may have arisen during prolonged storage. The early vaccine lots were those used in the recently published Venezuela trial.
Des préparations de Mycobacterium leprae provenant de tatous et utilisés pour des essais de vaccination ont été analysés sur base d'une série de critères morphologiques, chimiques et immunologiques. Comparés à des préparations plus récentes, on a trouvé que les lots vaccinaux préparés en 1984 et 1985 contenaient moins de bacilles intacts et de plus faibles quantités d'antigènes de M. leprae. Ces differences pourraient être des caractéristiques des préparations originales, ou au contraire être survenues durant leur stockage prolongé. Les lots vaccinaux anciens étaient ceux utilisés dans l'essai réalisé au Venezuela qui a fait l'objet d'une publication récente.
Se utilizó una combinación de criterios morfológicos, químicos, c inmunológícos, para analizar varias preparaciones de Mycobacterium leprae cultivado en armadillo que se han utilizado en distintos programas de vacunación contra la lepra. Se encontro que, comparadas con preparaciones mas recientes, los lotes de vacunas preparadas en 1984 y 1985 contuvieron menos bacilos intactos y menores cantidades de antigenos de M. leprae. Estas diferencias podrían ser características de las preparaciones origínales o, alternativamente, pudieron haberse originado durante el almacenamiento prolongada de las preparaciones vacunales. Los lotes mas antiquos fueron los usados en Venezuela durante el programa de vacunación cuyos resultados fueron recientemente publicados.
Leopoldo Santos-Argumedo; Fernando Guerra-Infante; Fausto Quesada-Pascual; Sergio Estrada-Parra
In this work we describe the purification and characterization of armadillo immunoglobulins. The IgM was precipitated using low-strength ionic solution and further purified by filtration through Scphadex G-200. The IgG was obtained in pure form by precipitation of serum with ammonium sulfate and DEAE-cellulose ion exchange chromatography. The purity of these immunoglobulins was evaluated by polyacrylamide gel electrophoresis. The results showed 28-kDa light chains and 55-kDa and 70-kDa heavy chains for IgG and IgM, respectively. The rabbit antibodies against these molecules were used to prepare fluorescein (FITC) and peroxidase conjugates. The FITC conjugate was used to quantify IgM-bcaring lymphocytes. An average of 17% of peripheral blood lymphocytes were sIgM+ f rom 14 healthy animals. Additionally, in the same animals we quantified lymphocytes with the capacity to form rosettes with sheep red-blood cells; the average for this marker was 10%. Also, the production of crossreacting antibodies to BCG was evaluated in healthy and Mycobacterium leprae -inoculated animals using the peroxidase conjugates. All animals with active infection recognized BCG antigens.
Dans ce travail, nous décrivons la purification et la caractérisation des immunoglobulincs de tatou. L'IgM a été précipitée en utilisant une solution ionique faible et purifiée par filtration à travers du Sephadex G-200. L'IgG a été obtenue sous forme pure par precipitation de serum avec du sulfate d'ammonium et chromatographic échangeuse d'ions sur cellulose DEAE. La pureté de ces immunoglobulines a été évaluée par élcctrophorèse en gel de polyacrylamide. Les résultats ont montré des chaînes légères de 28 kDa et 55 kDa et des chaînes lourdes de 70 kDa, respectivement pour les IgG et IgM. Les anticorps de lapin contre ces molécules ont été utilisés pour préparer des conjugués de lluorescéinc (FITC) et de peroxydase. Le FITC a été utilisé pour quantifier les lymphocytes porteurs d'IgM. Une moyenne de 17% des lymphocytes du sang périphérique de 14 animaux en bonne santé était positive pour les IgM. De plus, chez les mêmes animaux, nous avons quantifié la capacité des lymphocytes à former des rosettes avec des gobules rouges de mouton; la moyenne pour ce marqueur était de 10%. On a aussi évalué, avec les conjugués de peroxydase, la production d'anticorps réagissant de manière croisée au BCG chez des animaux en bonne santé et des animaux chez qui ont avait inoculé du Mycobacterium leprae. Tous les animaux avec une infection active ont reconnu les antigènes du BCG.
En este trabajo sc describe la purificación y caracterización de las inmunoglobulinas de armadillo. La IgM fue precipitada usando una solución de baja fuerza iónica y posteriormente purificada por filtración en Sephadex G-200. La IgG se obtuvo en forma pura por precipitación del suero con sulfato de amonio y cromatografía de intercambio iónico en DEAE celulosa. La pureza de las inmunoglobulinas se evaluó por electroforesisen gel de poliacrilamida. Los resultados mostraron cadenas ligeras de 28 kD y cadenas pesadas de 55 kD y 70 kD para IgG c IgM, respectivamente. También se prepararon anticuerpos de conejo contra estas moléculas. Los anticuerpos sc marcaron con lluorcsceína (FITC) Y peroxidasa. El conjugado con FITC sc usó para cuantilícar linfocitos con IgM membranal. En 14 animales sanos estudiados, un promedio de 17% de los linfocitos periféricos fueron sIgM4 . Adicionalmente, en los mismos animales se cuantificó la capacidad de los linfocitos para formar rosetas con eritrocitos de carnero; el promedio para este marcador fue del 10%. También se evaluó la producción de anticueropos reactivos con BCG en los animales sanos y en los inoculados con Mycobacterium leprae, usando los conjugados con peroxidasa. Todos los animales con infección activa reconocieron a los antigenos de BCG.
Christian Lienhardt; Heather Currie; Jeremy G. Wheeler
One of the major problems in leprosy is to detect any change in nerve function early enough so as to increase the chances of recovery and prevent disability. Several tests have been developed to assess nerve function and are used in leprosy control programs worldwide, but they are frequently performed by different workers on different occasions and under variable conditions. In this study we investigated the variability between different groups of observers in the assessment of nerve function in leprosy patients in Ethiopia. Sensory function was assessed by using a set of nylon monofilaments (NF) and a ball-point pen (BP), and motor function was assessed by using voluntary motor testing (VMT). We also studied the variability between observers in the assessment of the clinical signs of neuritis. Duplicate measurements were performed in random order on 50 leprosy patients by two physio-technicians and on 50 other patients by two health assistants. The percent agreement between observers was calculated for each single nerve, and weighted kappa statistics were used to assess whether agreement was better than expected due to chance alone. Systematic differences between observers were evaluated using the Wilcoxon signed rank test. On sensory testing, interobserver variability was found to be related to the training and experience of the observer, to the nerve tested, and to the neurological status of the patient.
When tests were performed by physiotechnicians, we observed 32% to 58% agreement with the NF test and 71% to 84% agreement with the BP test, measured on different scales. After weighting for the scale difference, the agreement seemed comparable with these methods but the differences in measurements with the BP test were found to be dependent upon the neurological status of the patient. The variability between observers differed according to the nerve tested, and there was some evidence of systematic differences between observers with both methods.
When performed by the health assistants, agreement was between 34% and 46% with the NF and between 66% and 82% with the BP tests. After weighting for the scale difference, the agreement seemed comparable but the BP was not liable to the systematic differences seen in the NF results. These differences could be attributed to the differences in the experience of the workers with these tests.
With the VMT, small variability between observers was found for all nerves tested, except the facial nerve, when performed by both the physio-technicians and by the health assistants (72% to 98% agreement). Change agreement, however, could not be excluded since the ratings were extremely homogenous. The assessment of neuritis signs was extremely variable between observers (14% to 41% agreement), with evidence ofa systematic difference between observers.
Implications of these findings are discussed with the view to improving comparability of the nerve function tests under field conditions for early detection of nerve damage in leprosy patients.
L'un des problèmes majeurs de la lèpre est la détection des modifications de la fonction nerveuse suffisamment tôt pour augmenter les chances de récupération et prévenir les incapacités. Différents tests ont été développés pour évaluer la fonction nerveuse et sont utilisés dans les programmes de lutte contre la lèpre à travers le monde, mais ils sont souvent exécutés par des personnes différentes à différentes occasions et dans des conditions variables. Dans cette étude, nous avons examiné la variabilité, entre différents groupes d'observateurs, de l'évaluation de la fonction nerveuse de malades de la lèpre en Ethiopie. La fonction sensorielle a été évaluée en utilisant des mono-filaments de nylon et la pointe d'un stylo à bille, et la fonction motrice par le test de motricité volontaire. Nous avons également étudié la variabilité de l'évaluation des signes cliniques de névrite parmi les observateurs. Des mesures doubles ont été réalisées dans un ordre aléatoire sur 50 malades de la lèpre par deux physio-techniciens et 50 autres malades par deux assistants sanitaires. Le pourcentage d'agrément entre les observateurs a été calculé pour chaque nerf, et un kappa pondéré a été utilisé au point de vue statistique pour évaluer si l'agrément était meilleur que celui attendu par le seul fruit du hasard. L'existence de différences systématiques entre les observateurs a été recherchée par le test de rang de Wilcoxon. Pour les tests sensoriels, on a trouvé que les différences inter-observateurs étaient associées à la formation et à l'expérience de l'observateur, au nerf testé et au statut nerologiquc du patient.
Quand les test étaient réalisés par des physio-techniciens, on a observé 32 à 58% d'agrément pour le test avec le filament de nylon et 71 à 84% d'agrément avec le test du stylo, mesurés sur des échelles différentes. Après pondération pour la différence d'échelle, l'agrément semblait comparable pour ces méthodes, mais on a trouvé que les différences de mesure avec le test du stylo dépendaient du statut neurologique du patient. La variabilité parmi les observateurs était différente scion le nerf testé, et il y avait des indices de différences systématiques parmi les observateurs avec les deux méthodes. Lorsque les tests étaient exécutés par les assistants sanitaires, l'agrément était entre 43% et 46% pour le test avec le filament de nylon, et entre 66% et 82% pour le test avec le stylo. Après pondération pour la différence d'échelle, l'agrément semblait comparable, mais le stylo n'était pas sujet aux différences systématiques observées dans les résultats des filaments de nylon. Ces différences pouvaient être attribuées à la différence d'expérience duc personnel par rapport à ces tests. Avec le test moteur volontaire, on a trouvé une petite variabilité parmi les observateurs pour tous les nerfs testés, à l'exception du nerf facial, quand ils étaient exécutés aussi bien par les physio-techniciens que par les assistants sanitaires (72% à 98% d'agrément). On n'a pas pu, cependant, exclure un agrément par chance, du fait que les scores étaient extrêment homogènes. L'évaluation des signes de névrite était extrêmement variable parmi les observateurs (14% à 41% d'agrément), avec des signes évidents de différences systématiques entre observateurs.
Les implications de ces observations sont discutées avec comme objectif l'amélioration de la comparabilité des tests de fa fonction nerveuse dans les conditions de terrain pour la détection précoce des altérations des nerfs chez les malades de la lèpre.
Uno de los prinicpales problemas de la lepra, es la detección de cambios en la función nerviosa lo suficientement temprano como para intentar mejorar las posibilidades de recuperación y prevenir el desarrollo de incapacidades. Se han desarrollado varias pruebas para establecer la función nerviosa y son de uso rutinario en los programas de control de la lepra en todo el mundo. Estas pruebas, sin embargo, se llevan a cabo por investigadores con diferentes preparación y bajo condiciones muy variables. En este estudio realizado en Etiopia, se investigó la variabilidad entre diferentes grupos de observadores encargados de valorar la función nerviosa en pacientes con lepra. La función sensorial se midió usando un juego de monofilamcntos de nylon (NF) y un bolígrafo (BP), y la función motora se estableció usando una prueba motora voluntaria (VMT). También se estudió la variabilidad entre los observadores al establecer los signos clínicos de neuritis.
Dos fisiotécnicos efectuaron mediciones, por duplicado, en 50 pacientes con lepra. En otros 50 pacientes, las mediciones fueron efectuadas por 2 asistentes de salud. Se calculo el porcentaje de concordancia entre los observadores para cada uno de los nervios y se usó una prueba estadística para establecer si la concordancia fue mejor que lo esperado tan solo por azar. Las diferencias sistemáticas entre los observadores se evaluaron usando la prueba de rangos de Wilcoxon. Se encontró que en la prueba sensorial, la variabiliad entre los observadores estuvo relacionada con el entrenamiento y la experiencia del observador, con el nervio probado, y con el estado neurológico del paciente.
Cuando las pruebas se efectuaron por los fisiotecnicos se observó una concordancia del 32 al 58% con la prueba del NF y del 71 al 84% con la prueba BP, medidas en diferentes escalas. Después de las correcciones necesarias, la concordancia pareció comparable con estos dos métodos pero también se encontró que las diferencias en las mediciones con la prueba de BP fueron dependientes del estado neurológico del paciente. La variabilidad entre los observadores difirió según el nervio probado, y hubieron diferencias sistemáticas (consistentes) entre los observadores con ambos métodos.
Cuando se efectuaron por los asistentes de salud, la concordancia estuvo entre el 43 y el 46% con la prueba NF y entre el 66 y el 82% con la prueba BT. Después de corregir por la diferencia en escalas, la concordancia pareció comparable pero la prueba BP no estuvo relacionada con las diferencias sistemáticas observadas en los resultados con la prueba de NF. Estas diferencias pueden atribuirse a diferencias en la experiencia de los observadores con estas pruebas.
Con la prueba VMT se encontró pequeña variabilidad para todos los nervios probados, excepto para el nervio facial, cuando se efectuó tanto por los fisiotécnicos como por los asistentes de salud (concordancia del 72 al 98%). El establecimiento de los signos de neuritis fue extremadamente variable entre los observadores (concordancia del 14 al 41%) y las diferencias entre ellos fueron consistentes.
Se discuten las implicaciones de estos hallazgos con la idea de mejorar la comparabilidad de las pruebas de función nerviosa bajo condiciones de campo para la detección de daño nervioso temprano en los pacientes con lepra.
Mary E. Lewis; Charlotte A. Roberts; Keith Manchester
The extent and location of an inflammatory bone lesion, periostitis, were examined in 50 leprous skeletons f rom the Chichester cemetery of the Hospital of St. James and St. Mary Magdalene in Sussex, England. Although the presence of periostitis is not pathognomonic of leprosy, it predominantly indicates dermal and neuropathic changes that the patient would have presented in life. The spread of inflammation across the knee joint and the ossification of the interosseous membrane due to inflammation are also suggested.
L'étendue et la localisation d'une lésion osseuse inflammatoire, la periostite, ont été examinés sur 50 squelettes de malades de la lèpre provenant du cimetière de Chichester de l'Hôpital de Saint Jacques et Sainte Marie-Madeleine dans le Sussex, en Angleterre. Bien que la présence d'une periostite ne soit pas pathognomonique de la lèpre, elle indique de manière prédominante des altérations dermiques et neuropathiques que le patient aurait présenté au cours de sa vie. Il y a également des indices de la propagation de l'inflammation au travers de l'articulation du genou et l'ossification de la membrane interosseuse suite à l'inflammation.
Se examinó el grado y la localización de lesiones óseas inflamatorias, periostitis, en 50 esqueletos de personas con lepra del cementerio Chichester del Hospital de St. James y St. Mary Magdalene, en Sussex, Inglaterra. Aunque la presencia de periostitis no es patognomónica de la lepra, indica predominantemente los cambios dérmicos y neuropáticos que el paciente debió haber tenido en vida. También se sugirió la probable diseminación de la inflamación a través de la articulación de la rodilla y la osificación de la membrana interósea debido a la inflamación.
EDITORIAL
CLINICAL NOTES
Sandipan Dhar; Inderjeet Kaur; Vinod K. Sharma; Bhushan Kumar
CORRESPONDENCE
Celina M. T. Martelli; Ana Lucia S. S. Andrade; Maria Aparecida F. Grossi; Maria Ana A. Leboeuf; Clovis Lombardi; Fabio Zicker
Hamdy Mahfous Mostafa; Jindrich Kazda; Lorentz M. Irgens; Hans Gerd Luesse
V. Sticht-Groh; G. Bretzel; D. Harmsen; J. Heesemann; M. Ishaque
Young-Hoon Seo; Wook Cho; Hae-Young Choi; Yong-Ma Hah
Raul N. Fleury; Cristina M. Aranda
Kunal Saha; Debasis Chattopadhya; Arvind Kashyup; Uma Agarwal; Asit K. Chakrabarty
P. Jayalakshmi; T. Ganesapillai; J. Ganesan
Sandipan Dhar; Inderjeet Kaur; Vinod K. Sharma; Bhushan Kumar
Ebenezer Daniel; Rebecca Alexander; Shirley Chacko
BOOK REVIEWS
NEWS AND NOTES
CURRENT LITERATURE
ACKNOWLEDGMENT